Тема 2. Анализ лекарственного растительного сырья, содержащего полисахариды
Химический анализ лекарственного растительного сырья, содержащего полисахариды
Цель занятия _________________________________________________________
___________________________________________________________________________________________________________________________________________
Задание 1. Проведите выделение полисахаридов из лекарственного растительного сырья.
Методика. Аналитическую пробу сырья измельчают до частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2мм. Около 10г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 200 мл воды, колбу присоединяют к обратному холодильнику и кипятят при перемешивании на электрической плитке в течение 30 минут. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя первый раз 200 мл, второй раз – 100 мл воды. Водные извлечения объединяют, центрифугируют с частотой вращения 5000 об/мин в течение 10 минут, декантируют в мерную колбу вместимостью 500 мл через 5 слоев марли, вложенную в стеклянную воронку диаметром 55мм и предварительно промытой водой. Фильтр промывают водой и доводят объем раствора водой до метки (раствор А).
25 мл раствора А помещают в колбу вместимостью 200 мл, прибавляют 75 мл 96 % спирта, перемешивают, подогревают на водяной бане в течение 3 минут для лучшей коагуляции осадка. Осадок фильтруют через бумажный фильтр.
Задание 2. Проведите качественные реакции на полисахариды.
Качественные реакции на крахмал.
1. Образование клейстера. В колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0г крахмала и прибавляют 50 мл воды. Смесь нагревают в течение 5-7 минут на электрической плитке при постоянном перемешивании.
Наблюдения: ________________________________________________________
2. Реакция с раствором йода. К 2 мл охлажденного крахмального клейстера добавляют 1 каплю раствора Люголя (или йода).
Наблюдения: ________________________________________________________
Окрашенный раствор нагревают до 100°С, а затем охлаждают до комнатной температуры.
Наблюдения: ________________________________________________________
3. Реакция с реактивом Фелинга. К 2 мл крахмального клейстера прибавляют 2 капли водного раствора меди (II) сульфата (раствор А) и 2 капли щелочного раствора сегнетовой соли – калиево-натриевой соли кислоты винной (раствор Б). Смесь нагревают на водяной бане.
Наблюдения: _________________________________________________________________
Напишите химизм реакции.
4. Кислотный гидролиз крахмала. В пробирку помещают 1 мл крахмального клейстера, 10 капель 10 % раствора кислоты серной и нагревают на водяной бане в течение 20 минут.
Наблюдения: ________________________________________________________
Каплю гидролизата помещают на предметное стекло и смешивают с 1 каплей раствора йода в калия йодиде.
Наблюдения: ______________________________________________________________
В пробирку с гидролизатом прибавляют 2 капли водного раствора меди (II) сульфата (раствор А) и 2 капли щелочного раствора сегнетовой соли – калиево-натриевой соли кислоты винной (раствор Б). Смесь нагревают на водяной бане.
Наблюдения: ________________________________________________________
Напишите химизм реакции.
Выводы: ________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
Качественные реакции на декстрин.
1. Реакция с раствором щелочи. 0,1г декстрина растворяют в 10 % растворе натрия гидроксида.
Наблюдения: _________________________________________________________
2. Реакция с реактивом Фелинга. К щелочному раствору декстрина прибавляют 1 мл реактива Фелинга и нагревают смесь на кипящей водяной бане.
Наблюдения: _________________________________________________________
3. Взаимодействие со спиртом. К 0,5 мл 5 % раствора декстрина прибавляют 5 мл 95 % спирта.
Наблюдения: ______________________________________________________________
Выводы: _____________________________________________________________________
Качественные реакции на целлюлозу.
1. Реакция с раствором йода. На порошок целлюлозы наносят каплю раствора йода.
Наблюдения: ______________________________________________________________
2. Реакция с йодом в растворе цинка хлорида и калия йодида (хлор-цинк-йод). На предметное стекло помещают щепотку порошка целлюлозы и смачивают реактивом.
Наблюдения: ____________________________________________________________________
Выводы: ___________________________________________________________________
______________________________________________________________________
Качественные реакции на инулин.
1. Реакция с α-нафтолом (реакция Молиша). На поперечный разрез корня цикория (одуванчика, эхинацеи, девясила или клубней топинамбура) наносят каплю 20% спиртового раствора α-нафтола и каплю кислоты серной концентрированной.
Наблюдения: __________________________________________________
Выводы: ____________________________________________________________
_____________________________________________________________________
Качественные реакции на слизь.
1. Реакция с раствором щелочи. В пробирку наливают 1-2 мл 10 % настоя корня алтея и прибавляют 2 капли раствора натрия гидроксида (или аммиака).
Наблюдения: _______________________________________________________
2. Реакция с кислотой хлористоводородной концентрированной. В пробирку наливают 1 мл 10% настоя корня алтея и прибавляют 2-3 капли кислоты хлористоводородной концентрированной.
Наблюдения: _____________________________________________________________
К окрашенному раствору приливают 2 мл спирта.
Наблюдения: ____________________________________________________________
3. Реакция с раствором свинца ацетата. К 2 мл раствора, приготовленного в задании 1, прибавляют 2 мл раствора свинца ацетата.
Наблюдения: ____________________________________________________________
4. Определите индекс набухания сырья, содержащего слизь. 1,0г цельного или измельченного сырья, содержащего слизь, помещают в мерный цилиндр вместимостью 25 мл с притертой пробкой и ценой деления 0,5 мл, Сырье увлажняют 1 мл спирта, добавляют воду до метки и тщательно взбалтывают смесь каждые 10 минут в течение 1 часа для равномерного смачивания сырья. Через 1,5 часа цилиндр вращают вокруг вертикальной оси для того, чтобы осели всплывшие частицы сырья. Через 2 часа измеряют объем набухшего сырья с окружающей слизью. Проводят не менее 3 определений одновременно. Рассчитывают среднюю величину индекса набухания.
| Расчет индекса набухания: |
Выводы: ________________________________________________________________
_________________________________________________________________________ Задание 3. Проведите хроматографический анализ моносахаридов в семенах подорожника блошного. Зарисуйте схему хроматограммы, рассчитайте величину Rf моносахаридов, сделайте вывод.
10 мг порошка семян подорожника блошного (сито 355) помещают в ампулу, прибавляют 5 мл (230 г/л) раствора трихлоруксусной кислоты и перемешивают. Ампулу запаивают и нагревают смесь в сушильном шкафу при 120°С в течении 1 часа. Гидролизат центрифугируют, переносят надосадочную жидкость в колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10 мл воды и выпаривают раствор под вакуумом до сухого остатка (азеотропная перегонка). Растворяют осадок в 10 мл воды и снова выпаривают под вакуумом досуха. Растворяют остаток в 2 мл спирта.
Растворы стандартных образцов: 10 мг арабинозы растворяют в минимальном количестве воды и приливают к 10 мл спирта. Так же готовят стандартные образцы ксилозы и галактозы.
На линию старта хроматографической пластинки размером 7x15см, покрытой слоем силикагеля, наносят по 10 мкл гидролизата и растворов стандартных образцов арабинозы, ксилозы и галактозы. Пластинку помещают в камеру со смесью растворителей вода-ацетонитрил (15:85) и хроматографируют. Когда фронт растворителей пройдет 15см от линии старта, пластинку вынимают, высушивают на воздухе, обрабатывают реактивом и нагревают в сушильном шкафу при 100
| Схема хроматограммы | № пятна | Величина Rf | Окраска пятен |
Система растворителей: _____________________________________________
Реактив проявления: ________________________________________________
Выводы: ______________________________________________________
_______________________________________________________________
__________________________________________________________________