М. Е. Вартанян, Г. И. Коляскина, Д. В. Лозовский, Г. Ш. Бурбаева, С. А. Игнатов (1978)
Концепция аутоантигенных свойств мозговой ткани сформировалась в конце 19 столетия, когда И. И. Мечников продемонстрировал цитотоксический эффект антисыворотки против мозговой ткани.
Позднее Хорошко предположил возможное участие аутоиммунных механизмов в развитии нервных и психических заболеваний.
Затем интерес к аутоиммунным механизмам развития нервных и психических заболеваний практически исчез на некоторый период времени. Появлялись лишь отдельные исследования, посвященные этой проблеме. В 30-е годы нашего столетия Lehman-Facius, используя метод флокуляции липидов, обнаружил антимозговой фактор в крови больных шизофренией.
В 60-ые годы интерес к иммунологическим исследованиям в области психических заболеваний появился вновь. Fessel, Heath в США и группой советских исследователей была сделана попытка продемонстрировать присутствие антител к мозговой ткани в сыворотке крови больных шизофренией.
В наши дни значимость некоторых из выше упомянутых исследований имеет главным образом исторический интерес Другие, однако, требуют дальнейшего подтверждения и более глубокого развития.
Тем не менее, эти исследования послужили хорошим стимулом для более интенсивного развития иммунологических исследований при шизофрении.
С одной стороны были начаты детальные исследования антигенов мозговой ткани с целью идентификации тех из них, антитела к которым обнаруживаются при шизофрении. С другой стороны, были начаты интенсивные исследования иммунологически компетентных клеток.
Как можно видеть на таблице 1, целая серия мозгоспецифических белков была изолирована в последние годы. Однако, до сих пор нет данных об их роли в патологии.
|
|
Исходя из этого и базируясь на факте, что при шизофрении можно предположить наличие аутоиммунного компонента, мы начали в последние годы изучать органоспецифические цитоплазматические антигены человеческого мозга.
Мы использовали кору мозга нормальных индивидуумов, погибших от несчастного случая. Образцы мозга были получены не позднее 8 часов после наступления смерти. Источником антигенов служил экстракт водно-солевых белков в фосфатном буфере после гомогенизации и центрифугирования при 100000 g. Разделение мозговых белков проводилось с помощью ионообменной хроматографии на ДЕАЕ-целлулозе.
Таблица 1. Данные об изолированных мозгоспецифических белках
| Белки | Характеристики | Локализация |
| S-100 | Гетерогенный белок MW 15.000-71.000 ЕМ преальбумина | Глия |
| 14-3-2 | Белок MW 40.000 ЕМ а-глобулина | Нейрон |
| а-антиген | Белок MW 39.000 ЕМ а-глобулина | Нейрон |
| 10В а2-гликопротеин | Гликопротеин ЕМ а-глобулина Гликопротеин MW 45.000-50.000 ЕМ а2-глобулина | Глия |
| GFA | Белок MW 43.000 ЕМ а-глобулина | Глия |
| NP рибонуклеопротеид | Нуклеопротеин MW 25.000 | Глия |
| GP-350 | Сиалогликопротеин MW 11.600 | Нейрон |
| Protein unique to the olfactory bulb | MW 20.000 | |
| D1D3 g! (синаптин) | Нейрон Синаптосомальные мембраны Синаптосомальные пузырьки | |
| NS-1 NS-2 NS-3 NS-4 | Поверхностная глия Мембраны нейронов | |
| GM-1 GM-2 GM-10 GM-11 | у- глобулин р2-у-глобулин а2-глобулин а-глобулин | |
MW — молекулярный вес
ЕМ — электрофоретическая подвижность
Как можно видеть на рисунке 1, белки, имеющие изоэлектрическую точку выше рН 7,0, разделялись на колонке на 4—5 фракций, которые обозначались как 1, 2, 3, 4, 5. В некоторых экспериментах можно было видеть еще 1 или 2 пика, содержащих следовые количества белков. Белки с изоэлектрической точкой ниже рН 7,0 можно было разделить также на 4 или 5 фракций, которые обозначались как 10, 11, 12, 13, 14.
|
|
Для изучения антигенного состава этих фракций была использована кроличья антисыворотка к белкам упомянутого экстракта коры мозга человека, абсорбированная белками печени и сыворотки крови человека. Кроме того, в некоторых экспериментах для идентификации мозгоспецифических антигенов мы использовали антимозговые антитела, полученные из иммунной сыворотки методом аффинной хроматографии. Чтобы усилить преципитационные дуги в препаратах иммунодиффузии использовали меченые 1251 бараньи антитела к кроличьему глобулину с последующей авторадиографией. С помощью двойной диффузии и иммуноэлектрофореза было показано, что мозгоспецифические антигены выявляются только во фракциях 1, 2, 10 и 11 (рис. 1).
Рис 1. Ионообменная хроматография мозговых антигенов на ДЕАЕ-целлулозе.
Иммуноэлектрофрез с использованием абсорбированной антисыворотки показал наличие во фракции 10 двух антигенов с подвижностью а2-глобулина (который всегда дает типичное окрашивание в присутствии гликопротеинов) и (а1 — глобулина, а во фракции 11 — только одного антигена с подвижностью а1- глобулина.
Антигены во фракциях 1 и 2 выявлялись только с помощью авторадиографии. В них всегда выявлялся антиген с подвижностью Р3-у-глобулина. В некоторых экспериментах мы могли выявлять еще один антиген с подвижностью Ру-глобулина.
|
|
Сравнение свойств антигенов, обнаруженных нами, с антигенами, описанными в литературе, привело нас к следующим заключениям. Антиген с электрофоретической подвижностью азглобулина, выявленный нами, не был идентичен прежде описанным негликопротеинам S-100,14—3-2, ос-гликопротеину, GPA, NP- рибонуклеопротеину или ДНК-110. Было доказано, что а2-глико-протеин и cxj-гликопротеин, описанный Warecka, несмотря на некоторые различия в методах приготовления белкового экстракта из цельного мозга и изоляции антигенов, сходны с нашими <х2- и otj-глобулинами на иммуноэлектрофореграммах антимозговых антител, изолированных с помощью аффинной хроматографии. ЮВ-гликопротеин, описанный Bogoch, является ос2-глобулином и фракция, содержащая его, изолировалась почти при тех же самых условиях, что наша фракция 10. Все это позволяет заключить, что Warecka, Bogoch и мы могли иметь дело с одним и тем же антигеном.
Что касается 2 антигенов с подвижностью Р2-у- и у-глобулина, обнаруженного как в тотальном экстракте, так и во фракциях 1 и 2, в доступной нам литературе мы не нашли каких-либо сведений об этих антигенах мозга человека. Указания на присутствие антигенов с такой электрофоретической подвижностью мы встретили только в исследованиях, проводимых на мозге крыс, кошек и быков.
Более исчерпывающие и сравнимые данные о мозгоспецифических антигенах человека, позволяющих их систематизацию, требуют исследования, основанного на унифицированном иммунохимическом тестировании.
На первой стадии необходимо было оценить активность антигена всех изолированных фракций в реакции связывания комплемента (РСК) с сывороткой крови больных шизофренией, рассеянным склерозом (PC) и боковым амиотрофическим склерозом (БАС). Основная антигенная активность обнаруживалась во фракциях 2 и 10, хотя в низких титрах реакция была позитивной при использовании фракций 11 и иногда 1. Поэтому проводился анализ данных, полученных при изучении взаимодействия сыворотки крови больных и здоровых с 2 наиболее активными фракциями. Эти результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2. Частота антимозговых антител в группах обследованных
| Группы обследованных | N | Позитивная РСК с различными препаратами антигенов | ||
| Белковый экстракт | Фракция 2 | Фракция 10 | ||
| Шизофрения | 44,0 | 20,0 | 70,0 | |
| ***NSb | ***NS | ***p<0,001 | ||
| **NS | **NS | *p<0,01 | ||
| 0,05<р<0,08 | *NS | *p<0,001 | ||
| Рассеянный склероз | 37,9 | 48,3 | 20,7 | |
| **NS | **NS | **NS | ||
| *NS | *NS | *NS | ||
| Боковой амитрофический | 32,6 | 58,1 | 37,2 | |
| склероз | *NS | *NS22,7 | *p<0, l | |
| Normals | 13,6 | 22,7 | 4,5 |
*** — по сравнению с больными рассеянным склерозом
** — по сравнению с больными. боковым амитрофическим склерозом
* — по сравнению со здоровыми lNS — не значимо
Как можно видеть на таблице 2, сравнение групп показывает, что у больных шизофренией противомозговые антитела обнаруживаются более часто при использовании в качестве антигена фракции 10, а не 2 и более часто чем с цельным экстрактом мозга. В тоже время у больных PC и БАС, также как и у здоровых, позитивная РСК чаще выявлялась при использовании в качестве антигена фракции 2.
Сходные с этими были результаты сравнения среднего титра антител, выявляемых в РСК, выраженного в условных единицах (а именно — титр 1:10 соответствует 1, титр 1:20 — 2 и т. д.) на рисунке 2. Следует обратить внимание на факт, что имеется сходство в средних тиграх антимозговых антител к белковому экстракту, фракции 2 и фракции 10 между больными PC и здоровыми. Это сходство снижается при анализе средних титров антител у больных БАС из-за значительного увеличения тигров антител к фракции 10 у этих больных.
У больных шизофренией средний титр комплементсвязывающих антител к различным препаратам мозговых антигенов значительно отличается. Имеется значимое увеличение титра антител к фракции 10 и значимое снижение титра антител к фракции 2, сходное с таковым у здоровых.
Результаты, полученные при тестировании больных шизофренией, указывают, что антигены, к которым обнаруживаются антитела в сыворотке крови больных шизофренией и которые определенным образом связаны с развитием аутоиммунного процесса при шизофрении, находятся главным образом во фракции 10. Кроме того, как было указано выше, антимозговые антитела, циркулирующие в сыворотке крови больных шизофренией, могут давать позитивную РСК также с фракцией 11. Это связано с присутствием в этой фракции о-гликопротеина, который идентичен таковому во фракции 10, что подтверждается идентичностью соответствующих линий в тесте двойной диффузии. Это также дает основание предположить, что более высокая антигенная активность фракции 10 при тестировании сывороток крови больных шизофренией по сравнению с таковой фракции 11, определяется наличием во фракции 10 ос2-гликопротеино-вого компонента, который отсутствует во фракции 11.
