Франко-американо-британская классификация миелоидных и лимфоидных опухолей (ФАБ-классификация) (Bennet J. M. etal, 1976, 1985) основана на морфоцитохимических особенностях незрелых лейкозных клеток. Одновременно с появлением ФАБ-клас-сификации и на смену подобным ей пришли классификации мор-фоиммуноцитогенетические (MlС-workingclassification, 1986, 1988), иммунологические - EGIL (Бене М. К. и др., 1996) и др. В последнее время появились классификации миелоидных и лимфоидных опухолей, которые дополнили существовавшие прежде и кроме морфоиммуноцитогенетических свойств клеток учитывают их молекулярно-генетические характеристики (Воробьев А. И. и др., 2002;"Классификация ВОЗ /Хэррис Н. Л. и др., 2000/; Wardi-man J. W. и др., 2002). Кроме острых лейкозов, представленных в ФАБ-классификации, они включают ряд новых наименований, в частности вторичные миел областные лейкозы, связанные с проводимым лечением алкилирующими препаратами и радиационным облучением, ряд лейкозов со специфическими цитогенетическими и молекулярно-генетическими нарушениями, миелобластный лейкоз с мультилинейной дисплазией и др. Согласно рекомендациям создателей классификации ВОЗ, диагноз острого лейкоза может быть установлен при достижении 20%-ного уровня бластных клеток в костном мозге (30%-ного - по ФАБ-классификации).
С развитием техники получения моноклональных антител (МКА) появилась возможность изучения иммунологических маркеров клеток различных клеточных линий (линейные маркеры) и маркеров различных уровней дифференцировки клеток. Методы проточной цитометрии, иммуноцитохимические, метод непрямой иммунофлюоресценции и другие позволяют выявить экспрессию поверхностных клеточных иммунных маркеров, объединяемых в группы дифференцировочных антигенов - кластеров дифференцировки (CD), - определить принадлежность клеток к миелоидной или лимфоидной клеточным линиям и стадию созревания клетки на пути ее дифференцировки. Благодаря иммунофе-нотипированию клеток среди Т-клеточных острых лимфобласт-ных лейкозов (ОЛЛ) были выделены в зависимости от стадии дифференцировки про-Т-тип, пре-Т-тип, кортикальный Т-тип, зрелый Т-тип. Среди В-клеточных ОЛЛ выделены про-В-тип, тип Common, пре-В-тип, зрелый В-тип ОЛЛ. Кроме этого, выделены иммунологические варианты так называемых стволовоклеточных лейкозов.
|
|
Значительная часть острых миелобластных лейкозов диагностируется морфоцитохимически. Определение иммунофенотипамиелобластов необходимо при отсутствии в лейкозных клетках основных цитохимических маркеров - миелопероксидазы, хлор-ацетат-эстеразы, липидов или их слишком слабой активности. Поэтому определение антигенного профиля субстратных клеток лейкозной популяции необходимо при острых миелобластных лейкозах с минимальной дифференцировкой, монобластных, мегака-риобластных лейкозах, эритромиелозе и эритробластном лейкозе. Диагностике некоторых типов миелобластных лейкозов, вошедших в новейшие классификации, помогают выявленные корреляции между цитогенетическими аномалиями в лейкозных клетках и их иммунологическими детерминантами. Трудно ассоциировать иммунофенотип и цитогенетические особенности клеток с их мор-фоцитохимическими характеристиками и проводить корреляции между ними. Однако названия лейкозов базируются по-прежнему на морфологических особегпгостях клеток, а в основе новейших классификаций лежат морфоцитохимические характеристики, и диагностическая работа во многих лабораториях начинается с мор-фоцитохимического анализа клеточного субстрата. Тем не менее необходимо еще раз подчеркнуть, что только комплексное использование всех современных методов может сделать диагностику лейкоза успешной.
|
|
Цитохимическая окраска клеток позволяет разделить острые лейкозы на 2 основные группы - острые лимфобластные лейкозы (ОЛЛ) и острые нелимфобластные лейкозы (ОНЛЛ), а также, основываясь на морфоцитохимических характеристиках клеток, выделить среди ОНЛЛ несколько основных вариантов. Классификация ОЛЛ в настоящее время полностью основана на иммунофе-нотипировании и цитогенетике, и тем не менее в ряде случаев мор-фоцитохимия может иметь некоторое вспомогательное значение в предварительной дифференциальной диагностике Т- и В-клеточных форм ОЛЛ.
Цитохимические реакции проводятся на мазках крови, лейко-концентратов, костного мозга, на отпечатках и срезах биопсийного материала из лимфоузлов, селезенки, кости и других органов и тканей.
Проведение цитохимических реакций требует строгого соблюдения многих правил, связанных с приготовлением препаратов и рабочих растворов из реактивов, фиксацией мазков, условиями их инкубации в процессе реакции и дальнейшей окраской.
Цитохимические реакции следует проводить до начала терапии лейкоза. Результаты исследований, которые проводятся в процессе лечения, в период рецидивов заболевания, сильно зависят от химиотерапии, в результате которой может не только измениться характер и интенсивность цитохимических реакций, но также может быть полностью редуцирована активность некоторых ферментов.
Очевидно, что просто морфологическая диагностика вариантов острого лейкоза без цитохимических исследований чаще всего невозможна, и в то же время любое цитохимическое исследование начинается с анализа морфологических особенностей исследуемых клеток, с обычной паноптической окраски. Поэтому правильно говорить о морфоцитохимических исследованиях клеток.