Микробиологическая диагностика дизентерии

Лабораторная диагностика эшерихиозов и дизентерии

Задания для выполнения лабораторной работы

1. Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей кишечных инфекций.

2. Бактериологическая диагностика эшерихиозов:

а) выбрать материал для исследования;

б) учесть результаты первичного посева исследуемого материала на среду Эндо. Описать и зарисовать колонии, выросшие на среде Эндо, и обосновать выбор подозрительных колоний для дальнейшего исследования;

в) провести серологическую идентификацию чистой культуры, полученной из подозрительных колоний, в ориентировочной реакции агглютинации на стекле с агглютинирующими ОВ-коли-сыворотками (серотипирование). Сделать вывод и наметить план дальнейшего анализа.

3. Бактериологическая диагностика дизентерии:

а) выбрать материал для исследования;

б) учесть результаты первичного посева исследуемого материала на среду Эндо. Описать и зарисовать колонии, выросшие на среде Эндо, и обосновать выбор подозрительных колоний для дальнейшего исследования;

в) учесть результаты пересева подозрительных колоний на среду Ресселя;

г) провести идентификацию чистой культуры:

• по биохимическим свойствам,

• по антигенным свойствам в ориентировочной реакции агглютинации на стекле с агглютинирующими сыворотками для идентификации шигелл. Сделать вывод и наметить план дополнительных исследований.

4. Ознакомиться с диагностическими и лечебно-профилактическими препаратами.

Методические указания

Материал для исследования: фекалии, ректальные мазки, соскобы со слизистой оболочки.

Микробиологическая диагностика эшерихиозов

Бактериологическое исследование (схема 4). Является ведущим в диагностике эшерихиозов. Фекалии засевают на чашки со средой Эндо для получения изолированных колоний. Патогенные E. coli по основным биологическим свойствам (морфологии, культуральным и биохимическим признакам) не отличаются от непатогенных эшерихий - представителей нормальной микрофлоры кишечника. Для отбора подозрительных колоний применяют метод серотипирования. Материал из лактозоположительных колоний используют для постановки реакции агглютинации на стекле со смесью ОВ-сывороток, содержащих антитела против наиболее распространенных сероваров патогенных эшерихий. Обычно проверяют на агглютинабельность не менее 10 колоний с каждой чашки. При положительном результате ставят реакцию с моноспецифическими сыворотками: О26:В6, О55:В5, О111:В4, О124: В 17 и др., после чего делают предварительное заключение. Затем пересевают несколько агглютинабельных колоний на скошенный питательный агар для получения чистых культур. На 3-й день проверяют агглютинабельность чистых культур в реакции на стекле с ОВ-сыворотками. При положительном результате ставят развернутую реакцию агглютинации с соответствующей ОВ-сывороткой.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. При молекулярно-биологических исследованиях материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР.

Схема 4. Бактериологическое исследование при эшерихиозах

Микробиологическая диагностика дизентерии

Бактериологическое исследование (схема 5).Фекалии больного засевают на дифференциально-диагностические среды (агар Эндо, Плоскирева и др.). При наличии в исследуемых испражнениях гнойных или слизисто-кровянистых комочков их выбирают петлей, промывают в изотоническом растворе хлорида натрия и наносят на поверхность питательной среды, после чего растирают шпателем.

На 2-й день лактозоотрицательные (прозрачные бесцветные) колонии пересевают на среду Ресселя или на короткий "пестрый ряд" с лактозой и глюкозой.

Среда Ресселя: питательный агар, 1 % раствор лактозы, 0,1 % раствор глюкозы и индикатор бромтимоловый синий. Среду готовят таким образом, чтобы внизу она была в виде столбика, а верхняя часть имела скошенную поверхность. Исследуемую культуру засевают уколом в столбик и на поверхность среды. При ферментации углеводов происходит изменение цвета среды (желтая окраска); разрывы столбика свидетельствуют о газообразовании. Изменение цвета во всем объеме среды наблюдается при ферментации лактозы, только столбика - при ферментации глюкозы, так как содержание ее в среде в 10 раз меньше, чем лактозы. Вместо среды Ресселя можно использовать трехсахарную среду (в ее состав входят глюкоза, лактоза, сахароза, мочевина, некоторые соли и индикатор феноловый красный) или другие дифференциально-диагностические среды, позволяющие различать бактерии по способности ферментировать лактозу и глюкозу. Оставшуюся часть колоний используют для постановки ориентировочной реакции агглютинации на стекле со смесью дизентерийных сывороток и смесью сывороток против сальмонелл (для исключения брюшного тифа или сальмонеллеза). Окончательное заключение дают на 4-й день по результатам ферментативных тестов (табл. 4) и реакции агглютинации. Выделенную чистую культуру используют для определения чувствительности возбудителя к антимикробным препаратам.

Таблица 4. Биохимические признаки бактерий рода Shigella

Условные обозначения: (+) - положительная реакция; (-) - отрицательная реакция; [+] - поздняя реакция; В - вариабельная реакция.

Экспресс-методы диагностики. При биохимических и молекулярно-биологических исследованиях материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР.

Схема 5. Микробиологическое исследование при дизентерии

Серодиагностика. Применяют для ретроспективного обоснования диагноза дизентерии при стертых и хронических формах. Ставят развернутую реакцию агглютинации по типу реакции Видаля и РПГА с эритроцитарными диагностикумами Флекснера и Зонне. Диагностическим титром при дизентерии, вызванной шигеллами Флекснера, считают разведение 1:200, а шигеллами Зонне - 1:100.

Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Агглютинирующие ОВ-сыворотки против патогенных кишечных палочек: ОВ-коли-сыворотка О26:В6, ОВ-коли-сыворотка О111:В4, ОВ-коли-сыворотка О55:В5 и др. Получают путем иммунизации кроликов взвесью эшерихий соответствующего серовара и применяют в реакции агглютинации для идентификации патогенных эшерихий.

Адсорбированные агглютинирующие сыворотки для идентификации шигелл. Различают групповые и моновалентные сыворотки. Получают путем иммунизации кроликов определенными видами и сероварами S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei с последующей адсорбцией межгрупповых и других лишних антител.

Поливалентный дизентерийный бактериофаг. Содержит фаги, лизирующие шигеллы Флекснера и Зонне. Выпускается в виде таблеток с кислотоустойчивым покрытием. Применяют для экстренной профилактики и лечения.

Дизентерийная вакцина спиртовая, сухая. Содержит шигеллы Флекснера и Зонне. Применяют для лечения хронических форм дизентерии.

Препараты эубиотиков - коли-бактерин, бифидумбактерин, бификол, лактобактерин. Применяют с лечебно-профилактическими целями.

Антибиотики: полусинтетические пенициллины, цефалоспорины 2-4-го поколений, хлорамфеникол, тетрациклины, фторхинолины, сульфаниламиды, полимиксин и др.