1. Наименование исследования. Время свертывания цельной крови (ВСК) по Ли-Уайту.
Роль в физиологических процессах. Контакт крови с поврежденной сосудистой стенкой или чужеродной поверхностью, замедление и остановка кровотока (стаз) приводят к последовательной активации звеньев гемостаза: адгезии и агрегации тромбоцитов, каскадной активации плазменных белковых факторов, формированию протромбиназы, генерации тромбина и формированию фибринового сгустка, изолирующего поврежденное место и способствующего ускорению регенеративных процессов.
Характеристика теста. Оценивается время образования сгустка свежевзятой нестабилизированной венозной крови в стеклянной пробирке.
Преаналитические особенности. Специальной подготовки пациента не требуется.
Аналитические технологии, методика исследования. После обработки спиртом и высушивания области локтевого сгиба в локтевую вену вводят сухую широкую иглу без шприца. В сухую стеклянную несиликонированную пробирку набирают 1,0 мл крови, запуская секундомер сразу при ее попадании. Исследование проводят при температуре 20-25 °С. Через 2 мин после взятия крови, а затем каждые 30 с, пробирку осторожно наклоняют под углом 45-60° и определяют, растекается ли кровь по стенкам. Секундомер останавливают по завершении образования сгустка (кровь не переливается при наклоне пробирки).
Референтные пределы. ВСК при комнатной температуре – 6-11 мин. Модификация теста ВСК по Сухареву – в стеклянных капиллярах – вследствие малой чувствительности, крайне низкой информативности и сильной посторонней интерференции исключена из перечня исследований.
Клиническое применение результатов исследования. Ввиду невысокой чувствительности тест ВСК может использоваться лишь для экспресс-диагностики грубых сдвигов гемостаза, в основном со снижением свертывающих свойств крови – дефицита плазменных факторов, избытка антикоагулянтов, ДВС крови и др.
2. Наименование исследования. Активированное частичное (парциальное) тромбопластиновое время (АЧТВ, АПТВ).
Роль аналита в физиологических процессах. При активации внутреннего пути гемостаза в результате контакта плазмы с чужеродной поверхностью или поврежденной сосудистой стенкой, на фосфолипидных матрицах (мембраны тромбоцитов и других клеток) в присутствии Ca2+ активируется сборка теназного и протромбиназного ферментных комплексов, происходит образование тромбина и формирование фибринового сгустка.
Характеристика теста. Определяется время свертывания бедной тромбоцитами цитратной плазмы при физиологической температуре (37 °С), в условиях стандартной активации контактной фазы, в присутствии фосфолипидов и при добавлении ионов Ca2+. Заменителем тромбоцитарной фосфолипидной матрицы для сборки коагуляционных ферментных комплексов служат фосфолипиды мозга, эритроцитов или сои, заменителем активационной «контактной поверхности» - каолин или эллаговая кислота. Благодаря отсутствию тромбоцитов в плазме и добавлению их заменителя – парциального тромбопластина – на результаты теста АЧТВ практически не влияют тромбоцитарные факторы.
Преаналитические особенности. Соблюдают общие условия взятия венозной крови для исследования гемостаза.
Референтные пределы. 20–45 с; зависят от вида и активности реагентов, а также от типа оборудования.
Обеспечение и контроль качества. Для контроля качества чаще используется свежеразведенная референтная нормальная пулированная плазма (РНП-плазма, срок годности – 2-4 ч после разведения лиофилизированного препарата) с аттестованным значением АЧТВ.
Интерпретация результатов. Удлинение АЧТВ может свидетельствовать:
1. о врожденном или приобретенном снижении количества / активности факторов внутреннего пути гемостаза (XII, XI, IX, VIII, X, V, II, фибриногена), реже – фактора Виллебранда. Снижение активности факторов IX, X и II возможно, в частности, при лечении непрямыми антикоагулянтами;
2. об избытке в пробе цитрата – абсолютном (слишком большое количество добавленного цитрата) или относительном (неполное заполнение кровью пробирки со стандартным количеством цитрата);
3. о наличии в пробе гепарина (при введении пациенту или попадании из катетера) или гирудина;
4. о наличии в пробе некоторых инфузионных препаратов (в частности, декстранов);
5. о наличии в пробе продуктов деградации фибрина/фибриногена, патологических ингибиторов плазменных факторов или антикоагулянтов волчаночного типа;
Укорочение АЧТВ клинического значения не имеет, поскольку часто бывает связано с погрешностями взятия и обработки крови. Диагностика гиперкоагуляционных состояний должна основываться на определении маркеров активации гемостаза и оценке конкретной клинической ситуации.
Клиническое применение результатов исследования.
Определение АЧТВ используется для первичного выявления гипокоагуляционных сдвигов, диагностики гемофилии и мониторинга состояния больных с нарушениями свертывания крови, при ДВС крови, для контроля за гепаринотерапией, выявления патологических ингибиторов.
При диагностике антифосфолипидного синдрома для определения волчаночного антикоагулянта (антител к комплексам мембранных фосфолипидов со специфическими белками) используется т.н. люпус-чувствительный АЧТВ-реагент со сниженным содержанием фосфолипидов.
3. Наименование исследования. Протромбиновое время (ПВ).
Роль аналита в физиологических процессах. При активации внешнего пути свертывания действием тканевого фактора на плазменный фактор VII в присутствии ионов Ca2+ фактор X переходит в активную форму (Ха), формируя совместно с фактором Va протромбиназный комплекс. Образование протромбиназы приводит к генерации большого количества тромбина и формированию фибринового сгустка.
Характеристика теста. Определяется время образования фибринового сгустка в бедной тромбоцитами цитратной плазме (или цельной капиллярной крови) при активации внешнего пути гемостаза тканевым тромбопластином, содержащим тканевой фактор и фосфолипиды, в присутствии ионов Ca2+ и при физиологической температуре (37 °С).
Преаналитические особенности. Соблюдают общие условия взятия венозной крови для исследования гемостаза. Оптимальным является исследование венозной крови. Капиллярная кровь менее пригодна для определения ПВ, поскольку содержит непредсказуемое количество тканевого фактора, попадающего в нее при проколе пальца, что создает определенные проблемы (в частности, в педиатрии).
Методы оценки результатов теста ПВ.
Протромбиновая активность плазмы по Квику (A.Quick, 1935 г).
Тест основан на расчетах по калибровочному графику, отражающему зависимость активности протромбинового комплекса (то есть значения ПВ) от степени разведения нормальной плазмы, выраженной в процентах. Для построения калибровочного графика определяется ПВ неразведенной свежей нормальной пулированной плазмы (100 %) и ее 50 %, 25% и 12,5 % разведений. Некоторые исследователи считают нецелесообразным разведение 12,5% из-за снижения содержания фибриногена. Результаты откладываются на координатной сетке и соединяются линией (рис. ХХ).
Рисунок ХХ. Пример калибровочного графика ПВ, построенного в полуобратной полулогарифмической системе координат по 4 точкам – 100 %, 50 %, 25 % и 20 % (значению 36,6 с, полученному для плазмы пациента, соответствует 24 % протромбина по Квику).
При тестировании плазмы пациента измеряется значение ПВ, и по калибровочному графику определяется «процент протромбина по Квику», отражающий активность факторов протромбинового комплекса в процентах к плазме здоровых лиц.