Препарат представляет собой лиофилизированную вакумом плазмукроличью цитратную, полученную из крови кроликов путем смешивания с 10%раствором натрия лимоннокислого. Показания к применению
Плазма кроличья в разведении 1:5 свертывается при контакте с культурой, которая содержит фермент коагулазу. Назначение – видовая идентификация стафилококка в реакции плазмокоагуляции. Постановка реакции плазмокоагуляции: 0,5 мл растворённойплазмы, разведенной по объёму 1:5, внести в стерильную пробирку и в нейсуспендировать одну петлю (19±1) часовой агаровой культуры стафилококка.
Контроль: постановка реакции со стафилококками, которыесодержат и не содержат фермент коагулазу. Пробирки поместить при температуре 37ºС.
Учет результатов: Через 2; 3; 18; 24 часа проверить наличиесвертываемости плазмы (образование сгустка) визуально.
Теория
При проведении различных бактериологических исследований часто возникает необходимость приготовить инокулюм, содержащий определенное количество микробных клеток (вернее сказать - колониеобразующих единиц, КОЕ). Для этого готовят серию последовательных разведений исходной суспензии. Концентрацию клеток в ней оценивают, сравнивая ее мутность с контрольным эталоном.
Первоначально эталон готовили из взвеси Salmonella typhi, инактивированных 2% формалином или прогреванием при 60 0С в течение 1,5 часов и законсервированных добавлением 0,5% фенола. Однако, бактериальные эталоны мутности очень нестабильны при хранении и им на смену пришел стеклянный международный эталон.
Стандарт мутности (син.: международный стандарт мутности, стеклянный стандарт мутности), утвержденный Всемирной организацией здравоохранения первичный эталон мутности для оптической стандартизации бактериальных взвесей, соответствующий мутности взвеси бактерий Борде — Жангу, содержащей 1010 клеток в 1 мл, т.е. равный 10 единицам мутности; представляет собой взвесь частиц стекла пирекс. В нашей стране такой эталон выпускает Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля биологических препаратов имени Л. А. Тарасевича. Он представляет собой взвешенные в дистиллированной воде частицы стекла «Пирекс» диаметром от 0,5 до 3,5 мкм. Взвесь этого стекла химически устойчива, не коагулирует при седиментации частиц, при взбалтывании осадка образует взвесь исходной дисперсности и мутности. Стандарт состоит из трех запаянных пробирок-эталонов, эквивалентных по степени мутности 5, 10 и 20 международным единицам мутности. Мутность стандарта на 10 единиц соответствует следующей концентрации микроорганизмов:
| микробы кишечной группы | 8,5 · 108 КОЕ/мл |
| микробы коклюшной группы | 1,0 · 1010 КОЕ/мл |
| бруцеллы | 1,5 · 109 КОЕ/мл |
| холерный вибрион | 2,0 · 109 КОЕ/мл |
| туляремийные микробы | 4,5 · 109 КОЕ/мл |
К комплекту бактериальных эталонов прилагаются шрифтовая таблица, содержащая набор различных шрифтов, и две пустые пробирки, диаметр, толщина стенок и цвет стекла которых точно соответствуют пробиркам-эталонам, так как при сравнении микробной взвеси одной концентрации, содержащейся в пробирках разных диаметров, мутность жидкости будет неодинаковой.
1. Приготовить исходную суспензию и разведения, как указано в пп. 1-7 варианта № 1.
2. чашки с агаром Мюллера-Хинтона. Подписать чашки от № 1 до № 5
3. При помощи микродозатора на 20 мкл стерильным наконечником нанести 5 капель из пробирки № 1 на чашку № 1. Аккуратным покачиванием распределить капли по поверхности агара, не допуская их слияния.
4. Повторить п. 3. для остальных разведений.
5. После полного впитывания жидкости чашки перевернуть и инкубировать в термостате при 37 0С 18 – 24 часа.
6. Подсчитать количество колоний в каплях.
| АНТИГЕН СИБИРЕЯЗВЕННЫЙ БАКТЕРИЙНЫЙ СТАНДАРТНЫЙ Показания проверка активности и специфичности сыворотки сибиреязвенной преципитирующей в реакции преципитации (по Асколи). |
| Режим дозирования Реакцию ставят методом наслаивания и подслаивания. При методе наслаивания в пробирку Улен гута наливают 0.2-0.3 мл прозрачной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, затем на нее осторожно по стенке пробирки наслаивают равное количество антигена так, чтобы между компонентами была ясно выраженная граница (тонкая прямая линия). При методе подслаивания в пробирку Уленгута наливают 0.2-0.3 мл прозрачной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, под нее осторожно подслаивают равное количество антигена. Антиген должен образовать с преципитирующей сывороткой кольцо преципитации не позднее, чем через 1 минуту. Специфичность антигена проверяют в реакции преципитации с нормальной сывороткой, а также с физиологическим раствором, используемые компоненты берут в равных количествах по 0.2-0.3 мл. Для приготовления физиологического раствора необходимо использовать бидистиллированную воду. Антиген не должен вызывать образование кольца преципитации в течение 15 минут наблюдения. |
Диагностикум эритроцитарный сибиреязвенный иммуноглобулиновый сухой. Диагностикум представляет собой формалинизированные танизированные эритроциты барана, сенсибилизированные иммуноглобулинами класса G антисыворотки к антигенам сибиреязвенного микроба. Сухой препарат имеет вид аморфной массы коричневого цвета. При добавлении во флакон 4,0 мл 0,9% раствора натрия хлорида образуется гомогенная суспензия коричневого цвета, представляющая собой 2,5% взвесь эритроцитов.