Как уже упоминалось выше, на сегодняшний день функция наиболее плотных гранул белков остается неизвестной. На этапе тахизоит, их всплеск секреции в PV после вторжения хоста-клеток и их селективного нацеливания в PV отсека предположить, что они могли бы внести значительный вклад в структу-Турале организации этого нового отделения и / или имеют важные функции в PV метаболизме (Dubremetz и соавт, 1993;. Cesbron-Delauw и др, 1994;. Каррузерс и Сибли, 1997).
11.6.5.1 ГРА
поиски BLAST, выполненные на СОР последовательности не выявили какого-либо значительного сходства между ГРА и других белков в базах данных. Тем не менее, мотив поиски показали некоторые потенциальные biochemi-кал свойства: (. Cesbron-Delauw и др, 1989) два EF-руки, предсказанные в GRA1 (аа 149-180 и 197-223) предложил кальций-связывающую активность, которая впоследствии была продемонстрирована, сайт св АТФ / ГТФ связывания в GRA4 (аа 307-314), а также РГД адгезии мотив в GRA7 (аа 170-172) (Мерсье и др., 2005).
Функция несколько ГРЫбыла исследована путем построения генетического нокаута (KO) паразитов. Анализ GRA2, GRA6 или GRA2-GRA6 нокаутов показали, что эти белки способствуют формированию MNN (Мерсье и др., 2002). GRA2, через его амфипалеарктические патический альфа-спирали, индуцирует штенгель из везикулярного материала, наблюдаемого на заднем конце паразита вскоре после вторжения. GRA6 далее
| ГРАНУЛЫПЛОТНЫХ |
стабилизирует эти предварительно отформованные перепончатые канальцев. Однако, несмотря на столь драматическое нарушение архитектуры MNN, как GRA2 и GRA6 KO паразиты отображаются нормальные в пробирке темпы роста (Mercier и др., 1998b), что свидетельствует о том, что сетевая организация является необязательной для паразита внутриклеточной репликации. Тем не менее, в живом организме, как GRA2 и GRA6 KO паразиты являются менее вирулентными, чем их родительский штамм RH, позволяя мышей, чтобы выжить острую инфекцию и развить мозговые кисты-подобные структуры (Mercier и др, 1998b;.. Мерсье и др, не опубликовано), Является ли это авирулентная фенотип связан с отсутствием intravacuolar трубчатых структур остается исследовать.
На сегодняшний день нет ключевой информации о функции PVM-ассоциированной ГРА не доступна так как TgGRA5 KO не привел к каким-либо очевидным фенотипическим изменениям (Mercier и др., 2001). Наконец, несмотря на многочисленные попытки, оказывается невозможным выбить TgGRA1 или TgGRA4, предполагая, что некоторые ГРА могут быть необходимы для тахизоит внутриклеточного выживания (Braun, Travier, Мерсье и Cesbron-Delauw, неопубликованный). TgGRA1 является самым abun-DANT EST (2 процента от общего EST, полученного из штамма RH, https://toxodb.org/News/Item-3.0-newESTdata-Mf.shtml), и его Са2+-связывающий проп-erties предположить важную роль в гомеостазе кальция ФВ, или в оказании помощи упаковки других белков ГРЫ(как это было предложено ранее). Дальнейшие исследования функции этих белков ГРА потребует строительства усло-онные KO мутантов.
11.6.5.2 Другие плотные гранулы белков
Несмотря на их гомологии с хорошо охарактеризованных белков, функция других плотных гранул белков четко не установлена. Обильные NTPases имеют важное значение, и отображения апираза активности (Асаи и др., 1995; Nakaar и др., 1999). Следовательно, в основной модели, так как токсоплазмы является ауксотроф для пуринов, было выдвинуто предположение, что присутствие вакуолей NTPases, а также в 5' нуклеотидазы, позволит ступенчатое деградации АТФ в АДФ, АМФ и аденозина, причем последние в конечном счете, транспортируются через мембрану паразита плазмы через низкое сродство аденозин переносчика (Stedman
и Столяр, 1999). Тем не менее, он также демон-strated, что, в пробирке, максимальная активация NTPases требует дитиолов (Асаи и др, 1983;. Бермудес и др., 1994), и этот фермент является мини-Малли активны в PV (Silverman и др., 1998). нет Более того, ни 5'-nucleotidase активность была обнаружена на поверхности паразита, предполагая, что паразит не способен превращать AMP в аденозин для транспортировки через мембрану паразита плазмы (Нго и др., 2000). Таким образом, представляется, что первоначальная гипотеза, что NTPases участвуют в пуринах спасанию неверна.
была предложена альтернативная роль NTPases в паразита выхода. С ПВМ становится все более проницаемой, как паразиты развиваются, intravacuolar ACTi-vation из NTPases будет происходить непосредственно перед паразитом выхода (Стоммел и др, 1997;.. Сильверман и др, 1998), так что АТФ закачивается из клетки-хозяина может быть снижен и обеспечивают энергию, необходимую для пара-сайт моторики. Согласно этой модели, и с учетом их численности, активность NTPase будет плотно режет-ведено, чтобы избежать быстрого истощения вакуолярного запаса АТФ, который бы вызвать преждевременный выход из них паразита из вакуоли (Сильверман и др., 1998).
Среди ингибиторов серин белков, обнаруженных в PV, ТГПИ-1 представляет собой ингибитор широкого спектра действия, который способен нейтрализовать трипсин, химотрипсин и эластаза в пробирке, в то время как ТГПИ-2, как представляется, специфичные для трипсина (Моррис и др., 2002; Моррис и Каррузерс, 2003). Intravacuolar функция этих ингибиторов является неясной. Поскольку оба активны против пищеварительных ферментов, ТГПИ-1 и ТГПИ-2, возможно, выпущен во внеклеточную Environ-ления во время лизиса клеток-хозяина, может защитить паразита от протеаз, как она проходит через желудочно-кишечный тракт (Morris и др., 2002),
Циклофилины (CYPs) высоко консервативны белки, связанные с ин витро пептидил-пролил цис / транс-изомеразу (PPIase или ротамазной) активности и участвуют в более широком плане в Medi-живать белка-белковые взаимодействия внутри крупных белковых комплексов. Таким образом, TgCyP-18 может участвовать в регуляции сборки белковых комплексов в пределах плотных гранул и / или PV. В частности, GRA4 и / или GRA8, которые богаты остатками пролина, могут быть потенциальными субстратами (Кэри и др., 2000).
306 Toxoplasma Секреторные БЕЛКИ И ИХ РОЛИ В инвазии клеток и внутриклеточное ВЫЖИВАНИЕ