Микробиология полости рта
Занятие 3.
Тема: Кариесогенная микрофлора.
Цель:
1. Изучить биологические особенности кариесогенной микрофлоры и ее участие в патогенезе кариеса.
2. Освоить методы микробиологической оценки факторов риска, определяющих вероятность развития кариеса.
Знать:
1. Кариесогенные микроорганизмы и их биологические особенности.
2. Особенности динамики развития кариозного процесса.
3. Методы микробиологической оценки факторов риска, определяющих вероятность развития кариеса.
Уметь:
1. Готовить и микроскопировать препараты из содержимого кариозной полости и интерпретировать полученные результаты.
2. Учесть и оценить результаты экспресс-теста Clinpro Cario L-Pop с целью диагностики начального кариеса.
3. Учесть и оценить результаты CTR - теста для определения концентрации S. mutans и Lactobacillus spp. с целью оценки риска возникновения кариозного процесса.
Контрольные вопросы:
1. Классификация основных кариесогенных микроорганизмов.
2. Морфо-биологические свойства кариесогенных микроорганизмов.
3. Роль микроорганизмов зубного налета в развитии кариеса зубов и оппортунистических заболеваний.
4. Методы микробиологической оценки факторов риска, определяющих вероятность развития кариеса.
5. Основные направления иммунной профилактики кариеса зубов.
УИРС:
1. Промикроскопировать препарат-мазок из зубной бляшки в начальной стадии формирования и препарат-мазок из «зрелой» зубной бляшки, окрашенные по Граму. Оценить полученные результаты.
2. Промикроскопировать препарат из содержимого кариозной полости, окрашенный по Граму. Оценить полученные результаты.
3. Промикроскопировать окрашенные по Граму препараты из чистых культур основных кариесогенных микроорганизмов (стрептококки, лактобациллы и актиномицеты).Изучито морфо-тинкториальные свойства.
4. Учесть и оценить результаты экспресс-теста Clinpro Cario L-Pop.
5. Учесть и оценить результаты CTR - теста, для определения концентрации S. mutans и Lactobacillus spp.
Методические указания к выполнению исследовательского задания.
1. Промикроскопируйте демонстрационный препарат-мазок из зубной бляшки в начальной стадии формирования и препарат-мазок из зрелой зубной бляшки, окрашенные по Граму. Результаты занесите в протокол, сделайте вывод.
В зубной бляшке на ранних стадиях формирования преобладают аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы – стрептококки, стафилококки, нейссерии, лактобактерии. По морфологии преобладают кокковые формы и короткие палочки.
Зрелая зубная бляшка представляет собой скопление огромного количества микроорганизмов. В отличие от «ранней» зубной бляшки в «зрелой» зубной бляшке подавляющее большинство микроорганизмов – строгие и факультативные анаэробы. По морфологии – выявляют кокки, огромное количество длинных нитевидных форм, часто с адсорбированными на них кокками. По видовому составу это бактероиды, фузобактерии, вейллонеллы, актиномицеты, стрептококки, пептострептококки, лептотрихии и др. (См. приложение к занятию №2).
2. Промикроскопируйте демонстрационный препарат, приготовленный из содержимого кариозной полости, окрашенный по Граму. Оценитеполученные результаты и занесите их в протокол.
При микроскопии содержимого кариозной полости обнаруживают большое количество самых разнообразных по морфологии микроорганизмов. Грамположительные кокки представлены стрептококками, пептострептококками; грамположительные палочки -лактобациллами, актиномицетами, нокардиями; грамотрицательные кокки представлены нейссериями, грамотрицательные палочки – бактероидами и превотеллами.
Описание морфологии бактерий см. приложение к занятию №2.
Методика забора материала из кариозной полости.
Сначала из кариозной полости стерильным бором убирают поверхностные слои размягченного дентина, смоченного слюной. Не допуская попадания в исследуемый материал слюны, другим стерильным бором обрабатывают полость и забирают дентин с помощью стерильной гладилки.
3. Промикроскопируйте окрашенные по Граму препараты из чистых культур основных кариесогенных микроорганизмов (стрептококки, лактобациллы и актиномицеты). Изучите морфо-тикториальные свойства.
4. Учтите и оцените результаты экспресс-теста Clinpro Cario L-Pop.
Экспресс-тест Clinpro Cario L-Pop предназначен для диагностики кариеса на самых ранних стадиях его развития и оценки кариесогенности микрофлоры пациента. Принцип действия теста заключается в определении концентрации молочной кислоты, которая вырабатывается бактериями – возбудителями кариеса, содержащимися в определенном количестве в ротовой жидкости у каждого индивидуума.
Методика: Обследуемый обильно смачивает слюной поверхность языка. К верхней поверхности передней трети языка обследуемого прикладывают тестовую палочку (содержащую сахарозу) и вращательными движениями промакивают ватную головку тестовой палочки слюной. Сразу после взятия материала ватную головку палочки помещают в специальный контейнер, где находится смесь растворов фермента (лактатдегидрогеназы) и индикатора. Оставляют в этой смеси индикаторную палочку на 2 минуты. По истечении этого времени тестовую палочку вынимают из контейнера и без промедления оценивают результат.
Учет и оценка результатов: сравните интенсивность сине-фиолетовой окраски индикаторной палочки с соответствующими образцами, приведенными в таблице цветов. Сравнение необходимо проводить при нормальном дневном освещении.
Цвет индикаторной палочки соответствует цвету 1, 2 и 3 квадратов – низкий уровень риска возникновения кариеса;
Цвет индикаторной палочки соответствует цвету 4, 5 и 6 квадратов – средний уровень риска возникновения кариеса;
Цвет индикаторной палочки соответствует цвету 7, 8 и 9 квадратов – высокий уровень риска возникновения кариеса.
5. Учтите и оцените результаты микробиологического теста оценки индивидуального риска возникновения кариеса (CTR-теста).
CTR-тест основан на подсчете количества Lactobacillus spp и S. mutans (основных кариесогенных микроорганизмов) в ротовой жидкости и определении буферной емкости слюны.
Методика. Из смешанной слюны готовят десятикратные разведения и засевают на специальные пластины с элективной питательной средой. С одной стороны среда для роста S. mutans,с другой – для лактобацилл.
Учет результатов. Подсчитывают число колоний на каждой стороне пластины. Определяют количество S. mutans и лактобацилл с учетом посевной дозы и разведения.
Оценка результатов. Оценку количества микроорганизмов проводят по следующим критериям:
Концентрация в 1 мл слюны
S. mutans 104-105 КОЕ – норма
105-106 КОЕ – высокая
>106 КОЕ – чрезвычайно высокая
Lactobacillus spp. < 105 КОЕ – норма
>105 КОЕ – высокая
Далее интерпретацию полученных результатов бактериологического анализа проводят на основании прилагаемых таблиц. Сделайте вывод о степени индивидуального риска возникновения кариеса. Предложите профилактические мероприятия.
Вопросы для самоконтроля:
1. Назовите локализацию зубного налета и перечислите его компоненты.
2. Назовите стадии и механизмы формирования зубного налета.
3. Механизм формирования пелликулы.
4. В чем заключается химическая модификация гликопротеинов слюны перед осаждением на эмали зуба.
5. Как изменяются свойства гликопротеинов после химической модификации.
6. Назовите основные неклеточные компоненты зубной бляшки.
7. Укажите субстрат, из которого образуются декстраны и леваны.
8. Назовите микроорганизмы, образующие наибольшее количество декстранов и леванов.
9. Укажите значение декстранов и леванов при формировании зубной бляшки.
10. Охарактеризуйте изменение видового и количественного состава микрофлоры при созревании зубной бляшки.
11. Классификация, морфо-биологические особенности кариесогенной микрофлоры – S. mutans, Lactobacillus spp., Actinomicetalis spp.
12. Обоснуйте роль зубной бляшки в возникновении кариеса.
13. Роль ферментов микроорганизмов зубного налета в возникновении оппортунистических заболеваний полости рта.
14. Значение гликолиза в деминерализации эмали.
15. Значение процессов деминерализации и реминерализации в развитии кариеса.
16. Какие факторы (эндогенные, экзогенные) влияют на развитие кариеса.
17. Назовите факторы, обуславливающие резистентность к кариесу.
18. Каковы перспективы создания препаратов специфической терапии и профилактики кариеса.
19. Назовите методы исследования индивидуального риска возникновения кариеса, их суть.
Литература:
Учебники:
1. Поздеев О.К. Медицинская микробиология /Под ред. акад. РАМН В.И.Покровского. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. – С. 551-554.
2. Медицинская микробиология, иммунологии, вирусология /Под ред. Л.Б.Борисова, А.М.Смирнова. – М.: Медицина, 1994. – С.497-500.
3. Медицинская микробиология, иммунологии, вирусология. Борисов Л.Б. – М.: МИА, 2002. – С. 693 - 697.
Дополнительная:
1. Левицкий А.П., Мизина И.К. Зубной налет.- К.: Здоровье, 1987. –С. 32-42.
2. Новое в стоматологии – 2003, №6 – С. 2, 21-24, 26-29, 31-35, 37-41.
Лекции по микробиологии полости рта.