Ф КГМУ 4/3-06/02
ИП №6 УМС при КазГМА
От 14 июня 2007 г
КАРАГАНДИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ
Кафедра молекулярной биологии и медицинской генетики
Методические рекомендации для семинарских занятий
| Тема 31: | Определение полового хроматина в буккальном эпителии. |
Специальность: 5В130100– общая медицина
Дисциплина: Молекулярная биология и медицинская генетика
Курс: 1
Составители:
Кислицкая В.Н.
Татина Е.С.
КАРАГАНДА 2013
Обсуждена и утверждена на заседании кафедры.
Протокол № _1_ от «_02_» ___09___2013
Зав. кафедрой ____________________Б.Ж. Култанов
Тема 31: Определение полового хроматина в буккальном эпителии.
Данный метод позволяет идентифицировать кариотип (особенность строения и число хромосом), путем записи кариограммы. Цитогенетическое исследование проводится у пробанда, его родителей, родственников или плода при подозрении на хромосомный синдром либо другое хромосомное нарушение.
Показания для цитогенетического обследования больного:
1) множественные пороки развития (с вовлечением трех и более систем); наиболее постоянные нарушения - пороки развития головного мозга, опорно-двигательной системы, сердца и мочеполовой системы;
2) умственная отсталость в сочетании с нарушениями физического развития, дисплазиями, гипогенитализмом;
3) стойкое первичное бесплодие у мужчин и у женщин при исключении гинекологической и урологической патологии;
4) привычное невынашивание беременности, особенно на ранних стадиях;
5) нарушение полового развития (гипогонадизм, половые инверсии);
6) небольшая масса ребенка, рожденного при доношенной беременности.
Методика: Определение Х- полового хроматина в ядрах соматических клеток.
Объект исследования: буккальный эпителий, культуры лимфоцитов периферической крови, фибробластов кожи, клеток других тканей.
Ход работы:
Сполосните рот водой, после чего снимите поверхностный слой эпителия слизистой оболочки ротовой полости стерильной салфеткой. Затем сделайте легкий соскоб слизистой оболочки щеки шпателем, после чего из полученного материала приготовьте мазок на предметном стекле, предварительно тщательно обезжиренном. Для фиксации препарата опустите его на 5—10 мин в стеклянный стакан со смесью спирта и эфира. По окончании фиксации покрасьте препарат орсеином, накройте покровным стеклом и рассмотрите под микроскопом с иммерсионным объективом.
В поле зрения увидите эпителиальные клетки слизистой оболочки ротовой полости с хорошо прокрашенными ядрами. В последних можно заметить половой хроматин в форме небольшого плосковыпуклого образования, прилегающего к ядерной оболочке. От других хроматиновых глыбок он отличается размером (крупнее), плотностью и характером расположения (рис.. Обратите внимание, что на препаратах из ротовой полости мужчин половой хроматин встречается гораздо реже, чем на препаратах из ротовой полости женщин (обнаруживается в 40—60% клеточных ядер).
Реактивы: этанол, эфир, орсеин.
Приборы и оборудование: микроскоп с фотонасадкой, шпатели, предметные стекла, покровные стекла, фильтровальная бумага, стерильные салфетки, иммерсионное масло.
Значение. С помощью метода определяется наличие Х и У полового хроматина, определяющего истинную половую принадлежность. Половой хроматин (тельце Барра) - в виде компактной глыбки в ядрах соматических клеток имеется только у женщин.
Половой хроматин в ядрах соматических клеток человека: а — ядро клетки с четырьмя Х-хромосомами; б — ядро клетки нормальной женщины; в — ядро клетки нормального мужчины.
