1. ФЭК, СФМ по обеим цветным реакциям.
2. Комплексонометрия.
Метаболизм
Пробоподготовка
Метод Крамаренко
100 г измельченных органов заливают раствором серной кислоты оставляют на 2 ч при периодическом перемешивании. Кислые водные вытяжки из биологического материала соединяют. К центрифугату прибавляют кристаллический сульфат аммония. Образующийся осадок примесей отделяют от жидкости центрифугированием. Подкисленную жидкость дважды взбалтывают с диэтиловым эфиром. Эфирные вытяжки, содержащие примеси, отделяют от кислой водной фазы и в дальнейшем не исследуют.
Кислую водную фазу подщелачивают раствором гидроксида натрия и 3 раза взбалтывают с хлороформом Хлороформные вытяжки соединяют, профильтровывают и на водяной бане отгоняют хлороформ до небольшого объема. Оставшийся хлороформ выпаривают на воздухе досуха. Сухой остаток растворяют в растворе соляной кислоты. В полученном растворе проверяют наличие алкалоидов.
Обнаружение героина
1)Реакции с реактивами группового осаждения алкалоидов.
Героин дает осадки с реактивами группового осаждения алкалоидов (реактивы Бушарда, Драгендорфа, Майера, Зонненшейна и др.).
2)Цветные реакции. Героин дает окраску с концентрированной азотной кислотой, реактивами Манделина, Марки, Фреде и Эрдмана.
3)Реакция с хлоридом железа (Ш).
При наличии героина появляется синяя окраска.
4)Реакция с йодноватой кислотой (НIO 3).
выделяется свободный иод, который при взбалтывании с хлороформом переходит в хлороформный слой, окрашивая его в фиолетовый цвет.
5)Метод хроматографии.
На линию старта на хроматографической пластинке наносят 1—2 капли хлороформной вытяжки. Правее на расстоянии 2—3 см на линию старта наносят каплю раствора «свидетеля» (0,01 %-й раствор героина в хлороформе). Пятна на пластинке подсушивают на воздухе. Затем пластинку вносят в камеру для хроматографирования, насыщенную парами растворителей (эфир — ацетон — 25 %-ый аммиак в соотношении 40: 20: 2). Камеру плотно закрывают крышкой. После того как система растворителей поднимется на 10 см выше линии старта, пластинку вынимают из камеры, подсушивают на воздухе и опрыскивают реактивом Драгендорфа, модифицированным по Мунье.
При наличии героина пятна этого алкалоида на хроматографической пластинке приобретают розовато-бурую окраску (Rf = 0,18±0,01).
6)Обнаружение героина по УФ- и ИК-спектрам.
Количественное определение ВЭЖХ-анализ
В-ва,изолируемые экстракцией полярными растворителями и сорбцией(фенотиазины)
Метаболизм фенотиазинов протекает в 3-х направлениях:
1 путь - трансформация в радикалах R1 и R2
а)N-O-S-деметилирование, которое приводит к увеличению полярности соединений;
б)окисление N10-боковой цепи.
2 путь - сульфоокисление
Сульфоокисление - образование сульфоксидов со степенью окисления 4 и 6.
3 путь - ароматическое гидроксилирование в положениях 3, 6 с последующим конъюгировапием с глюкуроновой кислотой.
Фотометрия в видимой области спектра
В основу этих методов положено измерение поглощения окрашенных продуктов реакции пр.фенотиазина:
-с конц. H2SO4 –
-с реактивом Манделина и конц. H2SO4.
Фотометрия в УФ-области спектра
Выделение из биологического материала (метод Соломатина)
соединения основного характера
Биоматериал + 100% этанол + щавелевая кислота à образование растворимых в воде оксалатов фенотиазинов à настаивают 3 раза по 2 часа à вытяжка à упаривание + 100% спирт à очищенный от белков раствор à упаривание + вода à фильтрование à очищенный раствор + эфир à органическая фаза à исследование на фенотиазины.
Изолирование из мочи и крови
Раздельно 5-10 мл мочи и 2 мл крови + NaOHà 10 минут на водяной бане à гидролизат à охлаждается до комнатной температуры и дважды извлекается н-гептаном, содержащим 3% изоамилового спирта à промывают водой, насыщенной гептаном и делят на две равные части à в одной части проводится обнаружение производных фенотиазина методом тонкослойной хроматографии, а в другой – количественное определение.
Качественное обнаружение.
3.С растворами йодида висмута в йодиде калия и фосфорно-молибденовой кислоты получаются аморфные осадки.
4.С концентрированной серной кислотой возникает устойчивое пурпурно-красное окрашивание.
4. С формалинсерной кислотой аминазин дает пурпурно-красное окрашивание, усиливающееся при стоянии.
5. С концентрированной азотной кислотой возникает быстро исчезающее пурпурно-красное окрашивание.
Качественный анализ
а) Реакции осаждения
+общеалкалоидные осадающие реактивы (часто реактив Драгендорфа) +соль Рейнеке, Bi, Au
б) Микрокристаллические реакции
+5% раствор хлорного золота дает характерные кристаллические осадки +соль Рейнеке дает характерные кристаллические осадки
4) окисление солями металлов, имеющих высшую степень окисления(FeCl3иHPtCl4).
+ HPtCl4 → фиолетовый осадок; Тиоридазин – серо-розовый осадок;
Количественное определение
ФЭК
Реакции образования тиомочевинных комплексов висмута мешают окислители.
Предел обнаружения: 0,4 мкг висмута в пробе. Граница обнаружения: 0,1 мг висмута в 100 г биологического материала.
Реакция с оксином основана на переведении ионов висмута в ацидокомплекс [ВiI 4 ] -, который при взаимодействии с оксином в кислой среде образует оранжево-красный осадок, представляющий собой ионный ассоциат (иодвисмутат оксина). Образование этого ионного ассоциата можно представить следующими уравнениями:
Предел обнаружения: 5 мкг висмута в пробе. Граница обнаружения: 0,1 мг висмута в 100 г биологического материала.
Если реакция дает положительный эффект, то проводят реэкстракцию.
Bi2(SO4)3 + 6ДДТКNa à 2(ДДТК)3Bi + 3Na2SO4
Хлороформный слой, содержащий (ДДТК)3Bi, отделяют, добавляют HNO3
(ДДТК)3Bi + HNO3 à Bi(NO3)3 + 3ДДТКН
С реэкстрактом проводят реакции:
Выделение ионов висмута из минерализата.К минерализату прибавляют раствор диэтилдитиокарбамата натрия. При этом ионы
висмута с этим реактивом образуют внутрикомплексное соединение:
Микрокристаллические реакции:
Реакция с бруциноми бромидом калия. На сухой остаток наносят каплю 2 н. раствора азотной кислоты, а затем прибавляют каплю насыщенного раствора бруцина в 1 н. серной кислоте и каплю 5%-го раствора бромида калия. При наличии ионов висмута сразу же или через несколько минут образуются желто-зеленые кристаллы, собранные в виде сфероидов.
Реакция с хлоридом цезия и иодидом калия.На сухой остаток наносят 1—2 капли 3 н. раствора соляной кислоты. Затем с одной стороны жидкости на предметном стекле помещают кристаллик хлорида цезия CsCl, а с другой — кристаллик иодида калия. Нанесенные кристаллики реактивов с помощью тонкой стеклянной палочки соединяют с жидкостью. При наличии ионов висмута в растворе образуются оранжево-красные кристаллы Cs[BiI 4 ], имеющие форму шестиугольников или шестилучевых звездочек. Предел обнаружения: 0,1 мкг висмута в пробе. Граница обнаружения: 0,1 мг висмута в 100 г биологического материала.
Реакция с тиомочевиной.В пробирку вносят 0,5 мл водной фазы, к которой прибавляют 0,5 мл насыщенного раствора тиомочевины. В пр Bi2(SO4)3 + nS=O(NH2)2 à Bi2(SO4)3 • nS=O(NH2)2
исутствии ионов висмута появляется лимонно-желтая окраска. n=3-9
Количественное определение основано на выделении висмута из минерализата экстракцией в виде В1(ДДТК)з в щелочной среде, реэкстракции в водный слой азотной кислоты и определении
а) объемным методом — титрованием комплексоном III (трилоном) в присутствии тиомочевины (или пирокатсхипового фиолетового). Граница определения 1 мг. КОМПЛЕКСОНОМЕТРИЯ
б) Фотоколоримстричсским методом по комплексу висмута с тиомочевинной. Оптическая плотность измеряется при Х = 470 нм
Перед выполнением этой реакции необходимо убедиться в том, что в исследуемом растворе (дистилляте) и в реактивах отсутствуют ионы хлора.
Реакция Фудживара. Хлороформ и ряд других галогенсодержащих соединений можно обнаружить при помощи реакции Фудживара, которая основана на взаимодействии этих веществ с пиридином в присутствии щелочи. При взаимодействии хлороформа с пиридином и щелочью образуется полиметиновый краситель. При этой реакции вначале образуется соль пиридиния:
Под влиянием щелочи соль пиридиния превращается в производное глутаконового альдегида (I), при гидролизе которого образуется глутаконовый альдегид (II), имеющий розовую окраску:
Описано два варианта реакции Фудживара. При использовании первого варианта наблюдают окраску образовавшегося глутаконового альдегида. При втором варианте этой реакции к образовавшемуся глутаконовому альдегиду прибавляют ароматический амин или другое соединение, содержащее подвижный атом водорода, а затем наблюдают окраску.
Реакция с резорцином. (“–“ СХЗ)При нагревании хлороформа с резорцином в присутствии щелочи появляется розовая или малиново-красная окраска.
Реакция образования изонитрила. При нагревании хлороформа с первичными аминами и щелочью образуется изонитрил (карбиламин), имеющий неприятный запах:
Реакция с реактивом Фелинга.При взаимодействии хлорофор ма со щелочью образуется соль муравьиной (формиатной) кислоты:
Реактив Фелинга, содержащий внутрикомплексное соединение K 2 Na 2 [Cu(С 4 Н 3 O 6) 2 ], которое образуется при взаимодействии ионов меди (II) с сегнетовой солью, при нагревании окисляет муравьиную кислоту и ее соли. В результате реакции выпадает красного цвета осадок оксида меди (I):
В-ва,изолируемые экстракцией полярными растворителями и сорбцией(1,4-бензодиазепины) (щелочн св-ва)
T1|2 = 18-38 часов.
Нитразепам — светло-желтый или светло-желтый с зеленым оттенком кристаллический порошок. Практически нерастворим в этиловом спирте и хлороформе.
Нитразепам оказывает транквилизирующее, мышечно-расслабляющее, снотворное действие и т. д. Он усиливает снотворное действие других снотворных средств и анальгетиков. Применяется при нарушении сна, неврозах, психопатиях.
Метаболизм. Метаболитами нитразепама являются 7-амино-метаболит, 7-ацетиламино-метаболит. В течение 48 ч из организма выделяется около 23 % принятой дозы нитразепама. В неизмененном виде с мочой выделяется около 5 % этого препарата. Свыше 8 % нитразепама выделяется с мочой в виде 7-амино- метаболита и около 10%—в виде 7-ацетиламино-метаболита. Часть неизмененного нитразепама может быть обнаружена в кале.
Выделение из биологического материала.
Биологический материал трижды настаивают с насыщенным раствором щавелевой кислоты (рН=1) à Через 1 ч после каждого настаивания вытяжки отделяют от биологического материала центрифугированием à кислый центрифугат трижды взбалтывают со смесью хлороформа и этилацетата à кислый центрифугат подщелачивают до рН = 10 à трижды взбалтывают с новыми порциями смеси хлороформа и этилацетата à исследование на наличие нитразепама.
Предварительные пробы на наличие в моче.
5 мл мочи + аммиак до рН=10 + 250 г дитионита натрия (Na2S2O4) à взбалтывают 10 мин à нагревают при 50 °С в течение часа и охлаждают à жидкость 10 мин взбалтывают с 10 мл смеси (метиленхлорида и этилацетата) à от водной фазы отделяют слой смеси органических растворителей à взбалтывают с 10 мл 5 %-го раствора буры à фаза органических растворителей à + 5 мл 0,2 н. раствора соляной кислоты à взбалтывают à органические растворители.
4 мл кислой водной фазы охлаждают в ледяной воде + 0,2 мл 0,4 н. раствора нитрита натрия à + 0,2 мл 2%-го раствора сульфамината аммония à перемешивают à + 0,2 мл 0,4 %-го раствора N-1-нафтилэтилендиамина дигидрохлорида à вишнево-красная окраска.
Выделение метаболитов нитразепама из мочи.
5 мл мочи + аммиак до рН=10 à взбалтывают 10 мин à нагревают при 50 °С в течение часа и охлаждают à жидкость 10 мин взбалтывают с 10 мл смеси (метиленхлорида и этилацетата) à от водной фазы отделяют слой смеси органических растворителей à взбалтывают с 10 мл 5 %-го раствора буры à фаза органических растворителей à + 5 мл 0,2 н. раствора соляной кислоты à взбалтывают à органические растворители.
4 мл кислой водной фазы охлаждают в ледяной воде + 0,2 мл 0,4 н. раствора нитрита натрия à + 0,2 мл 2%-го раствора сульфамината аммония à перемешивают à + 0,2 мл 0,4 %-го раствора N-1-нафтилэтилендиамина дигидрохлорида à вишнево-красная окраска.
Обнаружение нитразепама и его метаболитов методом хроматографии.
ПФ: силикагель/силуфол
НФ: этилацетат: метилен: аммиак
Д: р-в Драгендорфа
Обнаружение по УФ- и ИК-спектрам.
Раствор нитразепама в этиловом спирте имеет максимумы поглощения при 218 и 260 нм, в 0,1 и. растворе серной кислоты имеет максимум поглощения при 277 нм и изгиб около 340 нм; нитразепам в ИК-области спектра (диск с бромидом калия) имеет основные пики при 1692, 1615, 1352 и 702 см -1.
Изолирование: Стаса-Отто или Васильевой. М.б. в кислом и щелочном CHCl3 извл-ях.
Анализ: 1. по продуктам метаболизма: а) б/м настаивают с подкисленной водой или спиртом, экстрагируют CHCl3, к водному слою доб-т NH4OH до pH=9-10, снова экстр-т CHCl3. CHCl3 объед-т, выпаривают досуха, сух-й ост-к подвергают гидролизу H2SO4 или HCl. б) б/ж + HCl или H2SO4 (г-з) до бензофенонов.
К.О.: 1. после ТСХ с пластинки элюируют ацетонитрилом, испаряют, к сух-у ост-ку гептан и иссл-т м-дом ГЖХ и кач-но и кол-но. 2. ВЖХ – УФ детекция. 3. УФ спектроскопия в EtOH. 4. ФКМ по р-ии Братона-Маршала.
Анализ по нативной мол-ле: изол-е общее (Стас-Отто, Васильева), экстр-т CHCl3, pH=10, очистка м-м ТСХ, элюируют с пластинки и вновь наносят на пластинку со свидетелями. Обр-т HClр, в термостат, + р-р NaNO3 в HCl, удал-м изб NaNO2 cульфонатом аммония, обр-м α-нафтилэтиленамином – в местах локализации – окраш-е
В-ва,изолируемые экстракцией полярными растворителями и сорбцией (фенотиазины)(щелочн св-ва)
Дипразин (пипольфен, прометазин, протазии и др.) — белый кристаллический порошок, легкорастворимый в воде и этиловом спирте, хлороформе (1: 2), почти не растворим в диэтиловом эфире.
Дипразин экстрагируется органическими растворителями из щелочной среды.
Дипразин имеет выраженную противогистаминную активность. Он обладает седативным действием, усиливает действие наркотических, снотворных и анальгезирующих средств. Дипразин применяется для лечения аллергических заболеваний, зудящих дерматозов, хореи, энцефалита и др.
Главным метаболитом дипразина является сульфоксид этого препарата. Часть дипразина в неизмененном виде выделяется с мочой. Кроме этого, с мочой выделяется и сульфоксид дипразина, который можно обнаружить в моче даже через 14 сут после приема указанного препарата.
Выделение из биологического материала (по Б. М. Саломатину).
100 г измельченного биологического материала + этиловый спирт, подкисленным 10% р-м щавелевой кислоты до рН = 2...3. à кислые спиртовые вытяжки на водяной бане (при 40 °С) упаривают до густоты сиропа à + 96° этиловым спиртом à фильтруют à выпаривают досуха + 100 мл воды (темп. 40—60 °С) à жидкость охлаждают и фильтруют à + 5 % р-р щавелевой кислоты до рН = 2...3 + диэтиловый эфир (по 50 мл 2 раза) + 50%-м р-м гидроксида натрия до рН = 13 + 4 порции диэтилового à объединенные эфирные вытяжки + 0,5 н р-р серной кислоты à водные вытяжки соединяют и нагревают 3 мин на водяной бане (темп. 50—60 °С) à кислые водные вытяжки используют для обнаружения.
Обнаружение дипразина
· Реакция с концентрированной серной кислотой. Дипразин с концентрированной серной кислотой дает пурпурно-красную окраску.
· Реакция с концентрированной азотной кислотой. При взаимодействии дипразина с концентрированной азотной кислотой появляется бледная пурпурно-красная окраска, переходящая в желтую.
· Реакция с концентрированной соляной кислотой. Дипразин с концентрированной соляной кислотой дает розовато-фиолетовую окраску, переходящую в пурпурно-фиолетовую.
· Реакция Витали — Морена.
· Реакция с реактивом Марки. Дипразин с реактивом Марки дает пурпурную окраску.
· Реакция с реактивом Манделина. Реактив Манделина с Дй-празином дает зеленую окраску, переходящую в пурпурную.
Обнаружении методом ТСХ
НФ: силуфол
ПФ: бензол: диоксан: аммиак
Д: р-в Марки / HNO3: СН5ОН
Обнаружение дипразина по УФ- и ИК-спектрам.
Дипразин, растворенный в смеси воды и этилового спирта (1:1), имеет максимумы поглощения при длинах волн, равных 252 и 301 нм; в 0,01 н. растворе соляной кислоты имеет максимум поглощения при 249 и около 300 нм; в ИК-области спектра дипразин (диск с бромидом калия) имеет основные пики при 1459, 1222 и 757 см"1.
В-ва,изолируемые экстракцией полярными растворителями и сорбцией(1,4-бензодиазепины)
Практически нерастворим в воде, растворим в воде соли 1,4-бенздиазепинов. В органических растворителях растворимость зависит от структуры. Наиболее высокая растворимость наблюдается в апротонных растворителях (диметилформамиде, диметилсульфоксиде). Слабое основание.pKa = 2.93
Выводятся производные 1,4-бенздиазепина, в основном, почками в виде основных соединений и метаболитов. Наличие в органах активных метаболитов производных 1,4-бенздиазепина снижает скорость элиминации. Время полувыведения (Т ½) 8-28 часов.
Хлордиазепоксид относится к транквилизаторам. Он оказывает успокаивающее действие на центральную нервную систему, обладает противосудорожной активностью, потенцирует действие снотворных веществ и анальгетиков, проявляет умеренный снотворный эффект.
Хлордиазепоксид (7-хлор-2-метиламино-5-фенил-ЗН-1,4-бензодиазепин-4-оксид) быстро всасывается из желудочно-кишечного тракта. Метаболитами хлордиазепоксида является N-деметилхлордиазепоксид и лактам (7-хлор-1,3-дигидро-5-фенил-2Н-1,4-бензодиазепин-2-он-4-оксид). Часть неизмененного хлордиазепоксида и его метаболитов выделяется с мочой, а часть — образует конъюгаты, которые тоже выделяются с мочой.
Пробоподготовка.
· 25 г измельченного биологического материала + вода + HCl до рН = 1 à 3 раза по одному часу à вытяжки центрифугируют à центрифугат подщелачивают до рН = 10 + хлороформ à 3 раза взбалтывают àхлороформные вытяжки соединяют à обнаружение и количественное определение хлордиазепоксида.
· 5 - 10 мл плазмы крови или мочи + аммиак à дважды взбалтывают с хлороформом à хлороформные вытяжки + вода àвзбалтываютà хлороформный слой + 5 мл р-ра соляной кислоты à взбалтывают 5 минà солянокислые вытяжки отделяют à нагревают на водяной банеà затем нагревают при 125 °С на парафиновой бане 30 мин (при этом образуется 2-амино-5-хлорбензофенон)à + 0,5 мл 10 %-го р-ра нитрита натрия + 0,5 мл 0,5 %-го раствора сульфамината аммония + 0,5 мл 0,1 %-го раствора N-1-нафтилэтилендиамина дигидрохлоридаà вишнево-красная окраска.
Цветные реакции.
1. Реакция с нингидрином, хлордиазепоксид дает коричневую окраску.
2. Реакция с реактивом Марки, хлордиазепоксид дает желтую окраску.
3. Реакция с реактивом Фреде, хлордиазепоксид дает оранжевую окраску.
4. Реакция Витали — Морена, хлордиазепоксид дает желтую окраску.
ТСХ-обнаружение
Обнаружение хлордиазепоксида методом хроматографии в тонком слое сорбента.
НФ: силикагель КСК или пластинки «силуфол»
ПФ: этилацетат: 25 %-го р-р аммиака: метиловый спирт
хлороформ: ацетон
Д: р-в Драгендорфа
Использование спектров.
5. Обнаружение хлордиазепоксида по УФ- и ИК-спектрам. Хлордиазепоксид в 0,1 н. растворе гидроксида натрия имеет максимумы поглощения при 243 и 260 нм; в 0,1 н. растворе серной кислоты хлордиазепоксид имеет максимумы поглощения при 245 и 306 нм.
6. Хлордиазепоксид в 0,1 н. растворе соляной кислоты имеет максимумы поглощения при 246 и 308 нм.
Изолирование: Стаса-Отто или Васильевой. М.б. в кислом и щелочном CHCl3 извл-ях.
Анализ: 1. по продуктам метаболизма: а) б/м настаивают с подкисленной водой или спиртом, экстрагируют CHCl3, к водному слою доб-т NH4OH до pH=9-10, снова экстр-т CHCl3. CHCl3 объед-т, выпаривают досуха, сух-й ост-к подвергают гидролизу H2SO4 или HCl. б) б/ж + HCl или H2SO4 (г-з) до бензофенонов.
К.О.: 1. после ТСХ с пластинки элюируют ацетонитрилом, испаряют, к сух-у ост-ку гептан и иссл-т м-дом ГЖХ и кач-но и кол-но. 2. ВЖХ – УФ детекция. 3. УФ спектроскопия в EtOH. 4. ФКМ по р-ии Братона-Маршала.
Анализ по нативной мол-ле: изол-е общее (Стас-Отто, Васильева), экстр-т CHCl3, pH=10, очистка м-м ТСХ, элюируют с пластинки и вновь наносят на пластинку со свидетелями. Обр-т HClр, в термостат, + р-р NaNO3 в HCl, удал-м изб NaNO2 cульфонатом аммония, обр-м α-нафтилэтиленамином – в местах локализации – окраш-е
В-ва,изолируемые экстракцией полярными растворителями и сорбцией(щелочн св-ва)
Производные фенантренизохинолина
Опиаты – прир-е или синт-е в-ва с морфиноподобными св-ми, вл-т на ЦНС, гладкую муск-ру.
Морфин служит стандартом д/других Alk, сод в опии.
Опиаты выз-т эйфорию, при длит-м прим-ии требуется все большая доза д/дост-я эф-та. Выз-т физич и психич зав-ть → в мед практике прим-е огран-но.
Картина отр-я: сужение зрачков, кома, умен-е дых-я, ↓ t тела и АД. ЛД морфина 200мг, кодеина 0,8г
П/помощь: пром-е жел-ка, солевое слаб-е, форсир-й диурез, гемосорбция, гемодиализ. в/в атропин, иск-я вент-я легких, согревание тела.
Метаболизм: А – Метилирование; B – N-демитилирование, с окислением и обр-ем N→O; С, D – конъюгаты с глюкуроновой к-той и H2SO4,
Изол-е: из б/м м-д Кромаренко или общие Стаса-Отто и Васильевой. Очистка извл-я: колоночная хр-я. Из б/ж (кровь, моча) – в колбу + HCl – нагр-м (гидролиз) – охл-м - + дитионитNa (Na2S2O4) (восстановление N оксидов) – идентификация, далее доб-т NH4OH до pH 9-10 и экстр-т х/ф.
Идент-я: 1. ТСХ 2. УФ спектроскопия в 0,1н щелочи и к-те. 3. Групповая р-я – р-я Пиллагри: сух ост-к + конц H2SO4 и HCl – нагр-м до выд-я SO3, к ост-ку воду и по каплям NaHCO3 до щелочной р-ии, несколько капель р-ра J2 и эфир.
При отравлении опиатами эф слой розовый а водный – зеленый. 4. + р-в Марки – фиол-е окр-е. 5. Морфин + FeCl3 – голуб окр-е.
К.О.: 1. экстракционная ФК 2. по р-ии с FeCl3 (ФЭК или ФКМ в ВО) 3. ВЖХ 4. ГЖХ
FeCl3 (сине-зел), ТСХ (как хинин)- пластинка Армсорб, х/ф:ацетон:аммиак, детекция р-в Драгендорфа, УФ
Р-ции с общеалкалоидными реактивами:
Р-в Манделина-фиолетовое ок-е
Р-в Марки-фиолетовое ок-е
Р-в Фреде-фиолетовое ок-е
Р-в Эрдмана-красная,переходящая в желтую
Определение спирта в выдыхаемом воздухе:
1) Проба Рапопорта. Воздух продувают через раствор KMnO4 + H2SO4, если раствор обесцвечивается в течение 30 секунд, значит, было потребление алкоголя. Проба не специфична, реагирует на корвалол, ацетон, бензин.
2) Проба Рапопорта-Архангеловой. Вместо KMnO4 K2Cr2O7. Проба неспецифична.
3) Проба Мохова-Шинкоренко. В трубке CrO3 смешиваем с селикагелем и H2SO4, концы трубки обламываем и продуваем. Если окраска меняется с желтого на зеленый или синий (большое количество алкоголя). Проба неспецифична.
Для расчета концентрации алкоголя в крови, используют формулу Видмарка.
A = P • r (c + β60 • t)
A – количество алкоголя, принятого, г.
Р – масса тела.
r – коэффициент распределения (для мужчин – 0,68, для женщин – 0,55).
β60 – количество алкоголя, выделенного из организма за час – ~15‰.
С – концентрация в ‰, установленная методом ГЖХ.
t – время от момента приема до момента анализа.