Диагностика хеликобактериоза.

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ диагностика Helicobacter pylori (НР) отличается своей технической сложностью и дороговизной. Поскольку биоптат слизистой оболочки желудка или 12-перстной кишки извлекается в эндоскопическом отделении, а его исследование проводится в микробиологической лаборатории, то существует проблема транспортировки материала. Данную проблему осложняет то, что НР является микроанаэрофилом, т.е. концентрация кислорода в атмосферном воздухе слишком высока для него и кислород губительно действует на микроорганизм. Одной из лучших транспортных сред является 0,5 мл 20% раствора глюкозы. При температуре +4ºС биоптат может сохраниться в ней в течении 5 часов без потери жизнеспособности бактерий. НР растет микроанаэростате с использованием газогенераторных пакетов. Время инкубации в термостате – 3 - 5 дней. При окраске по Граму бактерия окрашивается Грам – отрицательно.

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ выявления НР. Обнаружить НР можно и на обычных, окрашенных гематоксилином и эозином препаратах, если они достаточно тонкие и хорошо окрашены. Однако целесообразно проводить элективные методы окраски. Лучшими из них являются: по Граму, по Романовскому-Гимзе, по Вартину-Старри (кстати, именно при этой окраске биоптатов их и обнаружили в 1983 г.), акридиновым оранжевым, карболовым фуксином, толуидиновым синим. В зависимости от того, какая методика применяется в лаборатории лечебного учреждения, такую и целесообразно использовать, поскольку чувствительность их близка, хотя считаются более чувствительными окраски по Гимзе и акридиновым оранжевым (85% и 79% соответственно). В тоже время окраска по Граму позволяет выявлять даже кокковые формы микроорганизма. При выполнении микробиологических и морфологических методов диагностики НР необходимо помнить, что микроб обычно колонизирует неравномерно и в биоптат могут не попасть колонии НР. Для повышения точности исследования необходимо брать несколько биоптатов, поднимаясь от пилорического отдела желудка к кардии (3-5 кусочков). Описанные методики не только достаточно дороги, требуют высокой диагностической техники, но и результат исследования получается через несколько дней (7-10). Современные методики цитологического исследования мазков желудочной слизи или раздавленных биоптатов СОЖ считаются более информативными, дешёвыми, быстрыми и технически простыми, чем поиск НР в биоптате.

Обсемененность НР гистологических препаратах (цитологических) определяют при увеличении х 630, а лучше – х 1000.

Для ускорения диагностики предлагаются инвазивные методики, дающие результат непосредственно во время исследования. Из них можно назвать такие биохимические тесты, как промышленно выпускаемые системы "CLO- тест", "Кампи-тест" и др. Используемая в настоящее время диагностическая система "Pronto Dry" позволяет выявлять инфицированность НР непосредственно при выполнении эндоскопического исследования в течение 5 минут. Для этого достаточно нанести на слизистую желудка специальный реактив и по изменению окраски судить о наличии или отсутствии НР

Они основаны на способности НР разрушать мочевину с образованием аммиака и углекислого газа. При этом в случае внесения биоптата в раствор мочевины с индикатором типа фенолрот меняется окраска раствора. Однако, не смотря на высокую чувствительность эти тесты могут давать отрицательные результаты в связи с отсутствием НР в биоптате. В последнее время для повышения чувствительности исследования предложены иммунологические тесты, выполняемые непосредственно на слизистой желудка о время эндоскопии. Во время эндоскопии на слизистую наносят специальные антисыворотки против НР или раствор мочевины с индикатором и по изменению окраски слизистой судят о наличии микроорганизма.

Значительно более простым и эффективным способом диагностики НР считается использование неинвазивных биохимических и иммунологических тестов диагностики НР.

БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ диагностики НР в настоящее время распространяются повсеместно. Они основаны на способности НР расщеплять мочевину. Для исследования используется мочевина, меченная изотопами углерода ¹³C и ¹⁴C. Это так называемые уреазныедыхательные тесты.

При их проведении пациент после пробного завтрака получает 20,0 водного раствора мочевины, меченной изотопом углерода. Спустя 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120 минут пациент выдыхает воздух в специальный сосуд, содержащий вещества, связывающие выдыхаемый углекислый газ, или на специальную пластину. В зависимости от количества выделяемого меченного углекислого газа судят о наличии или отсутствии НР на слизистой желудка. Диагностическая чувствительность и специфичность данных тестов превышает 95%. Однако, данная методика отличается очень высокой стоимостью, поскольку требует очень дорогого оборудования (до 250.000 долларов США), а изотоп ¹⁴C обладает радиоактивностью. Близкие методики предполагают использование мочевины, содержащей изотоп азота ¹⁵N. По выделяемому с мочой меченому азоту в течение 2 часов получают результат исследования. Чувствительность этого метода составляет 96% при 100% специфичности.

Биохимические методики диагностики НР в настоящее время считаются наиболее удобными для скрининг - диагностики и оценки эффективности эрадикации НР.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ диагностики НР в настоящее время успешно конкурирует с биохимическими методиками. Они основаны на определении специфических анти-НР антител классов А, М, G в крови больного. Наиболее употребительными являются методики с использованием иммуноферментного анализа (ИФА, ELISA). В настоящее время, как в нашей стране, так и за рубежом, выпускаются специфические антисыворотки, позволяющие не только определять НР как вид, но и отдельные его штаммы различной патогенности. Чувствительность этих тестов очень высока. Так тест-система "BIOMERICA" имеет чувствительность 99,4%, специфичность 93,5%, точность – 97,4%. Они минимально затруднительны для больного. Для исследования достаточно 5 мл венозной крови. ELISA – тесты считаются идеальными в педиатрической практике, при массовых обследованиях населения. У них есть один недостаток – их не возможно использовать для быстрой оценки эффективности эрадикации НР, поскольку специфические антитела медленно исчезают из крови больного. Этот процесс может растянуться до 6 месяцев.

В настоящее время в практику довольно широко внедряется диагностика НР с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР). Методика достигает 100% чувствительности и специфичности. Субстратом являются биоптат слизистой желудка, мазок или соскоб желудочной слизи. ПЦР может быть использована для быстрой оценки эффективности эрадикации возбудителя.