| Год пересадки | Вид животного | Авторы |
| Корова | B.G. Brackett et al. | |
| Свинья | W.T.K. Cheng et al. | |
| Овца | W.T.K. Cheng et al. | |
| Коза | A. Hanada | |
| Кошка | K.L. Goodrowe et al. | |
| Лошадь | E. Palmer et al. | |
| Собака | G.C.W. England |
В настоящее время программа ЭКО и ПЭ достаточно широко практикуется в молочном и мясном скотоводстве. Ежегодно в мире по программе ЭКО и ПЭ от коров-доноров получают свыше 250 тыс эмбрионов (R.J. Mapletoft, 2013). Лидером по производству лабораторных, или витральных, эмбрионов является Бразилия.
Сущность метода заключается в следующем. Из яичника коровы-донора аспирируют ооциты. Яйцеклетки для ЭКО в основном получают методом пункции яичников в естественный или стимулированный препаратами ФСГ половой цикл под контролем трансвагинальной эхографии. Метод был разработан в 1988 г (M.C. Pietersen et al., 1988). Процедура выполняется под эпидуральной анестезией. Корову фиксируют в станке. В ее влагалище вводят трансвагинальный датчик (с частотой 7,5 МГц) с зафиксированной на нем аспирационной (эхопозитивной) иглой. Перемещения яичников в тазовой полости (и манипуляции с ними) контролируют рукой через стенку прямой кишки (рис. 9). Аспирацию фолликулов проводят при помощи вакуумного насоса с ножной педалью управления. Вся процедура занимает около 30 минут (P. W. Farin et al., 2007).
Рис. 9. Оборудование и техника аспирации яйцеклеток под контролем УЗИ (J.F. Hasler, 2007): А- трансвагинальный датчик с аспирационной иглой; В - положение ультразвукового датчика, руки и яичника при пункции фолликулов
Забор яйцеклеток от коров-доноров проводят многократно - с частотой один или два раза в неделю. За один сеанс от коровы-донора методом трансвагинальной пункции фолликулов под УЗ-контролем получают от 1,5 до 10,6 ооцитов (C.R. Looney et al., 1994; J.F. Hasler et al., 1995; P. W. Farin et al., 2007). Выход пригодных для ЭКО яйцеклеток возрастает с 5,5 до 8, если забор яйцеклеток в спонтанно возникающую волну роста фолликулов проводить 2 раза в неделю (A. Garcia et al., 1996). Увеличению выхода яйцеклеток способствует также экзогенная гонадотропная стимуляция гонад препаратами ФСГ, проведенная через 36 ч после разрушения доминантного фолликула. Так, по материалам S.A. Chaubal et al. (2006), при трансвагинальной пункции фолликулов под ультразвуковым контролем через 48 ч после применения ФСГ выход яйцеклеток за сеанс возрастает с 4,6 до 10,6 ооцитов, а бластоцист, пригодных для пересадки, - с 0,9 до 4,6 по сравнению с контролем (без разрушения доминантного фолликула и экзогенной гонадотропной стимуляции гонад).
|
|
После аспирации пробирки с фолликулярной жидкостью отправляют в лабораторию для микроскопического исследования. Найденные под стереомикроскопом или инверсионным микроскопом ооциты, после оценки их качества по состоянию комплексов ооцит-кумулюс, помещают на 24 ч в среду для их культивирования, после чего вновь исследуют на пригодность к ЭКО. Яйцеклетки, созревшие в условиях in vitro (или in vivo) помещают в специальную пробирку или чашку для ЭКО, где в дальнейшем проводится оплодотворение и культивирование эмбрионов в CO2 – инкубаторе до стадии бластоцисты или морулы.
Для оплодотворения яйцеклеток в среды, где они культивируются, вводят отмытые и активированные (капацитированные) в условиях in vivo или vitro спермии в соотношении 250000:1. Для ЭКО применяется также метод интрацитоплазматической инъекции единственного спермия в яйцеклетку (ИКСИ).
|
|
Эффективность экстракорпорального осеменения непостоянна и колеблется от 37 до 74%. Преимплантационной стадии развития достигает только часть из начавших дробится оплодотворенных яйцеклеток. Выход преимплантационных зародышей составляет примерно 15…34% (J.F. Hasler, 1998).
Частота наступления беременности после нехирургической пересадки «пробирочных» эмбрионов достигает 35,6…60% (C.R. Looney et al., 1994; J.F. Hasler et al., 1995; P. W. Farin et al., 2007). Не все беременности вынашиваются и заканчиваются рождением жизнеспособного потомства. Репродуктивные потери в первом триместре стельности составляют 8…47% (H.D. Reichendach et a., 1992;J.M.C. Reinders et al., 1995; A. Massip et al., 1995; J.F. Hasler et al., 1995), при родах или вскоре после них - 14,9% (K.K. King et al., 1985).
ПРИЛОЖЕНИЯ
