Нами, на основании аллергического исследования, были отобраны реагирующие и не реагирующие на туберкулин животные для испытания значимости ретракции кровяного сгустка по методике М.В. Харитонова (1998). Данные представлены в таблице 8.
Анализ таблицы 8 показывает, что индекс ретракции после внутрикожного введения ППД – туберкулина составлял в контрольной группе 0,60 до 0,72 мл, двукратного 0,58 – 0,67 мл. И внутривенного введения 0,58 – 0,72 мл.
Таблица 8 - Результаты специфического подавления ретракции кровяного сгустка
п/п | Инвентарный номер, № | Интенсивность реакции, (мм.) | ИР, после введения ППД-туберкулина в/м, (мл.) | ИР, после 2- кратного введения ППД-туберкулина в/к, (мл.) | ИР, после введения ППД-туберкулина в/в, (мл.) |
Контрольная группа (не реагирующие) | |||||
- | 0,70 | 0,65 | 0,68 | ||
- | 0,60 | 0,62 | 0,61 | ||
- | 0,65 | 0,61 | 0,62 | ||
- | 0,66 | 0,65 | 0,63 | ||
- | 0,72 | 0,67 | 0,68 | ||
- | 0,60 | 0,58 | 0,58 | ||
- | 0,61 | 0,62 | 0,60 | ||
- | 0,64 | 0,66 | 0,64 | ||
- | 0,70 | 0,65 | 0,72 | ||
- | 0,61 | 0,62 | 0,62 | ||
Опытная группа (реагирующие) | |||||
0,46 | 0,44 | 0,48 | |||
0,40 | 0,43 | 0,46 | |||
0,43 | 0,49 | 0,50 | |||
0,51 | 0,52 | 0,52 | |||
0,60 | 0,61 | 0,60 | |||
0,53 | 0,49 | 0,51 | |||
0,50 | 0,48 | 0,52 | |||
0,70 | 0,66 | 0,68 | |||
0,60 | 0,61 | 0,62 | |||
0,53 | 0,50 | 0,52 |
В опытно группе после внутрикожного введения ППД – туберкулина данный показатель установили у 7 животных 0,40 – 0,59 мл, двукратного введения 0,43 – 0,50 мл, то есть он имеет меньшую величину, чем у контрольных животных.
Индекс ретракции после внутривенного введения ППД – туберкулина составил у 6 животных от 0,46 – 0,52 мл. Из таблицы видно, что в опытной группе у 7 коров индекс ретракции меньше 0,6 мл.
|
Таким образом, у опытных животных (реагирующих на внутрикожное, двукратное и внутривенное введение аллергена) ретракция кровяного сгустка имела меньшую величину (от 0,40 до 0,53 мл). Данные животные убиты с диагностической целью, при послеубойном осмотре изменений характерных для туберкулеза не обнаружено. В лаборатории кафедры эпизоотологии провели бактериологический анализ проб биоматериала от 7 реагирующих на туберкулин коров, у которых индекс ретракции составлял 0,40; 0,43; 0,46; 0,50; 0,51; 0,53 (2 головы). Посевы проводили на твердую среду Мордовского и на полужидкую среду Школьниковой (для выделения Л – форм микобактерий).
Бактериологический анализ биоматериалов
Основным методом диагностики туберкулеза является бактериологический, который включает микроскопию мазков, выделение чистой культуры.
Бактериологические исследования биоматериала проводят с целью установления диагноза и в период неблагополучия хозяйств, для контроля эффективности мероприятий.
По истечении срока наблюдения из культур готовили мазки, окрашивали по Циль – Нильсену и микроскопировали. Бактериальные формы были представлены палочками, располагающимися одиночно или кучками, Л – формы – в виде малых и больших шароподобных структур, неравномерно окрашенных в синий или фиолетовый цвет.
Таблица 9 - Результаты бактериологических исследований биоматериала
Инвентарный номер | ИР, мл. | Характер изменений биоматериала | Выделена на среде | |
Мордовского (бактериальные культуры) | Школьника (Л-формы) | |||
0,46 | - | + | - | |
0,40 | - | + | - | |
0,43 | - | - | + | |
0,51 | - | - | + | |
0,53 | - | + | - | |
0,50 | - | - | + | |
0,53 | - | - | + |
|
Как видно в таблице 9, из проб биоматериала у всех 7 убитых животных выделены микобактерии. В 3 случаях бактериальные культуры, в 4 случаях Л – формы.
Для дальнейшего изучения было отобрано 4 культуры Л – форм. Учитывая, что основной биологической особенностью их является реверсия в бактериальное состояние, нами проведено пассирование культур на плотные и полужидкую среду Школьниковой (всего три пассажа). В обычное бактериальное состояние реверсировали 2 культуры, 2 культуры рост утратили на первом – втором пассаже.
Видовую принадлежность у выделенных бактериальных культур и культур – ревертантов Л – форм изучили, используя культуральный и биохимический методы. Учитывая, что основным возбудителем туберкулеза крупного рогатого скота является M. bovis дифференциацию этих видов в первую очередь проводили с использованием следующих тестов:
- характер роста на плотных средах;
- скорость роста при разных температурах;
- образование пигмента на свету и в темноте;
- рост на средах с салициловым натрием.
По результатам идентификации все культуры отнесены к атипичным микобактериям. Бактериальные культуры были представлены: M. terrae (2), M. sсrofulaccum, M. intracellularae, M. smegmatis.
Таблица 10 - Результаты биохимической идентификации микробактерий, выделенных от животных благополучных хозяйств
п/п | Рост при t0 | Салициловый натрий | Амиды | Вид микобактерий | ||||||||||||||
220 | 370 св. | 370 тем. | 450 | К | Ацетамид | Мочевина | Никотинамид | Пиразинамид | Сукцинамид | Аллонтаин | Твин 80 | Арилсульфатазная активность | Нитратредуктаза | Ниациновый тест | ||||
Бактериальные культуры | ||||||||||||||||||
+ | + | + | - | + | + | + | - | - | ± | ± | - | ± | + | - | + | - | M. terrae | |
+ | + | + | - | - | - | + | + | - | - | - | ± | - | - | M. scrofulaceum | ||||
+ | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | - | + | + | + | + | - | M. smeq-matis | |
Культуры ревертанты | ||||||||||||||||||
+ | + | + | - | + | + | + | - | - | ± | ± | - | ± | + | - | + | - | M. terrae | |
+ | + | + | + | + | + | + | - | - | + | + | - | - | - | + | - | - | M. intracellularae |
|
Таким образом, из биоматериала коров реагирующих на туберкулин нами выделены атипичные микобактерии и их Л – формы.