Стоматологический факультет
ЗАНЯТИЕ № 2.1.4
ИММУНИТЕТ. ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ (РА, РП, РПГА)
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:
изучить механизмы взаимодействия АГ-АТ, принципы и методы постановки: РА, РПГА, РП.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:
1. РА. Компоненты, механизм, способы постановки, применение.
2. РПГА. Компоненты, механизм, способы постановки, применение.
3. РП. Компоненты, механизм, способы постановки, применение.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:
использовать реакции иммунитета в диагностике инфекционных болезней.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:
методами постановки и оценки результатов серологических реакций.
Теоретическая справка
Серология - раздел иммунологии, изучающий взаимодействие Аг иАт в реакциях invitro.
Серологические реакции - совокупность реакций invitro, основанных на Аг-Ат взаимодействии и направленных на выявление в сыворотке крови Ат, а также Аг в исследуемом материале.
Серологические реакции, протекающие invitro характеризуются специфичностью и чувствительностью.
Специфичность заключается в том, что детерминантные группы Аг взаимодействуют с соответствующими им по заряду, структуре и конфигурации активными центрами Ат, образуя комплекс Аг-Ат.
ПоливалентностьАг иАт обеспечивает формирование агрегатов их молекул, которые формируются в соответствии с теорией сетевых структур (Л. Поллинг). Согласно этой теории, к первоначально образовавшемуся комплексу Аг-Ат последовательно присоединяются другие молекулы Аг иАт, реагируя со свободными активными центрами и детерминантами. В результате многократного связывания формируются сетевые структуры, которые в присутствии электролита превращаются в макроагрегаты, выпадающие в осадок.Характер и выраженность реакции зависят от количественного соотношения антигенов и антител. Наиболее интенсивно реакции проявляются в том случае, если реагенты находятся в эквивалентном соотношении.
Чувствительность – это минимальное количество Аг или Ат, которое можно выявить в данной реакции.
Особенности протекания реакцийinvitro:
1) наличие электролита;
2) обратимость: образовавшиеся комплексы могут диссоциировать на составляющие компоненты без изменения их свойств;
3) двухфазность: первая фаза – взаимодействиеАг иАт (обычно эта фаза длится несколько секунд или минут); вторая – характеризуется внешними признаками образования иммунных комплексов - видимое проявление реакции (феномен).Эта фаза может развиваться от нескольких минут до нескольких часов.Оптимальное специфическое взаимодействие антител с антигеном происходит в изотоническом растворе с рН, близким к нейтральному.
Феномены реакции: агглютинация, преципитация, лизис, свечение, изменение цвета и др. Это зависит ота) физико-химических свойств Аг (размеры, физическое состояние); б) класса и вида Ат (полные, неполные); в) условий опыта (рН, t, консистенция среды и др.)
Направления реакций (цель):
Сероиндикация - обнаружение возбудителя в исследуемом материале (определение рода возбудителя) с поливалентными сыворотками.
Сероидентификация - определение вида возбудителя или отдельных антигенов с монорецепторными сыворотками.
Серодиагностика - обнаружение антител или определение титра антител в сыворотке крови.
Схема описания реакции:
Направление (цель)
Ингредиенты (компоненты)
Механизм (схема)
Способ постановки реакции
Результат
Вывод
Работа № 1. Реакция агглютинации (РА)
Цель:
- Определить родовую принадлежность выделенной чистой культуры в ориентировочной РА с поливалентными сыворотками: сальмонеллезной ABCDE, шигеллезной, иерсиниозной (сероиндикация).
Самостоятельная работа: поставить реакцию агглютинации на стекле, оценить результат, сделать вывод (см. теоретическую справку). Описать реакцию по схеме.
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
Механизм:
Постановка:
Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Цель:
- Определить вид исследуемой культуры в развернутой РА на стекле смоновалент-
ными сыворотками (сероидентификация).
Самостоятельная работа: поставить реакцию агглютинации на стекле, оценить результат, сделать вывод (см. теоретическую справку). Описать реакцию по схеме.
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
Механизм (схема см. выше)
Постановка:
Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Цель:
- Определить титр антител в парных сыворотках пациента в РА (объемный метод) с дизентерийным диагностикумом (серодиагностика). Парные сыворотки - это сыворотки от одного и того же больного, взятые в начале болезни и через одну две недели с целью выявления нарастания титра антител.
Самостоятельная работа: учесть результат развернутой реакции агглютинации (объемный метод), сделать вывод (см. теоретическую справку). Описать реакцию по схеме.
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
Механизм (см. выше)
Постановка:
1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 КС КД
Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________