Toxoplasma широко изменяет PV с rhop-Тиром и плотными зернистыми белками. Rhoptry белки доставляются в PVM и PV просвет с помощью секра-ции в вакуоль и образующих с помощью торговли через хост цитозол в evacuoles - везикул-подобные структуры, содержащей мембрану и rhoptry белков (Håkansson и др., 2001). Непосредственно перед паразитировать эти записи evacuoles секретируются непосредственно в принимающей цитозоле, где они затем двигаться вдоль микротрубочек хозяевах и в конечном счете сливаются с PVM (Håkansson и др., 2001). Секреция от rhoptries-видимому, происходит только во время вторжения хост-клеток, тогда как плотные гранулы секретируют конститутивно. Плотные-гранулу белки локализуются в PVM, ФЭ просвет, а intravacuolar сеть (IVN) - это совокупность мембранных канальцев в пределах PV просвета (для обзора на плотных гранул, см Mercier и др., 2005).
12.3.1.1 В паразитофорной вакуолярной мембраны
В качестве ограничивающей мембраны вакуоли, то ПВМ обеспечивает физический интерфейс между
330 ИЗМЕНЕНИЯ HOST-Цитобиология ВСЛЕДСТВИЕ токсоплазма
паразит и хозяин цитозоль (Синай и Столяр, 1997; Лингельбы и Столяр, 1998). Следовательно, токсоплазмы PVM белки хорошо позиционируется, чтобы иметь значительную роль в принимающих-паразит взаимодействий. Белки в PVM были вовлечены в рекрута единения принимающих органелл (Синайскими и столяр, 2001), приобретение питательных веществ (Schwab и соавт, 1994;.. Сегал и др, 2005), и активация иммунных сигнальных путей (Molestina и др., 2003; Molestina и Синай, 2005).
Rhoptry белок ROP2 участвует в наборе принимающей ER и митохондрий к вакуоли. ROP2 ассоциируется с PVM таким образом, что подвергает его амин-конец к принимающему цитозолу (Бекерс и др., 1994). Обрабатываются амин-конец ROP2 содержит амфипалеарктическую патическую спираль, напоминающую митохондриальных последовательности импорта. При экспрессии в виде рекомбинантного белка в клетках СНО, растворимого фрагмента из ROP2 аминоконца ассоциируется с mitochon-Dria и ER, и GFP предназначен для размещения mitochon-Dria при экспрессии в виде гибрида с ROP2 амино-конца (Синай и Столяр, 2001). Принимающие митохондрии может быть, таким образом привязаны к PVM по остановившейся попытке импортировать ROP2. Токсоплазмы обедненного ROP2 с помощью антисмысловой РНК-опосредованного процесса делает выставку уменьшились митохондриальные, но не ER, набор (Nakaar и др., 2003). Тем не мение, конкретная роль ROP2 не подтвердилось, поскольку ROP2-дефицитных паразиты также показывают серьезные дефекты в rhoptry биогенезе и репликации паразита, и эффекты ROP2 истощения на секреции других белков rhoptry в вакуоль не оценивалась. Кроме того, токсоплазмы обладают ROP2 гомологами, например ROP4 и ROP8, которые могут функционировать в сочетании с и / или в отсутствии ROP2 (Herion и соавт, 1993;.. Бекерс и др, 1997). Роль для rhoptry белков в наборе принимающих органелл поддерживается наблюдением, что evacuoles отображать один и тот же плотно ассоциацию с принимающими митохондрий и ER как это делает PVM (Хоканссон и др., 2001). Evacuoles действительно содержит ROP2, но полный набор evacuole белков неизвестен.
Механизм, посредством которого хост органелла первый мигрирует в PVM, остается неясным, но, как представляется, использовать хост микротрубочки. Предварительная обработка хоста
Клетки с нокодазолом, микротрубочки-деполимеризата-Изинга агента, уменьшает долю площади поверхности, связанной с PVM митохондрий примерно на 50 процентов, а не влияющие на долю площади поверхности PVM, связанной с хост-ER (Синайский и др., 1997). Наблюдения, которые evacuoles образуют тесные ассоциации с принимающей ER и митохондриями и evacuoles движения по хозявам микротрубочек к PVM предполагают, что они могут играть определенную роль в органелле набора, но эта возможность до сих пор непосредственно проверить (Хоканссон и др., 2001),
PVM регулирует обмен материалами между PV просветом и принимающей цитозоле. Первоначально непроницаемой, зрелый ПВМ позволяет молекулы до 1300-1900 Da свободно диффундировать в и из вакуоли (Schwab и др., 1994). Предположительно, rhoptry или плотные гранулы белки образуют этот неспецифический канал. Интересно, что Toxoplasma спорозоиты секретируют пониженное количество белков в первый PV (PV1) они образуют, и это вакуоли не отображают активность пор (Тилли и др., 1997). Протеомные COMPAR-isons содержания спорозоитов PV1 и тахизоит PV будет играть важную роль в создании краткого списка кандидатов белка для канала. Последние данные свидетельствуют о том, что PVM содержит специальные транспортеры для макромолекул. Паразиты внутри очищенного,
Белок PVM появляется участвовать в Модуле-Тион принимающих сигнальных путей. Токсоплазмы индуцируют апоптическое-стойкое состояние в инфицированных клетках-хозяевах, частично через активацию фактора хозяина транен-scription NF-κВ (Payne и др., 2003). Как обсуждалось выше, активность киназы, которая активирует NF-κВ со-очищает с PVM фракции (Molestina и Синаем, 2005; смотри также раздел 12.2.3.2).
PVM-мишени плотных гранул белки GRA3 и GRA7 также присутствуют в пряди, простирающейся от PVM в цитоплазму хозяина (Dubremetz и др, 1993;. Коппенс и др., 2006). Rhoptry белки не были локализованы в эти нити. Это отсутствие rhoptry белков согласуются с наличием механизма белка сортировкой, которые могут быть связаны с образованием этих нитей, которые наблюдались простирающимися от вакуоли до
| Медиаторы изменения в HOST-клеточной биологии |
вакуоли в клетках-хозяевах, несущих множественные вакуоли (Dubremetz и соавт, 1993;. Ким и Boothroyd, неопубликованные результаты). Будут ли эти связанные вакуоли результатом нескольких событий вторжения или разделения одного вакуоли не известно. ФВ экструзия может играть определенную роль в питательном ACQUI-sition, служа в качестве каналов переноса питательных веществ или путем простого увеличения площади поверхности PVM и, таким образом, увеличивая участки взаимодействия между хозяином и паразитом. Последние данные свидетельствуют эти экструзия может играть определенную роль в захвате судна центросомах хозяевах (Коппенс и др., 2006). Еще одной интересной возможностью является то, что эти EXTEN-сии доставить паразитные белки мест в клетке-хозяине (смотрите раздел 12.3.3).
12.3.1.2 В intravacuolar сети
Плотные-гранулированные белки собрать Ivn из многослойных везикул, сбрасываемых с конца Poste-RIOR паразита 10-20 минут после Inva-Sion (Сиб и др., 1986, 1995). Превращение везикул в нанотрубки требует GRA2, и полное формирование и поддержание IVN требует GRA6, который завербован GRA2 (Labruyere и соавт, 1999;. Мерсье и др., 2002). После того, как IVN созревания, канальцы проходят внутрь от инвагинации на PVM и заканчиваются с закрытыми концами вблизи мембраны паразита плазмы (Сибли и др., 1995). Как пряди выдавливания из PVM, роль в питательных приобретениях было предложена для IVN. Электронные микрофотографии показывают, что ядра некоторых каналец IVN являются смежными с принимающим цитозолом; Таким образом, ИВН может способствовать расширению участков обмена между PV просветом и принимающей цитозоле за счет расширения площади поверхности PVM. Авторы недавнего исследования электронно-микроскопический снимок инфицированных клеток-хозяев выдвигают гипотезу о том, что IVN имеет структурную роль в расположении паразитов внутри PV (Магно и др., 2005b). Отношение корабль между PV выдавливания и IVN не ясно, но они, как представляется, разные сущности. Соединения между IVN и PV-EXTEN сиями не были замечены, и сети содержат только частично перекрывающийся набор белков (обзор в Mercier и др., 2005). PVM инвагинации, который Отношение корабль между PV выдавливания и IVN не ясно, но они, как представляется, разные сущности. Соединения между IVN и PV-EXTEN сиями не были замечены, и сети содержат только частично перекрывающийся набор белков (обзор в Mercier и др., 2005). PVM инвагинации, который Отношение корабль между PV выдавливания и IVN не ясно, но они, как представляется, разные сущности. Соединения между IVN и PV-EXTEN сиями не были замечены, и сети содержат только частично перекрывающийся набор белков (обзор в Mercier и др., 2005). PVM инвагинации, который
по всей видимости, он отличается от IVN, также наблюдались (Магно и др, 2005b;.. Коппенс и др, 2006).
12.3.1.3 The паразитофорного вакуолярного просвет
Растворимые белки в PV просвет может быть вовлечен в захвата, транспортировки и / или переработки метаболитов, которые пересекают PVM. Продемонстрировал способность GRA1 связывать Са2+ и его свободный Associa-ние с IVN привело к предположению, что GRA1 обеспечивает Ca2+в магазинах в IVN. Наиболее широко охарактеризованы белки ФЭ просвета являются обильным нуклеозидтрифосфат гидро-Lases (NTPases), которые катализируют пошаговое дефосфорилирование нуклеозидтрифосфат к нуклеозидмонофосфатам (Бермудес и др., 1994). Предложена роль для NTPases в нуклеозиде Scav-enging. В соответствии с моделью, принимающие нуклеозидтрифосфат диффундируют в просвет вакуолей через пору PVM и затем преобразуются в нуклеозиды, которые входят паразита с помощью транспортеров в мембране паразита плазмы. Однако NTPases не может гидролизоватьα-фосфат, и нет 5'-nucleotidase был обнаружен в вакуоли (Нго и др., 2000). NTPase активность регулируется окислительно-восстановительное состояние фермента. Поскольку добавление восстанавливающего агента дитиотреитолу на инфицированные клетки-хозяева индуцирует паразита выхода, а также потому, что активность NTPase максимальна в восстановительных условиях, связь между активностью NTPase и паразитарной выхода была выдвинута гипотеза (Стоммел и соавт, 1997;. Silverman и соавт., 1998). Истощение хозяина АТФ, катализируемый более активных NTPase может быть измерено с помощью токсоплазмов в качестве сигнала, чтобы выйти из ячейки больше не подходит для репликации паразита.
ФВ Просвет содержит циклофилин гомолог Toxoplasma, C-18, который функционирует в качестве агониста рецептора CCR5 хемокинов (High и соавт, 1994; Aliberti. И др., 2003). Передача сигналов через CCR5 приводит к активации иммунной системы, которая предотвращает хозяина от поддаваясь инфекции до распространения паразита (Aliberti и др., 2000). Из плотных гранул белков конститутивно секретируется внутриклеточным, а также внеклеточными паразитами, не ясно, имеет ли С-18 в PV просвете функции
332 ИЗМЕНЕНИЯ HOST-Цитобиология ВСЛЕДСТВИЕ токсоплазма
кроме как peptidylproline цис-транс-изомераза. Однако последние данные свидетельствуют о том, что хозяин CCR5 присутствует в PVM (Charron и Сибли, 2004). Включение CCR5 в PVM позволило бы продолжало иммунную активацию intracel-lular паразитов вместо ограничения иммунной сигнализации на короткое время, что Toxoplasma является внеклеточным.
Также присутствуют в ФЭ просвет являются Toxoplasma гомологи ингибиторов сериновых протеаз, (Morris и др., 2002; Моррис и Каррузерс, 2003). Как и с C-18, эти ингибиторы могут быть важны для выживания внеклеточных паразитов и могут быть только в PV просвете, как следствие конститутивной секреции через плотные гранулы. В качестве альтернативы, они могут быть важными для инактивации протеаз, высвобождаемые из просвета хозяина лизосом поглощенных паразитом внутри PV (Коппенс и др., 2006).