Сущность, техника постановки и учет реакции задержки гемагглютинации (РЗГА).




РЗГА широко применяется в практике как для выявления и оп­ределения титра антител в сыворотке крови больных и вакциниро­ванных животных, так и для идентификации выделенных вирусов по известной сыворотке. Ставить эту серологическую реакцию мож­но только с теми вирусами, которые обладают гемагглютинирующими свойствами.

Сущность РЗГА заключается в том, что, если к вирусу, обладающе­му гемагглютинирующими свойствами, добавить сыворотку, содержа­щую специфические вирусу антитела, и смесь выдержать в контакте 30-60 минут, а затем внести взвесь эритроцитов, гемагглютинация не наступит, т.е. произойдет задержка (торможение) гемагглютинации. Следовательно, здесь гемагглютинирующая способность вируса нейт­рализуется специфическими антителами.

При постановке реакции следует иметь в виду, что некоторые жид­кости организма (сыворотка крови, моча, слюна, молоко и др.) могут содержать ингибиторы, которые могут тормозить реакцию и задержи­вать гемагглютинацию. В этих случаях нормальная сыворотка, т. е. сы­воротка от здоровых животных, может дать задержку гемагглютинации, что приведет к ошибочным результатам. В сыворотках крови некото­рых здоровых людей и животных выявлено два типа ингибиторов - тер­мостабильные и термолабильные. Термолабильные ингибиторы обна­руживаются в бета-фракциях глобулина и они обладают свойствами бета-глобулина, подавляют гемагглютинацию, нейтрализуют вирус и являются важным фактором противовирусного иммунитета. Они ме­шают постановке РЗГА и от них избавляются инактивированием сы­воротки при 56-65°С в водяной бане 30 минут. Термостабильные ин­гибиторы (ингибиторы Френсиса) содержатся в альфа-фракции гло­булина, они устойчивы к высоким температурам (даже к кипячению) и действию щелочи, подавляют гемагглютинацию, но вируснейтрали- зующими свойствами не обладают. Удаляют термостабильные инги­биторы из сывороток крови обработкой сывороток углекислым газом, фильтратом культуры Вибриона холеры или перйодатом калия.

Для постановки РЗГА необходимо предварительно провести титрацию вируса в РГА, чтобы определить 1 АЕ. При постановке РЗГА вирус берут в титре 4 АЕ, т. е. разведение в 4 раза меньшее, чем был титр вируса в РГА. Например, титр вируса, содержащий 1 АЕ, равен 1:64, значит 4 АЕ будет содержаться в разведении вируса 1:16.

Все сыворотки перед постановкой РЗГА прогревают для удале­ния термолабильных ингибиторов в течение 30 минут при темпера­туре 56-65°С в зависимости от вида животных.

Для постановки реакции в одном ряду пробирок или лунок готовят разведения сыворотки на физиологическом растворе. Обычно в пер­вой пробирке готовят разведение 1:10, а далее из него двухкратные разве­дения до 1:1280 и иногда более высокие. Затем из этого ряда по 0,25 мл соответствующих разведений сыворотки переносят во второй ряд про­бирок и туда же добавляют по 0,25 мл вируса, содержащего 4 АЕ. Встря­хиванием пробирок жидкость перемешивают и смесь выдерживают 30-60 минут в контакте при комнатной температуре или в термостате. После этого во все пробирки вносят по 0,5 мл 1%-ной взвеси эритро­цитов, пробирки встряхивают и вновь выдерживают смесь в контакте 30-60 минут. Параллельно ставят контроли:

а) контроль сыворотки на спонтанную агглютинацию: к 0,25 мл сы­воротки, в разведении 1:20 добавляют 0,25 мл физраствора и 0,5 мл 1%-ной взвеси эритроцитов (сыворотка не должна давать агглютинации);

б) контроль эритроцитов на спонтанную агглютинацию; к 0,5 мл 1%-ной взвеси эритроцитов добавляют 0,5 мл физраствора. Агглюти­нации не должно быть;

в) контроль реакции с нормальной сывороткой и антигеном - агг­лютинация должна быть. / СЦ

В положительных случаях при учете РЗГА будет отсутствовать аг­глютинация эритроцитов, в то время как этот же вирус без добавления сыворотки и с нормальной сывороткой будет вызывать четкую гемаг­глютинацию. С помощью РЗГА можно определить нарастание титра антител в процессе динамики болезни. Титром антител считается наи­высшее разведение сыворотки, которое задерживает проявление гемаг­глютинации.

С пары: компоненты: сыворотка (известная диагностическая положительная отрицательная\неизвестная исследуемая), антиген (берут в количестве 4 ГАЕ), однопроцентные эритроциты.

Цель постановки: идентификация вируса, титр антител и динамика их нарастания

Учет реакции: в первой пробирке, где больше всего сыворотки – эритроциты оседают на дно в виде пуговки; далее начинается агглютинация; в конце – зонтик.

Диагностика: чума плотоядных, гепатит плотоядных, псевдочума



Поделиться:




Поиск по сайту

©2015-2024 poisk-ru.ru
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Дата создания страницы: 2022-09-06 Нарушение авторских прав и Нарушение персональных данных


Поиск по сайту: