Санитарно-микробиологические показатели санитарного состояния почвы делят на косвенные и прямые:
I. Косвенные показатели характеризуют интенсивность биологической нагрузки напочву.
К ним относят следующие санитарно-показательные микроорганизмы:
1. Бактерии группы кишечной палочки (общие колиформные бактерии)
2. Энтерококки.
II. Прямые санитарно-микробиологические показатели эпидемической опасности почвы — возбудители кишечных инфекций (патогенные энтеробактерии и энтеровирусы).
III. Для углубленной оценки санитарного состояния почвы и способности ее к самоочищению исследуют показатели биологической активности почвы.
Основными показателями являются:
1. Общая микробная численность (ОМЧ)
2. Клостридии
3. Термофильные бактерии
4. Грибы и актиномицеты
5. Аммонификаторы
6. Аэробные целлюлозные микроорганизмы и т.д.
Содержание санитарно-показательных микроорганизмов в почве выражают через индекс БГКП и индекс энтерококков.
Выявление высокого индекса БГКП при низких титрах нитрификаторов, термофилов и высокое содержание вегетативных форм C. perfringens свидетельствует о свежем фекальном загрязнении.
Обнаружение энтерококков также указывает на свежее фекальное загрязнение.
Для контроля загрязнения почв территорий детских и образовательных учреждений, спортивных, игровых, детских площадок, площадок жилой застройки, площадок отдыха, зон рекреации, зон санитарной охраны водоемов, прибрежных зон, санитарно-защитных зон отбор проб проводят не менее 2 раз в год – весной и осенью. На других контролируемых объектах анализ почвы проводят не реже 1 раза в год.
3.1.1. Отбор проб почвы. Пробы почвы следует отбирать и подготавливать к анализу с соблюдением условий асептики: забирать стерильным инструментом (ножом, шпателем или почвенным буром), помещать пробы в стерильную тару, перемешивать на стерильной поверхности, использовать стерильные пестики и другие инструменты.
Пробная площадка – часть исследуемой территории, характеризующаяся сходными условиями (рельефом, однородностью структуры почвы и растительного покрова, характером хозяйственного использования.
При обследовании 100м2 закладывается 1 пробная площадка размером не менее 5м х 5м. С пробной площадки отбирают 5 проб «по типу конверта» (по углам и из центра).
Точечная проба – материал, взятый из одного места горизонта или одного слоя почвенного профиля, типичный для данного горизонта или слоя.
Выкапывается шурф 0,3м х 0,3м и глубиной 0,2м. Одна стенка шурфа зачищается стерильным ножом, после чего вырезают почвенные образцы массой от 200 до 250 г каждая, взятых послойно с глубины от 0 до 5см, от 5 см до 20 см.
Объединенную пробу составляют, перемешивая 3 точечные пробы, отобранные послойно на одной пробной площадке. Для бактериологического анализа с одной пробной площадки составляют 10 объединенных проб.
Подготовка к анализу. Из объединенной пробы готовят средний образец объемом 0,5 кг. Удаляют грубодисперсные частицы, просеивают через сито. Из просеянной диспергированной почвы отбирают навески от 1 до 10 г. Отобранную навеску разводят стерильной водопроводной водой до получения пастообразного состояния. Из суспензии готовят первое или основное разведение навески 1:10, то есть на 1 г почвенной суспензии берут 9,0 см3 воды. После 10 минутного вертикального встряхивания первого разведения почвы на мешалке механического диспергатора готовят 10-кратные разведения почвенной суспензии до 0,0001-0,00001 г/см3 (10-4-10-5).
Выявление косвенных показателей
Определение общих колиформных бактерий (БГКП)
Показатель БГКП идентичен показателю «общие колиформные бактерии» (ОКБ).
ОКБ — грамотрицательные, неспоровые, оксидаза-отрицательные палочки, способные развиваться в присутствии солей желчных кислот или других поверхностно-активных агентов с аналогичной способностью к подавлению роста. Ферментируют лактозу при
35-37 оС за 24-48 час с образованием кислоты, газа и альдегида, т.е. на среде Эндо лактозоположительные колонии дают отпечаток в течение 24-48 час.
В зависимости от загрязнённости почвы БГКП можно определять титрационным методом для почв с невысокой степенью фекального загрязнения), либо методом мембранных фильтров (для слабозагрязненных почв), либо методом прямого посева на среду Эндо (для почв с высокой степенью загрязнения).
Чаще используют титрационный метод.
Титрационный метод
Из разведения 1:10 почвенной суспензии 10 см3 засевают на 90 см3 среды Кесслера, остальные разведения сеют по 1 см3 в 9 см3 среды. Посевы выращивают при температуре 37 оС 48 часов. При отсутствии роста (помутнение, газообразование) дают отрицательный ответ. При наличии помутнения и газообразования или при наличии только помутнения делают высев на среду Эндо. Чашки с посевами инкубируют при 37 оС 18-24 час. Отбирают розовые, красные или малиновые с металлическим блеском колонии, изучают морфологические, тинкториальные свойства, ставят оксидазный тест. По 2-3 колонии каждого типа (грамотрицательные, оксидазаотрицательные) засевают параллельно в 2 в пробирки с полужидкой или жидкой с поплавком средой с лактозой, инкубируют в термостате 37 оС 18-24 час. При ферментации лактозы с образованием кислоты и газа дают положительный ответ на БГКП.
Результаты выражают в величинах коли-индекса.
Норматив. Индекс БГКП 1-10 клеток/г почвы
Метод мембраной фильтрации. Используют в качестве ускоренного метода. Применяют фильтры с диаметром пор 0,45 мкм и размером диска 35 или 47 мм. Фильтруют 5,0-10,0 см3 почвенной суспензии первого разведения (1:10) через мембранные фильтры, сеют на дифференциальную питательную среду с лактозой, отбирают подозрительные колонии, идентифицируют бактерии по культуральным и биохимическим свойствам.
Метод прямых поверхностных посевов. Применяют при анализе загрязненных и сильно загрязненных почв.
На среду Эндо засевают по 0,1 или 0,2 см3 разведений почвы: от 10-1 до 10-3 для сравнительно чистых почв, из разведений до 10-5 и 10-6 для сильно загрязненных почв. Среды обычно используют подсушенные. Растирают посев шпателем. Инкубация посевов 37 оС 24 часа. Дальнейшая идентификация аналогична рассмотренной выше (в титрационном методе, начиная со среды Эндо). Посчитывают количество колиформных бактерий в 1 г почвы, для чего среднее число колиформных колоний, выросших на чашках, умножается на степень десятикратного разведения. Результаты выражают в количестве КОЕ/г.
Норматив. До 10 КОЕ/г