Число лейкоцитов и лимфоцитов у здорового, подозрительного по заболеванию и больного лейкозом крупного рогатого скота («лейкозный ключ»)

Лабораторная работа. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота, профилактика и оздоровительные мероприятия

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

 

 

Направление подготовки (специальность)

3.36.05.01 Ветеринария

 

 

для студентов факультета биотехнологий и ветеринарной медицины

 

 

УФА 2018

УДК 619: 616.9 ББК 48 Э 71

Рассмотрена и одобрена на заседании методической комиссии факультета биотехнологии и ветеринарной медицины от 29 марта 2018 г. (протокол № 9)

 

Составители:

профессор кафедры инфекционных

болезней, зоогигиены и ветсанэкспертизы,

д-р. ветеринар. наук А.И. Иванов

 

Рецензент:

зав. кафедры морфологии,

патологии, фармации и незаразных болезней,

д-р. ветеринар. наук, профессор Е.Н. Сковородин

 

Ответственный за выпуск:

зав. кафедрой инфекционных

болезней, зоогигиены и ветсанэкспертизы

др. биол. наук, профессор А.В. Андреева

 

 

г. Уфа, БГАУ, кафедра инфекционных болезней,

зоогигиены и ветсанэкспертизы

 

Лабораторная работа

Диагностика лейкоза крупного рогатого скота, профилактика

И оздоровительные мероприятия

Цель работы

Изучить методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота, систему профилактических и оздоровительных мероприятий.

Материалы и оборудование

Микроскопы, мазки крови, содержащие незрелые клетки крови, диапозитивы, гематологический ключ, схемы классификации лейкоза, ветеринарное законодательство, таблицы, плакаты, муляжи, наставления, инструкции.

Задание

1) Разработать схему дифференциальной классификации лейкоза.

2) Изучить инструкцию о мероприятиях по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота.

3) Составить комплексный план оздоровления хозяйства от лейкоза крупного рогатого скота.

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

Лейкоз крупного рогатого скота (лат. – Bovine leucosis; англ. - Leukaemia in cattle; гемобластоз) - хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, протекающая бессимптомно или характеризующаяся лимфоцитозом и злокачественным разрастанием кроветворных и лимфоидных клеток в различных органах.

Возбудитель – РНК – содержащий онкогенный вирус, относящийся к роду Oncovirus типа С семейства Retroviridae. Вирус лейкоза крупного рогатого (ВЛ КРС) или бычий лейкозный вирус (БВЛ) морфологически сходен с возбу­дителями лейкоза у животных других видов. Однако имеются существенные различия в антигенной структуре. Существует только один серовариант ВЛ КРС, к которому восприимчивы, кроме КРС, еще овцы и козы.

Возбудитель во внешней среде малоустойчив. В клеточных культурах при нагревании до 60⁰С он погибает через 1 мин, быстро обезврежи­вается 2-3%-ными растворами едкого натра, формальдегида и другими дезинфи­цирующими средствами в общепринятых концентрациях. Инактивируется ВЛ КРС в молоке нагреванием его до 74⁰С в течение 17 с или скисанием (рН 4,75). Вирус может длительное время находиться в клетке в частично или полностью связанном состоянии с ее геномом. Патогенное действие он проявляет при снижении иммунологической реактивности организма животных.

Обычно ВЛ КРС передается конгенитально (через плаценту) или горизонтально. Телята заражаются главным образом постнатально, в первую очередь с молозивом и молоком. От животных возбудитель передается путем прямого или косвенного контакта: с молоком, слюной, кровью (независимо от того, содержит ли кровь лейкоциты или нет). Возбудитель болезни разносится быстро, если не соблюдаются правила асептики и антисептики при манипуля­циях у животных (взятие крови, прививки и др.). Горизонтальная передача ВЛ КРС имеет большое значение внутри стада; при этом особую роль играют кро­вососущие насекомые.

Как правило, болезнь встречается у высокопродуктивного скота (лучший генетический фонд молочного скота), в частности, при несбалансированном кормлении, когда молочная железа израсходует вещества, не компенсируемые кормами, и ослабляются физиологические функции организма.

ДИАГНОСТИКА

Первичный диагноз в хозяйстве ставят на основании эпизоотологических, клинико-гематологических, серологических и патологоанатомических данных с обязатель­ным проведением гистологического исследования.

Животное считают больным лейкозом при наличии одного из следую­щих показателей: 1) клинических признаков болезни; 2) положительных результатов гематологических исследований; 3) обнаружении у павшего (убитого) животного характерных патологоанатомических изменений; 4) установлении положительного результата гистологического исследова­ния патологического материала в случае падежа (убоя) животных.

Клинические признаки проявляются, как правило, к концу болезни, поэтому в диагностике заболевания они имеют лишь вспомогательное значение.

Гематологическое исследование заключается в обнаружении в перифе­рической крови повышенного числа лейкоцитов, в основном лимфоидного ряда, и слабодифференцированных клеток (родоначальных, пролимфоцитов, лимфобластов), а также полиморфных, атипичных клеток кро­ветворных органов.

Подсчет лейкоцитов проводят при помощи электронного счетчика или в камере Горяева, а процентное соотношение отдельных форм лейкоци­тов крови - в окрашенном мазке под микроскопом. Результаты гематоло­гических исследований оценивают по так называемому лейкозному ключу и морфологическому характеру клеток крови.

Число лейкоцитов и лимфоцитов у здорового, подозрительного по заболеванию и больного лейкозом крупного рогатого скота («лейкозный ключ»)

Возраст животных, лет	Число лейкоцитов в 1 мкл крови	Абсолютное число лимфоцитов в 1 мкл крови
Здоровые	Подозрительные по заболеванию лейкозом	Больные лейкозом
От 2 до 4 От 4 до 6 6 и старше	До 11000 До 10000 До 9000	От 8000 до 10000 От 6500 до 9000 От 5500 до 8000	Свыше 10000 Свыше 9000 Свыше 8000

Если количество лейкоцитов у животных будет ниже числа, указанного во второй графе таблицы, то результат исследования на лейкоз считают отрицательным, если выше, то готовят мазки и определяют лейкоцитар­ную формулу. У быков-производителей во всех случаях независимо от числа лейкоцитов выводят лейкоцитарную формулу. Стойкий или прогрессирующий лейкоцитоз (рис.) и лимфоцитоз, отмеченные при трехкратном исследовании (с интервалом 2...3 мес), -достоверный показатель лейкоза. Необходимо учиты­вать, что гематологическим методом не всегда удается диагности­ровать болезнь. Нередки случаи алейкемического течения заболе­вания, когда картина крови остается в пределах нормы, характе­ризуется несколько пониженным общим количеством форменных элементов.

При массовых гематологических исследованиях крупного рога­того скота на лейкоз следует учитывать возможность у животных лейкемоидных реакций, обусловленных развитием таких патоло­гических процессов, как туберкулез, бруцеллез, маститы, эндомет­риты, токсикозы и др. При дан­ных заболеваниях в отличие от лейкоза изменения в показателях крови обычно носят временный характер.

 

Рис. Увеличение содержания лейкоцитов в крови животного при лейкозе: 1 - лейкоциты; 2 - эритроциты

Серологический метод диагностики основан на выявлении в сыворотке крови животных при помощи РИД антител к антигену ВЛКРС. Специфи­ческие антитела появляются в крови крупного рогатого скота через 2 мес. после заражения, т. е. значительно раньше, чем гематологические измене­ния, и сохраняются пожизненно. РИД представляет собой основной ме­тод серологического исследования животных в государственных програм­мах по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота во многих странах, в том числе в России.

Кроме того, с этой целью возможно применение других реакций: свя­зывания комплемента (РСК); иммунофлуоресценции (РИФ); радиоим-мунопреципитации (РИП); нейтрализации (РН), иммуноферментного анализа (ИФА), полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Животных, давших положительные результаты в РИД, считают инфи­цированными, животных с гематологическими изменениями в картине крови или с клиническими признаками - больными лейкозом.

Патоморфологический метод исследования, при вскрытии трупов или послеубойном осмотре туш и органов животных обращают внимание на величину органов, распространенность опухолевых разрастаний, их связь с лимфатическими узлами или другими органами и тканями. Все формы лейкоза характеризуются увеличением в раз­личной степени лимфатических узлов. При лимфолейкозе они увеличены равномерно, не сращены с окружающими тканями, капсула снимается легко, на разрезе узлы серо-белого цвета, сочные и саловидные. Лимфатические узлы при лимфогрануломатозе, лимфосаркоме и гистиоцитарной саркоме бугристые, капсула сращена с паренхимой, на разрезе часто обнаруживают кровоизлияния и некрозы; в орга­нах брюшной, тазовой полостей, на серозных оболочках отмечают опухолевые разрастания узлов в виде конгломератов серо-белого, желто-серого цвета. Селезенка при лимфоидном, слабодифференцированном, недиф­ференцированном и миелоидном лейкозе увеличена. При первых двух формах она буро-красного цвета с четко выраженной красной и белой пульпой за счет гиперплазии фолликулов. В более поздней стадии болезни граница между белой и красной пульпой стерта. При миелоидной форме лейкоза селезенка красно-малинового цве­та, фолликулы плохо заметны, а в отдельных участках отсутствуют, ткань рыхлой консистенции с кровоизлияниями. При лимфоретикулосаркоме селезенка не увеличена.

При всех формах лейкоза отмечают очаговые или диффузные разрастания серо-белого или серо-розового цвета в печени, почках, в толще сердечной мышцы, органах пищеварения, матке, скелетной мускулатуре, диафрагме и других органах. Для гистологического исследования вырезают кусочки селезенки, лимфати­ческих узлов, грудной кости, печени, почки, легких, сердца и право­го ушка сердечной мышцы, стенки пораженных органов пищеварения (чаще сычуга), матки и скелетных мышц размером 2 х 1,5 см. Сре­зы готовят после парафиновой или целлоидиновой проводки и окра­шивают гематоксилин-эозином.

Патологогистологическая картина при разных формах лей­
коза характеризуется следующими изменениями:

при лимфоидном лейкозе наблюдают в селезенке и лимфатиче­ских узлах стирание рисунка (в селезенке - границ между белой и красной пульпой, в лимфатических узлах - между корковым и моз­говым слоем) за счет диффузной инфильтрации клетками лимфоидного ряда, среди которых в основном выявляют зрелые лимфоциты, в меньшем количестве обнаруживают пролимфоциты, лимфобласты. В костном мозге строма сохранена, выявляется значительное истон­чение и рассасывание балок, скопления лимфоцитов могут распола­гаться в виде очагов или диффузно, заполняя все костно-мозговые пространства (лимфоидная метаплазия); в почках, печени, сердце, сычуге и других органах обычно выявляют скопления лимфоцитов в просвете капилляров и инфильтрацию лимфоидными клетками интерстициальной ткани; при недифференцированном и слабодифференцированном лейко­зе (гемоцитобластоз) в костном мозге, селезенке, лимфатических уз­лах и других органах наблюдают очаговые и диффузные пролифераты, клеточный состав которых представлен недифференцированными или слабодифференцированными клетками типа гемоцитобласта (родоначальная клетка); при миелоидном лейкозе (встречается редко) обнаруживают в селезенке незрелые элементы гранулоцитарного ряда, мегакариоциты, клетки типа гемоцитобластов, фрагментацию и распад аргирофильных волокон, в костном мозге - скопления зрелых и незрелых клеток гранулоцитарного ряда; в лимфатических узлах, печени, поч­ках, легких и других органах наблюдают очаговые диффузные раз­растания миелоидных элементов; при лимфосаркоме (слабодифференцированная лимфобластическая, лимфоцитарная, гистиоцитарная) в лимфатических узлах, ор­ганах пищеварения, воспроизведения, сердечной, скелетной мышцах, других органах и тканях отмечают разрастание опухолей из недиф­ференцированных или слабодифференцированных клеток лимфоидного типа (селезенка и костный мозг не изменены);

при лимфогрануломатозе выявляют гиперплазию лимфоидных клеток или. полиморфно-клеточную пролиферацию, склеротические из­менения и некрозы в лимфатических узлах, селезенке, печени и дру­гих органах; среди полиморфных клеток выявляют многоядерные ги­гантские клетки типа Березовского - Штернберга, плазматические клетки, эозинофилы и нейтрофилы различной зрелости, а также фибробласты.

При дифференциальной диагностике следует прини­мать во внимание ряд хронических инфекционных болезней крупного ро­гатого скота (актиномикоз, туберкулез, паратуберкулез, бруцеллез), а так­же некоторые незаразные заболевания (гепатиты, циррозы, амилоидную дистрофию и другие заболевания печени, маститы, пневмонии, ретикуло-перикардиты, нефриты), сопровождающиеся лейкозоподобными измене­ниями гематологических показателей, называемых лейкемоидными реак­циями.