Практическая деятельность фельдшера-лаборанта

Работаю в халате, резиновых перчатках, шапочке, сменной обуви закрытого типа. Все манипуляции провожу в одноразовых резиновых перчатках. Утилизирую использованные перчатки, согласно инструкции.

Ежедневно перед началом и окончанием работы я выполняю следующие действия: а) Протираю оборудование (аппаратуру), мебель (столы), наружную и внутреннюю поверхность ламинарных шкафов дез.средством.

б) Включаю бактерицидные установки в лабораторных кабинетах и в ламинарных шкафах.

В) После выключения бактерицидных ламп регистрирую в журналах включения и выключения бактерицидных ламп.

Г) Регистрирую в журнале температуру холодильных и морозильных установок.

Д) В середине рабочего дня регистрирую в журналах температуру и влажность

лабораторных помещений.

Е) Ежедневно провожу мытье и сушку лабораторной посуды. После очистки от загрязнений прополаскиваю посуду в проточной воде, а затем в дистиллированной. Стеклянная посуда сушится в сухожаровом шкафу, при t- 90ᵒС в течение 1 часа. Пластиковая сохнет на воздухе.

При соблюдении санитарно- эпидемического режима в отделении руководствуются следующими приказами и инструкциями: 1) СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами 3-4 групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 2) СП 1.3.2518-09 «Дополнения и изменения № 1 к санитарно-эпидемиологическим правилам «Безопасность работы с микроорганизмами 3-4 групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 3) МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы 1-4 групп патогенности». 4)МУ 1.3.1888-04 «Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическими агентами III-IV групп патогенности» (Минздрав России, Москва, 2004); 5) Сан ПиН 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность». 6) Сан ПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами»

В настоящее время в лаборатории используется дезинфицирующее средство «БэбиДез Ультра». Средство обладает бактерицидной (в том числе микобактерии туберкулеза и возбудители внутрибольничных инфекций), спороцидной, вирулицидной (в отношении всех известных вирусов-патогенов человека, в том числе вирусов энтеральных и парентеральных гепатитов (в том числе гепатита А, В и С), ВИЧ, полиомиелита, аденовирусов, энтеровирусов, ротавирусов, вирусов «атипичной пневмонии» (SARS), «птичьего» гриппа H5N1, «свиного» гриппа A/H1N1, гриппа человека,герпеса и др.), фунгицидной (грибы рода Кандида, Трихофитон, плесневые) активностью,также средство обладает овоцидными свойствами в отношении возбудителей паразитарных болезней (цистов и ооцистов простейших, яиц и личинок гельминтов).Средство имеет хорошее моющее свойства, не фиксирует органические загрязнения на обрабатываемых поверхностях и инструментах. Водные растворы средства не портят обрабатываемые поверхности из стекла, полимерных материалов, а так же посуду, изделия медицинского назначения и предметы ухода за больными из коррозионностойких металлов, стекла, резин и пластмасс. Средство экологически безопасно.

Относится к 4 классу мало опасных веществ, мало токсичен веществ.

Средство предназначено для:

· дезинфекции, в том числе совмещенной с предстерилизационной очисткой, изделий медицинского назначения, включая инструменты из различных материалов (металла, резины на основе натурального и силиконового каучука, пластмассы, стекло) ручным способом;

· дезинфекции и мытья поверхностей в помещениях, предметов обстановки, поверхностей аппаратов, приборов, санитарно- технического оборудования. Проводится экспресс контроль приготовления раствора дезинфицирующего средства при каждом приготовлении. При работе с дезинфицирующими средствами соблюдаются все меры предосторожности, включая применение средств индивидуальной защиты (халат, медицинский брючный костюм, шапочка, медицинские перчатки, обувь закрытого типа).

В лаборатории все помещения, оборудование, медицинский и другой инвентарь содержатся в чистоте. Поверхность рабочих столов в начале и в конце каждого рабочего дня обрабатываются 1% раствором «БэбиДез Ультра», а в случае загрязнения кровью немедленно обрабатывается 1,5% раствором «БэбиДез Ультра».

Влажная уборка кабинетов (мытье полов, подоконников, дверей и дверных ручек) осуществляется 2 раза в день с применением 1% раствора «БэбиДез Ультра». Соответствующая запись делается в «Журнале текущих уборок» и в «Журнале проведения генеральных уборок».

В соответствии с требованиями СанПин 3.1.5.2826-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность» в кабинетах отделения имеются укладки «Анти-ВИЧ».

Во время работы медицинский работник должен использовать индивидуальные средства защиты, позволяющие избежать прямого контакта с кровью или ее компонентами и должен быть одет в спецодежду (халат, медицинский брючный костюм, шапочка, медицинские перчатки, обувь закрытого типа). В отделении ежемесячно проводятся совещания, на которых прорабатываются вопросы сан.эпид. режима, приказы, вопросы этики и деонтологии. Каждые 6 месяцев проводится инструктаж по технике безопасности, охране труда при работе с кровью, с регистрацией в журнале «Техника безопасности». Ежегодно сотрудники лаборатории проходят профессиональный осмотр. Моя практическая деятельность каждый день начинается с приема биологического материала из отделения криоконсервирования форменных элементов крови и гемопоэтических клеток. Прием биологического материала и запись в журнал прихода биоматериала происходит в отдельном кабинете, на разных столах. Доставляется биоматериал в специальном контейнере и специальных пробирках. Одеваю одноразовые перчатки, проверяю чтобы пробирки были чистые без кровяных пятен и без видимых сгустков.

Далее проверяю сопроводительную документацию для поступающего биоматериала (пуповинной крови и крови рожениц) в ней должно быть указано: 1) № образца, штрих код и количество биоматериала (пуповинная кров и кровь рожениц). 2) Дата родов, национальность и пол ребенка. 3) Отмечается если № образца является потенциальным донором. При этом обязательно указывается Ф.И.О. полностью больного ребенка и его полный диагноз, а так же указывается Ф.И.О. полностью матери. 4) Количество лейкоцитов мы узнаем в отделении иммуналогии. Если все требования к доставке биоматериала соблюдены ставлю число, время и свою подпись, так же ставит число, время и свою подпись ставит тот кто доставил биоматериал в наше отделение. Поступившая пуповинная кровь и кровь рожениц помещается в специальный штатив и помещается в морозильную камеру с t -40^оС на карантин, для прохождения вирусологического и бактериологического обследования (от 4 до 6 недель) в отделении криоконсервировании. После окончание карантина из отделения криоконсервирования приносят направление разрешающее производить выделение ДНК и типирование образцов пуповинной крови. Оформляю в журналах и в электроном виде какие образцы пуповинной крови отбракованы и по каким либо показаниям, а так же какие образцы пойдут в обработку. Вынимаю необходимые образцы из морозильной камеры и перекладываю их для разморозки в холодильник с t+4-5^оС. Только после полной разморозки образцы могут быть взяты в дальнейшую обработку. В нашу лабораторию так же поступает биоматериал (кровь) из онкогематологического отделения Морозовской и Боткинской больницы. Принимаю и фиксирую в журналах прихода биоматериала в отдельном кабинете. Праверяю в какие пробирки набран биоматериал и количество биоматериала. Для ПЦР диагностики биоматериал набирается в пробирки только с ЭДТА или с цитратом натрия и противопоказано забор биоматериала с гепарином. Проверяю чистоту пробирок, чтобы на пробирках не было кровяных подтеков и в самом биоматериале не было сгустков. Проверяю сопроводительную документацию в которой должно быть указано: 1) Обязательно сопроводительный лист должен быть на больного и на каждого родственника отдельный. 2) Ф.И.О. полностью больного и их родственников, возраст и национальность. 3) Полный диагноз, дата последнего исследования на лейкоциты и количество лейкоцитов. 4) Количество биоматериала и с каким наполнителем был взят биоматериал. Если все требования к доставке биоматериала соблюдены ставлю число, время и свою подпись, так же ставит число, время и свою подпись кто доставил биоматериал в наше отделение. Дальше приступаем к подготовке биоматериала (крови) к выделению ДНК. Выделение ДНК происходит в отдельном кабинете. Подготовка к выделению ДНК начинается в ламинарном шкафу. Образцы крови которые подлежат обработке ставятся в штатив. На каждый образец крови готовится по три пробирки:1) Первая пробирка-криопробирка, которая будет храниться с ДНК в морозильной камере c t-86^оС в отделении лаборатории HLA- типирования. На ней указывается номер образца и дата проведения анализа. 2) Вторая пробирка – эппиндорф, объемом 1,5-2 мл., на ней так же указывается номер образца и в нее будет вноситься определенное количество крови для исследования.3) Третья пробирка – эппиндорф, объемом 1,5-2 мл., на ней то же будет указан номер образца и устанавливается в аппарат «Arrow» в чистом виде. Экстракция (выделение) ДНК из крови с помощью магнитных частиц на приборе «Arrow»: 1)Включаем аппарат и на панели управления выбираем функцию ультрофилета, задаем программу и время для обработки внутренней поверхности и платформы аппарата. 2)Соединяем наконечники с помпами и устанавливаем в специальные углубления прибора. 3)Устанавливаем картриджи в аппарат, протыкаем фольгу каждого картриджа специальным инструментом. 4)Помещаем пробирки с биоматериалом и чистые пробирки в разные лунки. На каждой пробирке указывается номер образца. 5)На панели управления выбираем номер картриджа, объем ДНК (элюата) который должен получиться и нажимаем старт. 6)После окончания работы аппарата, мы извлекаем пробирки с элюатом, обязательно закрываем крышки и производим измерение характеристик ДНК с использованием спектрофотометра «SmartSpec Plus». 7)Использованые картриджи, помпы с наконечниками, пробирки с кровью утилизируются в пакеты и контейнеры желтого цвета, как отходы класса Б. 8)Внутреннюю поверхность аппарата протираем 70% спиртовыми салфетками и включаем программу на панели управления ультрофиолета, после окончания программы выключаем аппарат. Бывают случаи когда лейкоциты в образцах крови повышены более 15*10⁹/_л, то приходится разбавлять кровь физ.раствором. И дальнейшее выделение ДНК будет происходить точно так же как было описано выше. Но бывает, что мы получаем биоматериал из онкогематологических отделений больниц с лейкоцитами менее 1*10⁹/_л. 1. Подписываем 3-и пробирки на один образец. 2. Вносим в первую пробирку, 3мл физиологического раствора и 3мл крови. Хорошо перемешиваем. 3. Вносим во вторую пробирку 3мл фиколла. 4. В пробирке с фиколлом наслаиваем, перемешанную смесь крови с физ.раствора, не допуская смешивания жидкостей, закрываем крышку пробирки. 5. Центрифугируем пробирку при 3000 об/мин в течение 20-25 мин. 5.1.Если рассмотреть пробирку после центрифугирования, мы увидим 4-е слоя (сверху в низ):1)плазма (сыворотка и физ.раствор);2) «кольцо» наши лейкоциты; 3)фиколл; 4)эритроциты. 6. Переносим в третью пробирку, второй слой («кольцо»), добавляем физ.раствор в соотношении 1:1, закрываем пробирку крышкой. 7. Центрифугируем пробирку при 3000-3500 об/мин в течение 10-15 мин. 8. Быстрым движением сливаем супернатан (надосадочную жидкость) не задевая осадок. Осадок содержит лейкоциты периферической крови. Полученный осадок лейкоцитов используется как кровь и готов для выделения ДНК.

Для работы на спектрофотометре нужно: 1)Включить, установить программу (DNA/RNA) при которой спектрофотометр автоматически собирает данные поглощения при 260 и280 нм, и использует их считывания для вычисления концентрации нуклеиновых кислот. 2)Дозатором набираем 40-50мкл. буфера, вводим в кювету до отметки и ставим в спектрофотометр, нажимаем клавишу Read Blank. При этом спектрофотометр обнулит детектор в процессе подготовки для считывания образца. 3) Дозатором перемешиваем и набираем 40-50мкл. ДНК, аккуратно вводим в кювету до отметки и ставим в спектрофотометр, нажимаем клавишу Read Sample. При этом спектрофотометр будет собирать данные поглощения с кюветы в приборе. Получаем результат концентрации ДНК. 4)При нажатии на клавишу А260:А280, спектрофотометр вычисляет и показывает соотношение А260 к А280. Этот метод аппроксимации чистоты препаратов нуклеиновых кислот, чистые препараты ДНК имеют соотношение приблизительно 1.8. 5)После окончания измерения, распечатывания результатов, аппарат выключаем, кюветы и наконечники утилизируем в желтые контейнеры как класс Б. Протираем рабочую поверхность дез.средством и кварцуем. 6)Вносим результаты в рабочие листы, в журналы и в электронный журнал. Пробирки с ДНК подписываем: ставим номер образца, число, месяц и год. Для работы храним в холодильнике при t +4^оС+5^оС. После окончания работы криопробирки с биоматериалом (кровью) и с ДНК убираются в специальные криоштавы и убираются в морозильные камеры при t-84^о-85^оС. Во время проведения исследований могут быть получены двойные интерпретации результатов типирования по разным генам HLA- A,B,C,DRB₁,DQB₁ и тогда нужно будет проводить типирование методом SSP. Что бы провести типирование методом SSP нужно будет приготовить ТАЕ буфер и агарозный гель. ТАЕ буфер готовится из концентрированного раствора путем разведения его дистиллированной водой в расчете 1:49. Срок годности рабочего раствора составляет 14 суток. Число и месяц разведения отмечается на канистре и в журнале. Приготовление агарозного геля. Гель готовят из навески агарозы 4гр. и ТАЕ буфера 200мл. Навеску высыпают в коническую стеклянную колбу и добавляют буфер, не перемешивая ставят в СВЧ печь при мощности 500, включаем и оставляем до полного растворения агарозы, несколько раз достаем колбу и перемешиваем содержимое. Раствор должен получиться прозрачным. Затем колбу ставим на магнитную мешалку, кладем в колбу магнит и включаем. Магнит при средней скорости размешивает раствор и не дает свернуться гелю (раствор при вращении магнита не должен пениться). Устанавливаем в колбу термодатчик и следим за температурой, температура должна опуститься до 70^оС. Добавляем в гель 10мкл. этидиум бромид, перемешиваем и полученный раствор переливаем в приготовленный планшет для заливки геля. Указываем время заливки планшета, предупреждаем врачей о том, что гель сварен, через 20минут гель готов. Так же в обязанности лаборанта входит подготовка аппаратуры к работе. Включаем проточный анализатор Luminex^R- 200^тм. Включаем анализатор в определенной последовательности: станция подкачки – платформа – детектор – компьютер. Для удобства и чтобы не забыть на аппаратуре есть маленькая шпаргалка, стоят цифры от 1 до 4,последовательность включения. Прогрев анализатора 30минут. За это время мы проверяем, когда была проведена последняя калибровка (калибруется 1 раз в 14 дней), выбираем процедуру ежедневной промывки анализатора или калибровки анализатора. После окончания работы врачей на анализаторе, мы его промываем и выключаем в обратной последовательности как его включали. Для фотографирования, просмотра и документирования агарозных гелей мы включаем гельдокументирующую систему «ДиДжиДок-Ит». Для этого мы включаем прцессор, фотоаппарат системы «ДиДжиДок-Ит» затем выбираем программу на компьютере и устанавливаем параметры для фотографирования геля. Все фотографии геля сохраняются в электронной базе. Плашки используемые в анализаторе Luminex и в методе SSP подвергаются утилизации в желтые пакеты с пометкой пластик, а гель утилизируется в желтый пакет и контейнер с пометкой гель.