Превращения аминокислот, вызванные деятельностью микроорганизмов кишечника, получили общее название «гниение белков в кишечнике».
Из ароматических аминокислот: фенилаланин, тирозин и триптофан – при аналогичном бактериальномдекарбоксилировании образуются соответствующие амины: фенилэтиламин, параоксифенилэтиламин (или тира-мин) и индолилэтиламин (триптамин). Кроме того, микробные ферменты кишечника вызывают постепенное разрушение боковых цепей циклических аминокислот, в частности тирозина и триптофана, с образованием ядовитых продуктов обмена – соответственно крезола и фенола, скатола и индола.
36. Выяснение влияние желчи на активность липазы.
Изучение влияния желчи на активность липазы. Скорость д-я липазы в отдельных порциях жира молока можно узнать по кол-ву жирных кислот,обр-ся при гидролизе жира за определенный промежуток времени. Кол-во жирных к-т определяют титрованием щелочью в присут.фенолфталеина. рез-ты выражают в мл титрованного р-ра щелочи. Строят график.
37. ДЕЙСТВИЕ ФОСФОЛИПАЗ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ.
В две пробирки наливают суспензии яичного желтка. В 1-Ю ПРОБИРКУ ДОБАВЛЯЮТ ПАНКРЕАТИНИН, ВО 2-Ю (контрольная) воду. Обе пробирки помещают в термостат при 38С на 30 мин.После инкубации в обе пробирки наливают молибденового реактива, нагревают их на пламени горелки и охлаждают водой под краном.
38 ЭМУЛЬГИРОВАНИЕ ЖИРОВ
В 5 пробирок помещают растит.масло и добовляют дистиллированную воду.Затем в 1 пробирку желчь,во 2- раствор едкого калия,в 3-р-р углекислого натрия,в 4- р-р белка,в 5 воду.
Пробирки встряхивают и набл-т образование устойчивой эмульсии во всех пробирках кроме пятой.
39. Гидролиз жиров.Определение свободных жирных кислот.
жир помещают в широкую пробирку, приливают спиртового раствора щелочи, нагревают на водяной бане. Нагревание прекращают, когда капля гидролизата, прилитая к воде не образует жирных пятен.
40 ВЫДЕЛЕНИЕ ХОЛЕСТЕРОЛА ИЗ МОЗГА
Растирают 1г мозга в ступке с 2-3 частями гипса до гомогенной массы,которую скальпелем или стеклянной палочкой распределяют тонким слоем на предметном стекле и высушивают при 60С. Стекло держат под пламенем горелки на расстоянии 20 см и контролируют нагрев стекла, проводя им по тыльной стороне руки. Высушенный с гипсом мозг соскабливают скальпелем и заливают 5мл хлороформа. Экстрагируют 5 мин при комнатной темпер-е, постоянно интенсивно встряхивая, затем экстракт фильтруют в сухую пробирку и проделывают качественную реакцию на холестерин.
РЕАКЦИЯ ЛИБЕРМАННА-БУРХАРДА.
К 1мл хлороформного экстракта из мозга добовляют 10 капель уксусного ангидрида и 2 капли концентрированной серной кислоты,хорошо перемешивают и наблюдают зеленное окрашивание.
41.ОПРЕДЕЛЕНИЕ НАЛИЧИЯ ХОЛЕСТЕРОЛА В КРОВИ. КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
Все пробирки, пипетки должны быть сухими. На дно сухой пробирки вносят сыворотку крови. Отмеривают сухим цилиндром реактива №1 (смесь ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида, и концентрированной серной кислоты) и переливают его быстро,но аккуратно в пробирку с сывороткой.Быстро перемешивают, встряхивают содержимое пробирки и помещают в термрстат при 37С на 20 мин.Развивается зеленое окрашивание.Затем фотометрируют на ФЭК в кювете на 5 мм против воды при красном светофильтре.Для определения содержания холестерина по найденной оптической плотности пользуются готовым калибровочным графиком.Найденную концентрацию холестерина умножают на 1000,т.к сыворотки в опыт берется 0,1мл.Коэффициент пересчета в еденицы СИ равен 0,0258.Нормальное содержание общего холестеринва в сыворотке крови 2,97-8,79 ммоль/л.
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
при нарушении жирового обмена холестерин может накапливаться в крови. Увеличение содержания холестерина в крови наблюдается при атеросклерозе,сах.диабете,нефрите,нефпрзе,гипотиреозе. Понижение холестерина в крови набл-ся при анемиях,голодании,туберкулезе,гипертериозе,раковой кахексии,порожение ЦНС,при введении инсулина
42.ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛИПОПРОТЕИНОВ НИЗКОЙ ПЛОТНОСТИ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ.
В пробирку вносят р-р хлорида кальция и сыворотку крови.Содержимое пробирки перемешивают. Определяют оптическую плотность р-ра (Е1) на ФЭКе против ра-ра хлорида кальция при красном светофильтре.
Раствор из кюветы переливают в пробирку, добавляют микропипеткой 1%-ного р-ра гепарина и точно через 4 мин снова определяют оптическую плотность ра-ра (Е2) в тех же условиях.
Рассчитывают каонцентрацию ЛНП (с, г/л) по формуле с=(Е2-Е1)10,ГДЕ 10 эмпирический коэффициент.
43 Определение кетоновых тел в моче.Клинико-диагностическое значение.
1ПРОБА ЛЮГОЛЯ НА АЦЕТОН.
К моче добавл-т р-р нитропруссида натрия и р-р гидроксида натрия Появляется красно-бурое окрашивание. При подкислении концентрированной уксусной кислотой красное окрашивание переходит в желтое (реакция на креатинин в моче)
2 ПРОБА ЛИБЕНА НА АЦЕТОН.
К моче добавляют р-р гидроксида натрия и затем по каплям р-р Люголя до слабо-желтой окраски рас-ра. При наличии ацитона в моче жидкость мутнеет вследствие выделения бледно-желтого кристаллического осадка иодоформа, облодающего характерным запахом:
CH3COCH+2I2+4Na→ CH3I+CH3COONa+3NaI+3H2O
3. ПРОБА ГЕРХАРДА НА АЦЕТОУКСУСНУЮ КИСЛОТУ.
К моче прибавляют р-р хлорида железа(3в),выпадает осадок фосфатов в форме FePO4;При наличии ацетоуксусной кислоты от прибавления лишней капли хлорида железа(3в) появляется вино-красное окрашивание (реакция на енолы) постепенно бледнеющее при стоянии вследствие самопроизвольного декарбоксилирования ацетоуксусной кислоты:
CH3COCH2СООН→СН3СОСН3+СО2
44. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕЙ КИСЛОТНОСТИ И СОДЕРЖАНИЯ СВОБОДНОЙ СОЛЯНОЙ КИСЛОТЫ.
В две колбы наливают желудочный сок.В первую добавляют р-р фенолфталеина и р-р диметиламиноазобензола,во 2-ю ализарингидросульфоната натрия и титруют р-ом гидроксида натрия при постоянном помешивании.В процессе титрования сожержимое колб меняет окраску.
2При титровании содержимого первой колбы отмечают:а) объем щелочи,пошедшей на титрование с индикатором диметиламинозобензолом,до перехода первоначального красного цвета в желто-розовый,что соответствует количеству свободной соляной кислоты
б) общий объем щелочи,пошедший на титрование с индикатором фенолфталеином, до перехода окраски в стойкий красный цвет,что соответствует общей кислотности.
3.Во второй колбе отмечают объем щелочи,пошедшей на титрование до появления вместо желтой окраски фиолетовой,что соответствует скмме всех кислореагирующих веществ,кроме связанной соляной кислоты и выявляется индикатором ализарингидросульфонатом натрия.
45 ПАТОЛОГИЧЕСКИЕ СОСТАВНЫЕ ЧАСТИ ЖЕЛУДОЧНОГО СОКА И ИХ ОБНАРУЖЕНИЕ.
Наряду с норм-м и составными частями в жел-ом соке при ряде заболевании могут появиться и другие вещества:молочная кислота,кровь,леиучие жирные кислоты,желчные пигменты.
1.Обнаружение молочной кислоты по реакции Уффельманна.К реактиву Уффельманна добавляют желудочного патологического сока до появления желто-зеленного окрашивания
2.Бензидиновая проба на кровь.К 1%р-у бензидинина приливают р-р Н2О2 и 5 капель патологического желудочного сока.При наличии крови в желудочном соке при стоянии появляется синее окрашивание.
46.АНАЛИЗ ЖЕЛУДОЧНОГО СОКА.
1.На бумагу конго наносят стеклянной палочкой 0,2%ного р-ра соляной кислоты: в месте нанесения появляется синее окрашивание.Повторяют эту реакцию с желудочным соком: в месте нанесения капли желудочного сока на бумаге конго появляется синее окрашивание,обусловленное присутствием свободной соляной кислоты в желудочном соке.
2.В одну пробирку добовляют несколько капель р-ра НСl, в другую несколько капель желудочного сока,затем в обе пробирки добавляют р-р диметиламиноазобензола.В обеих пробирках наблюдают появление вишнево-красной окраски.
47.ИССЛЕДОВАНИЕ ДЕЙСТВИЯ ПЕПСИНА.
В три пробирки наливают р-р пепсина или желудочного сока.Содержимое первой пробирки кипятят 2 мин и охлождают под струей воды.Содержимое второй пробирки нейтрализуют р-ом NaHCO2 до щелочной реакции по лакмус.3 пробирку оставляют без изменения.
2Во все 3 пробирки добавляют по маленькому кусочку фибрина или яичного белка. Пробирки выдерживают в термостате при 37С 30-45мин.Затем их вынимают, встряхивают, отмечают видимые изменения белка и проделывают биуретовую реакцию. Положительная биуретовая реакция получается только в третьей пробирке.
48.ПЕРЕВАРИВАНИЕ БЕЛКОВ ФЕРМЕНТАМИ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ.
В три пробирки наливают р-р панкреатина или вытяжки поджелудочной железы. Содержимое первой пробирки кипятят и охлаждают под струей холодной воды.Содержимое второй пробирки нейтрализуют 1%ным р-ом уксусной кислоты до кислой реакции на лакмус. Во все три пробирки опускают по кусочку фибрина или яичного белка и помещают их в термостат при 37-40С.
Через 40-60 мин пробирки вынимают, перемешивают отмечают видимые изменения и проделывают биуретовую реакцию со всеми пробиркам.
49ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО БЕЛКА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БИУРЕТОВЫМ МЕТОДОМ.
В 1-ю пробирку наливают исследуемой сыворотки,во 2 (контрольную) р-р хлорида натрия.В обе пробирки приливают биуретовый реактив. Содержимое пробирок осторожно перемешивают, избегая образования пены, и через 30 мин фотометрируют в кюветах на 10мм при зеленом светофильтре 540нм против контрольного раствора.Определив экстинкцию исследуемого р-ра, находят по графику,какой конценрации белка (в г/л) она соответствует.
ПОСТРОЕНИЕ КАЛИБРОВОЧНОЙ КРИВОЙ
готовят из основного 100г/л стандатного р-ра белка рабочие р-ры альбумина:20,40,60,80 г/л.Для этого к 0,2;0,4;0,6;0,8;1мл основного р-ра добовляют 0,8;0,6;0,4;0,2;0 мл 0,9% р-ра NaCl.Из каждого разведения берут по 0,1 мл рабочего р-ра и вносят в пробирку биуретового реактива,измеряют экстинкцию стандартных проб на ФЭК против контроля.Строят график,откладывают на оси абсцесс значения концентрации стандартныхр-ов белка,на оси ординат соответствующие им величины оптической плотности.
50 ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА КРЕАТИНИНА В МОЧЕ. КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
В цилиндр наливают мочу, прибовляют 10% р-ра щелочи и насыщенного р-ра пикриновой кислоты. Одновременно ставят один контроль с водой, наливая в целиндр дистиллированной воды и все реактивы, как и для мочи. Взбалтывают, оставляют на 5мин,доводят дистиллированной водой до объема 10мл, тщательно перемешивая стеклянной палочкой. Фотометрируют против контроля на ФЭК с зеленым светофильтром в кювете на 3мм и находят показание оптической плотности. Зная оптическую плотность опытного р-ра, по готовому калибровочному графику определяют количество креатинина в мочи и подсчитывают содержание его в моче, выделенной за сутки. Коэффициент пересчета в единицы СИ равен 8,84.
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
Содержание креатинина в моче зависит от питания, так как, помимо эндогенного креатинина, в моче содержится креатинин экзогенный, поступающий с мясной пищей. Повышенное выделение креатинина с мочой-гиперкреатининурия-наблюдается при приеме мясной пищи, размозжении мягких тканей, пневмония, снятие кровоостанавливающего жгута.Пониженное содержание креатинина в моче- гипокреатининурия- отмечается при хроническом нефрите с уремией, мышечной атрофии.
При некоторых заболеваниях, связанных с нарушением в обмене креатина,а также при голодании возникает креатинурия.Обычно она наблюдается при усиленном распаде тканей.
При мышечной дистрофии креатинина в моче содержится.У женщин в послеродовом периоде также отмечается креатинурия.Креатин появляется в моче во всех случаях,когда содержание его в сыворотке крови превышает 1,6мг/100мл
51 ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА МОЧЕВМНЫВ СЫВОРОТКЕ КРОВИ.
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
Для осождения белка к воде в центрефужную пробирку добавляют сыворотку и р-р трихлоруксусной кислоты и перемешивают.Одновременно в обычной пробирке готовят пробу со стандартным раствором мочевины вместо сывороткаи.Пробирку с сывороткой центрифугируют при 1500об.мин. Затем в одну пробирку вносят надосадочной жидкости,а в другую стандартного р-ра мочевины.Приливают в каждую пробирку цветного реактива и перемешивают.Помещают пробирки в кипящую водяную баню,затем охлождают под водопроводной водой.
Фотометрируют пробу и стандарт при зеленом светофильтре против контороля в кювете на 10мм.Контрольную пробу ставят так же,как опытную,но вместо надосадочной жидкости берут дистил.воду.
РАСЧЕТ МОЧЕВИНЫ:
х=Еоп/Ест • 100,где х- концентрация мочевины, Еоп-экстинкция опытной пробы, Ест экстинция стандартной пробы,100-концентрация мочевины в стандартном р-ре.
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
сниж содерж мочевины отмечается при паренхиматозном гепатите, циррозе, во время беременности.
превышает при нефритах, сепсисе, туберкулезе почек
53 ОБНАРУЖЕНИЕ ЙОДА В ПРЕПАРАТЕ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ.
В фарфоровой ступке растирают 1 таблетку тиреоидина.Полученный порошок высыпают в пробирку для гидролиза и заливают р-ом К2СО3.Перемешивают, закрывают пробиркой с обратным холодильником и ставят на песчаную баню. Содержимое пробирок кипятят.
Полученный гидролизат охлаждают и нейтрализуют р-ом серной кислоты, добавляя его по каплям до слабокислой реакции на лакмус. Затем добавляют р-р крахмала и р-р KIO3 Выделивший йод окрашивает жидкость в синий цвет.
54.Открытие наличия адреналина
КАЧЕСТ. РЕАКЦИИ НА АДРЕНАЛИН
Реакция с хлоридом железа (Ш)
В пробирку вносят р-р адреналина и р-р хлорида железа (III). Появляется изумрудно-зеленое окрашивание,которое затем при добавлении 1 капли р-ра гидроксида натрия приобретает вишнево-красный цвет. Реакция обусловлена тем, что пирокатехиновое ядро образует с ионами железа (III) СОЕДИНЕНИЯ ТИПА ФЕНОЛЯТОВ.
ДИАЗОРЕАКЦИЯ НА АДРЕНАЛИН..
В пробирку вносят р-р адреналина, р-р KIO3 и р-р уксусной к-ты. Перемешивают и слегка нагревают. Жидкость окрашивается в красно-фиолетовый цвет. Окраска обусловлена тем, что при взаимодействии адреналина с диазореактивом образуется азокраситель.
55.качественные реакции на фолликулин
Качественная реакция на фолликулин проводится с конц. Серной к-той и обусловлена образованием эфирного соединения соломенно-желтого цвета с зеленой флюоресценцией.
1.Реакция с конц.серной к-той.
В проб наливают спиртовой р-р фолликулина и помещают ее в кипящую водяную баню на 5-10 мин для удаления спирта. К ОСТАВШЕМУСЯ В ПРОБ ФОЛЛИКУЛИНУ ДОБАВЛЯЮТ конц серную к-ту и ставят проб в кипящую водяную баню. ЖИДКОСТЬ ПРЕОБРЕТАЕТ СОЛОМЕННО-ЖЕЛТОЕ ОКРАШ,ПЕРЕХОДЯЩЕЕ ПРИ ГНГРЕВАНИИ В ОРАНЖЕВОЕ, ПОДНОСЯ ПРОБ К ФЛЮОРОСКОПУ, НАБЛЮД-Т В НЕЙ ЗЕЛЕНУЮ ФЛЮОРЕСЦЕНЦИЮ.С масляным р-ром фолликулина реакцию проводят при комнатной темп-ре. К масляному р-ру фолликулина приливают конц серной к-ты,- постепенно развивается соломенно-желтое окрашивание.
2,РЕАКЦИЯ НА ФЕНОЛЬНУЮ ГРУППУ С РЕАКТИОМ ФОЛИНА.
К 2 КАПЛЯМ ФОЛЛИКУЛИНА ПРИЛИВАЮТ 1 КАПЛЮ РЕАКТИВА Фолина. Появляется синее окрашивание, обусловленное наличием фенольной группировки.
56.Качесвенные реакции, подтверждающие белковую природу инсулина
БИУРЕТОВАЯ РЕАКЦИЯ.
К р-ру инсулина добавляют р-р гидроксида натрия и р-р сульфата меди(II), перемешивают. Жидкость окрашивается в розово-фиолетовый цвет.
РЕАКЦИЯ МИЛЛОНА.
К р-ру инсулина добавляют реактив Миллона и осторожно нагревают. Образуется осадок в виде сгустка красного цвета.
РЕАКЦИЯ ФОЛЯ.
К р-ру инсулина добавляют р-р NaOH и кипятят на маленьком пламени горелки. После охлаждения добавляют р-р Pb(Ona)2-появляется бурое окрашивание. При нагревании бурое окрашивание переходит в черное.
57.открытие хлоридов, фосфатов, сульфатов в моче
Хлориды выделяются с мочой в виде хлористых солей калия,натрия,аммония,кальция, магния.
Качественное определение хлоридов.
К моче прибавляют нитрат серебра и азотную к-ту. ВЫПАД БЕЛЫЙ осадок хлористого серебра, темнеющий на свету.Содержимое проб перемешивают и делят на две части. К ОДНОЙ ЧАСТИ ПРИБАЛЯЮТ Р-Р АМИАКА, творожистый осадок хлорида серебра растворяется. К ДРУГОЙ ЧАСТИ ПО КАПЛЯМ р-р азотной к-ты, осадок раствор-ся.
Количественное определение хлоридов в моче
Метод Мора.
Основан на титровании хлоридов мочи р-ром азотнокислого серебра в нейтральной среде в присутствии индикатора- хромовокислого калия.
Отмеривают необходимое кол-во мочи в мерную колбу и добавляют фенолфталеин и нейтрализуют р-ром NaOH до слаборозовой окраски, затем доливают дистиллированной водой до метки. Перемешивают,отбирают 10 мл,содержащих 1 мл мочи, в коническую колбочку, прибавляют 2 капли индикатора хромовокислого калия и титрубт 0,1н р-ром азотнокислого серебра до кирпично-красного цвета.
Фосфорнокислые соли образуютя в организме результате распада фосфорсодержащих органических веществ: нуклеопротеидов,фосфопротеидов,АТФ, фосфорных эфиров.
ХОД РАБОТЫ. К моче добавляют р-р аммиака, образуется осадок фосфорнокислых солей кальция и магния. Осадок отделяют фильтрованием и растворяют на фильтре р-ром азотной к-ты. К полученному р-ру добавляют молибденовый реактив и кипятят. При нагревании жидкость окрашивается в желтый цвет, а при охлаждении выпадает кристаллический желтый осадок фосфорномолибденовокислого аммония.
58.Открытие железа и кальция в крови и в моче
В моче не нашла
Открытие железа в сыворотке крови
Сыворотку крови подвергают минерализации, в результате чего железо освобождается из органических соединений и вступает в реакцию с тиоцинатом калия, образуя соединение, дающее в кислой среде розово-красное окрашивание. Интенсивность окраски определяется колориметрически.
В норме содержание железа в сыворотке составляет 80-160 мг/дл. Содержание железа в плазме крови увеличивается при первициозной анемии, при гипохромной анемии оно уменьшается.
Определение кальция в сыворотке крови
Медод основан на способности орган-х соедин.-комплексонов- взаимодействовать с ионами кальция. В качестве комплексона используется трилон Б. Трлоном Б титрируют ионы кальция, предварительно связанные с индикатором-мурексидом. Момент полного связывания кальция с трилоном Б определяется по изменению цвета мурексида. Комплекс кальция с трилоном Б более прочен, чем комплекс с мурексидом.
Зная концентрацию и объем р-ра трилона Б, пошедшего на титрование находят содержание кальция.
Нормальное содержание кальция в сыворотке крови 9-11мг/дл. Состояние гипокальциемии наблюдается при авитаминозе D,у беременных, ри недостаточной функции паращитовидной железы, заболев-х почек, при отравлениях фторидами. Гиперкальциемия встречается реже.
59.Исследование физико-химических свойств мочи
ЦВЕТ МОЧИ
Нормальная свежевыпущенная моча представляет собой прозрачную жидкость соломенно-желтого цвета.Нормальная окраска мочи обусловлена наличием в ней ряда пигментов.
Интенсивность окраски мочи меняется обычно параллелно с изменением плотности от светло-желтого. Исключение представляет моча при сахарном диабете – бледная моча высокой плотности. ПРИ РАЗЛИЧНЫХ заболеваниях окраска мочи может меняться от присутствия в ней тех или иных пигментов: кровяных,желчных,порфиринов.
ПЛОТНОСТЬ МОЧИ
Определение плотности мочи имеет большое диагностическое значение при сахарном диабете, нарушениях функции почек. В НОРМЕ У ЧЕЛ-КА ПЛОТНОСТЬ МОЧИ КОЛЕБЛЕТСЯ ОТ 1,020 ДО 1,026 КГ/Л.
Плотность меняется как от кол-ва введенной в организм жидкости, так и от количества жидкости,выведенной из организма с потом и калом
Ph мочи
В норме кислотность мочи зависит от пищи.При обычном питании человека моча имеет слабокислую или нейтральную реакцию, Ph 5-7. При преобладании в пище мяса, реакция изменяется в кислую сторону, при преобладании растительной- в щелочную.
60.Определение наличия в моче белка
Качест-ная реакция с азотной кислотой.
В пробирку наливабт азотную кислоту,наклоняют под углом 45 градусов и осторожно, по стенке, пипеткой наслаивают мочу.Вприсутствии белка на границе двух жидкостей образуется белы аморфный осадок или муть. Если белок в моче отсутствует, на границе появляется красное прозрачное кольцо, обусловленное изменением пигментов мочи под действием азотной кислоты.
Реакция с сульфосалициловой кис-той.
В две пробирки наливают профильтрованную мочу. В одну пробирку добав-т р-р сульфасалициловой к-ты, вторая пробирка служит контролем.Если в 1 проб моча содержит белок, то р-р мутнеет. Опытную и контрольную пробу сравнивают на черном фоне. Эта реакция явл самой чувствительной набелок, так как с ее помощью можно открыть 0,015г/л белка.
61.КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕПРЯМОГО БИЛИРУБИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ. КЛИНИКО-ДИАГНОЗТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
В ТРИ проб наливают сыворотки. Сыворотку след-т предворительно развести в 2 раза изотоническим р-ром хлорида натрия. В 1 прбирку приливают изотонический р-р хлорида натрия, диазореактива и оставляют на 10 мин. Во 2 пробирку приливают кофеинового реактива и изотонический р-р хлорида натрия. Ч\З 10 МИН фотометрируют пробу против воды в кювете на 5 мм при зеленом светофильтре и измеряют оптическую плотность азобилирубина розового цвета.Расчет производят по калибровочному графику.В 3 пробирку для общего билирубина приливают кофеиновогореактива и диазореактива и через 20 мин фотометрируют против воды.Для определения непрямого билирубина в сыворотке крови из общего билирубина вычитают показания прямого билирубина и умножают на разведение сыворотки с учетом контроля.
КЛИНИКО-ДИАГНОЗТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
Н акопление в крови билирубина выше 27,36-34,20 мкмоль\л приводит к отложению его в тканях, вызывая желтуху, обусловленное переполнением желчных путей вследствие закупорки,разрыва их и последующего перехода желчи в русло крови.
62.Методы количественного определения белков и белковых фракции в крови. Клиническое значение проведения анализа крови.
Биуретовым методом. Основан на образовании биуретового комплекса (имеет фиолетовый цвет) пептидных связей белков с двухвалентными ионами меди. В методе используют т. н. биуретовый реактив, состоящий из KOH, CuSO4 и цитрата натрия.В образовавшемся комплексе медь связана с 4 азотами координационными связями, а с 2 кислородами — электростатическими. Полноценный комплекс образуется лишь с пептидами, состоящими более чем из 4 остатков. Оптическую плотность раствора (прямо пропорциональную концентрации пептида) определяют при 540—560 нм.К достоинствам метода стоит отнести его низкую чувствительность к посторонним веществам, невысокую погрешность.Чувствительность метода — 2-10 мг/мл.
Клин ический анализ крови (р азвернутый анализ крови) — врачебный анализ, позволяющий оценить содержание гемоглобина в системе красной крови, количество эритроцитов,цветовой показатель, количество лейкоцитов, тромбоцитов. Клинический анализ крови позволяет рассмотреть лейкограмму и скорость оседания эритроцитов (СОЭ).С помощью данного анализа можно выявить анемии (снижение гемоглобина — лейкоцитарная формула), воспалительные процессы (лейкоциты, лейкоцитарная формула) и т. д.
63.ОБНАРУЖЕНИЕ ЖЕЛЧНЫХ ПИГМЕНТОВ В МОЧЕ
1.Качественная проба на билирубин в моче с реактивом Фуше
Ме тод основан на окислении билирубина хлоридом железа (III), входящим в состав реактива Фуше, после осаждения его хлоридом бария. При этом образуется окрашенные производные.
В прб наливают мочу,прибавляют р-р хлорида бармя, перемешивают и фильтруют смесь. Вынутый из воронки фильтр раскладывают на сухой фильтровальной бумаге. На осадок наносят раствор Фуше. В присутствии билирубина на фильтре появляются сине-зеленые и голубоватые пятна. В нормальной моче содержится очень небольшое количество билирубина, поэтому открыть его обычными реакциями нельзя.
2. ПРОБА НА БИЛИРУБИН С РАСТВОРОМ ИОДА.
Метод основан на окислении билирубина мочи в биливердин под действием иода.
В пробирку наливают мочу и осторожно наслаивают спиртовой раствор иода. При наличии билирубина на границе между обеими жидкостями образуется зеленое кольцо. С нормальной мочой проба отрицательная.
64.Обнаружение кетоновых тел в моче
1.Проба Люголя на ацетон.
К моче добавляют р-р нитропруссида натрия и раствор гидроксида натрия. Появляется красно-бурое окрашивание. При подкислении концент уксусной к-ты окрашивается в ярко-красный. ЕСЛИ АЦЕТОН ОТСУТСТВУЕТ В МОЧЕ, при подкислении уксусной к-той красное окрашивание переходит в желтое.
2. Проба Либена на ацетон.
К моче добавляют р-р гидроксида натрия и затем по каплям р-р Люголя до слабо-желтой окраски р-ра.При наличии ацетона в моче жидкость мутнеет вследствие выделения бледно-желтого кристаллического осадка иодоформа, обладающего характерным запахом: СН3СОСН3+2I2+4NaOH=CH3I+CH3COONa+3NaI+3H2O
3. Проба Герхарда на ацетоуксусную кислоту
К моче прибавляют по каплям р-р хлорида железа (III),выпадает осадок фосфатов в форме FePO4; при наличии ацетоуксусной кислоты от прибавления лишней капли хлорида железа(III) появляется винно-красное окрашивание, постепенно бледнеющее при стоянии вследствие самопроизвольного декарбоксилирования ацетоуксусной кислоты: CH3COCH2COOH=CH3COCH3+CO2
65.Обнаружение глюкозы в моче
Для исследования мочи имеются специальные поляриметры-сахариметры. Определение начинают с установки нулевой точки прибора. Моча должна быть прозрачная, освобождена от белков и иметь кислую реакцию. Мочу подкисляют р-ром уксусной к-ты по лакмусу, кипятят, охлаждают и фильтруют.Трубку поляриметра заполняют мочой,завинчивают,насухо вытирают и помещают в аппарат.Определение поводят через 2-3 мин.Если моча содержит глюкозу,то правая половина круга окажется более темной. Вращают окуляр до тех пор,пока поле зрения не будет освещено равномерно. Смотрят на шкалу ина нониус и определяют,на сколько делений шкалы нуль нониуса отошел вправо от нуля шкалы.После этого определяют положение нуля нониуса более точно.Количество делении нониуса вправо от нуля нониуса указывает число десятых долей процента сверх того целого числа,которое было устаговлено по делениям шкалы.