Волонтёры
Для этого исследования были задействованы 33 здоровых японских женщины (возрастной диапазон 23-57 лет; индекс массы тела 18,5-25 кг / м2). Толщина подкожной клетчатки на щеке, измеренная с помощью диагностического прибора для ультразвуковой визуализации (SSA-550A; Toshiba Medical Systems, Отавара, Япония), была почти одинаковой у всех добровольцев. Все ультразвуковые изображения были получены с использованием линейного зонда, работающего на частоте 12,5 МГц, на пересечении горизонтальной линии от нижнего края крыла носа и вертикальной линии от угла глаза (рис. 2) с помощью ультразвука, диагностический гель (LOGIQLEAN; GE Healthcare, Япония, Токио), наносимый на поверхность кожи. На ультразвуковых изображениях вдоль границ между слоями дермы и мышц проводились линии для обозначения подкожной ткани, затем измерялась и усреднялась толщина подкожной ткани в трех разных точках. Письменное информированное согласие было получено от всех добровольцев, а протокол исследования был одобрен комитетами по этике POLA Chemical Industries и Mita Hospital Международного университета здоровья и благосостояния.
Количественный анализ внутреннего строения подкожной клетчатки
Рисунок 2. Место измерения на лице. Область внутри квадрата - это область оценки провисания. Осевые снимки МРТ были получены от нижнего края крыла носа. Толщину подкожной клетчатки и эластичность глубокой части кожи измеряли в точке пересечения горизонтальной линии, идущей от нижнего края крыла носа, и вертикальной линии, идущей от угла глаза.
Чтобы неинвазивно оценить внутреннюю структуру подкожной клетчатки, с помощью магнитно-резонансной томографии головы были получены сечения лица с высоким разрешением. Сначала доброволец лежал на спине, а катушка для головы была помещена на лицо. Затем у каждого добровольца получали изображения, взвешенные по плотности протонов, с помощью сканера МРТ (Achieva 3.0T; Philips Medical Systems, Best, Нидерланды). Осевая МРТ нижнего края крыла носа (рис. 2) использовалась для анализа структуры подкожной клетчатки щеки (рис. 3А). На МРТ было выделено квадратное изображение, включающее подкожную клетчатку щеки, а затем проанализировано с помощью программного обеспечения для анализа изображений ImageJ версии 1.47 (National Institutes of Health, Bethesda, MD) с усилением контраста, усреднением яркости, уменьшением шума и бинаризация. Крупные кровеносные сосуды, обнаруженные на МРТ, были вручную удалены из бинаризованных изображений, затем были рассчитаны подкожная клетчатка и темные области внутри нее.
Оценка провисания
После умывания каждого добровольца просили сесть на стул в комнате при постоянной температуре (21 ± 1° C) и относительной влажности (50 ± 5%) в течение 15 минут и покрыть верхнюю часть тела серой тканью, чтобы уменьшить оптические отражения. Далее лицо сфотографировали под углом 45°. Основываясь на методе, ранее описанном Ezure et al.7, два опытных эксперта оценили степень обвисания кожи верхней щеки (рис.2) по описательной шкале, а затем усреднили эти оценки для всех участников.
Измерение физических свойств кожи
Физические свойства глубокой части кожи оценивали с помощью Cutometer MPA580, оснащенного зондом диаметром 6 мм (Courage & Khazaka, Кельн, Германия), с биологической эластичностью (значения Ur / Uf) в качестве параметра. Эластичность кожи измеряли в точке пересечения горизонтальной линии от нижнего края крыла носа и вертикальной линии от угла глаза (рис. 2). Устройство Cutometer может передавать эффекты смещения в подкожную ткань на глубине, сопоставимой с диаметром зонда. В результате больший диаметр зонда обеспечивает более четкие параметры, касающиеся физических свойств подкожной ткани. Таким образом, данные, полученные в этом исследовании с использованием зонда диаметром 6 мм, были сочтены точно отражающими физические свойства подкожной ткани. Кожу вакуумировали при пониженном давлении 30 кПа (300 мбар) в течение 2 секунд, затем отпускали на 2 секунды для измерения биологической эластичности (значения Ur/Uf). Эту процедуру повторяли четыре раза в одном и том же месте, затем полученные значения усредняли. Все измерения проводились с добровольцем на спине.
Гистологический анализ
Образцы тканей человека были приобретены в Аналитических биологических службах (Уилмингтон, Делавэр). Использование образцов тканей человека было одобрено этическим комитетом POLA Chemical Industries. Кожу и подкожную ткань брали вдоль горизонтальной линии от нижнего края крыла носа, фиксировали в 10% буферном растворе формалина (Вако, Осака, Япония), заливали парафином и разрезали на срезы толщиной 6 мкм. Все срезы окрашивали гематоксилином (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) и эозином Y (Wako) и исследовали под стереомикроскопом (Nikon SMZ445; Nikon, Токио, Япония).
Статистический анализ
Корреляционный анализ проводился с использованием коэффициента ранговой корреляции Спирмена и коэффициента корреляции продукта-момента Пирсона. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. Все статистические анализы были выполнены с использованием программного обеспечения JMP версии 11.0 (SAS Institute, Кэри, Северная Каролина, США).
Рисунок 3. МРТ кожи лица и микроскопия гистологических препаратов. (A) Квадрат на снимке МРТ показывает анализируемую область, включая подкожную клетчатку щеки. Стрелка указывает нижний край крыла носа. Масштаб = 10 мм. (B) Темно-серые (низкая интенсивность сигнала) области на увеличенных изображениях указывают на сетевые структуры в подкожной клетчатке. Масштабная линейка = 1 мм. (C) Образцы ткани кожи, окрашенные гематоксилином и эозином. Масштабная линейка = 1 мм. В подкожной клетчатке обнаружены сетчатые фиброзные структуры. Пунктирные линии на панелях b и c обозначают границу между дермой и подкожной клетчаткой, а звездочки (*) обозначают дерму.
Результаты
Визуализация удерживателей кожи при помощи МРТ
МРТ обеспечивает отличное контрастное разрешение для мягких тканей и поэтому идеально подходит для наблюдения за микроструктурой подкожной ткани. Для получения качественных снимков МРТ в областях подкожной клетчатки изображения получали с помощью катушки для головы на лице. Темно-серые области в подкожной клетчатке щеки наблюдались на аксиальных изображениях, полученных с нижнего края крыла носа (рис. 3A, B). На МРТ различия в тканевых структурах соответствовали различиям в интенсивности сигналов, выраженных в различных оттенках серого. На изображениях, взвешенных по протонной плотности, жировая ткань выглядит ярче (высокая интенсивность сигнала), в то время как мышечная и сухожильная ткань с богатыми волокнами компонентами выглядит темнее (низкая интенсивность сигнала). Таким образом, считалось, что темные области в подкожной клетчатке соответствуют волокнистой ткани - богатая соединительная ткань, т. е. удерживатели кожи. Чтобы подтвердить гистологические особенности, были приготовлены образцы ткани из той же области, окрашенные гематоксилином и эозином (HE) (рис. 3C). Волокнистый сетевые структуры в подкожной клетчатке, наблюдаемые на МРТ, морфологически соответствовали структурам RC, наблюдаемым на срезах ткани, окрашенных HE (рис. 3B, C).