Посев «штрихом»(на рисунке 1)
Исследуемый материал собирают прокаленной петлей и наносят параллельными штрихами на поверхность среды по всей чашке.
Посев «змейкой»
Исследуемый материал собирают прокаленной петлей и наносят зигзагообразным штрихом на поверхность среды по всей чашке.
Метод стерилизации питательных сред
В практической работе под стерилизацией понимают методы, применяемые для уничтожения всех форм жизни как на поверхности, так и внутри стерилизуемых объектов. Стерилизуют посуду, инструменты, питательные среды и другие необходимые предметы с целью не допустить развитие посторонних микроорганизмов в исследуемых культурах. Основные способы стерилизации питательных сред, посуды и других лабораторных материалов представлены в таблице 1.
Метод посева культуры на «пестрый ряд»
Посев чистой исследуемой культуры на «пестрый ряд»: полужидкие среды Гисса с индикатором ВР, углеводами (глюкоза, лактоза, маннит) и МПБ.
Пересев в полужидкие среды осуществляем бактериологической иглой или бак. петлей диаметром 1 мм уколом в толщу агара, не доходя до дна пробирки 1 мм. При пересеве в жидкие среды петлю с биомассой исследуемой культуры погружаем в жидкость, растираем на стенке пробирки и смываем. После этого между стенкой пробирки и пробкой помещаем индикаторные бумажки для определения индола и сероводорода, не допуская смачивания краев пробирки и пробки питательной средой
Основой изучения биохимических свойств микроорганизмов с целью их идентификации является определение промежуточных и (или) конечных продуктов метаболизма. Таксономическое значение имеют сахаролитические и протеолитические свойства бактерий, которые определяют на дифференциально-диагностических средах, входящих в состав «пестрого ряда».
Определение сахаролитических свойств производится на средах Гисса. Их состав: пептонная вода, 1% углевода, индикатор Андреде (ВР или др.), 0,3-0,5% агара, если среда полужидкая; если среда жидкая, то в пробирки опускают поплавки (короткие стеклянные трубочки, запаянные с одного конца).
Определения протеолитических свойств производится на пептонной воде (ПВ) или мясо-пептонном бульоне (МПБ) с учетом образования конечных продуктов метаболизма белков (пептона, аминокислот) - индола, а в ряде случаев аммиака.
Образование индола сопровождается окрашиванием в розовый цвет индикаторной бумажки, пропитанной раствором щавелевой кислоты (метод Мореля); образование сероводорода - почернение индикаторной бумажки, пропитанной ацетатом свинца; образование аммиака - посинением лакмусовой бумажки.
Метод приготовление питательной дифференциально-диагностической среды - Эндо
Среда Эндо, выпускаемая в сухом виде, готовится следующим образом: 5 г порошка растворяют при подогревании в 100 мл дистиллированной воды, кипятят 2-3 минуты при постоянном помешивании и разливают в чашки.
При отсутствии сухой среды Эндо она может быть приготовлена ех tempore. К 100 мл стерильного расплавленного МПА добавляют 1 г лактозы, растворенной и прокипяченной в 5 мл дистиллированной воды, и 1 мл насыщенного спиртового раствора основного фуксина, обесцвеченного перед добавлением к агару 10%-ным водным раствором сульфита натрия до бледно-розового оттенка. Среду смешивают, разливают по чашкам и подсушивают в термостате.
Метод выявления колиформных бактерий (схема 1)
Методы выявления и определения НВЧ колиформных бактерий основаны на высеве определенного количества продукта и (или) разведений навески продукта в жидкую селективную среду с лактозой, инкубировании посевов, учете положительных пробирок, пересеве культуральной жидкости в жидкую селективную среду для учета газообразования или пересева, при необходимости, культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды для подтверждения по биохимическим и культуральным признакам роста принадлежности выделенных колоний к колиформным бактериям.
Заключение
В ходе учебной практики с 25.06.18 по 20.07.18 гг., пройденной в испытательном лабораторном центре Федерального бюджетного учреждения здравоохранения «Центр гигиены и эпидемиологии в Ханты-Мансийском автономном округе-Югре (Филиал федерального бюджетного учреждения здравоохранения «Центр гигиены и эпидемиологии в Ханты-Мансийском автономном округе-Югре в Белоярском районе и в Березовском районе) г.Белоярский, приобрела и изучила следующие общие знания и навыки:
· состав входной и выходной документации;
· процесс обработки информации;
· закрепление теоретического материала;
· техники качественного и количественного посева материала на питательные среды.
Ознакомилась с:
- правилами противоэпидемического режима в бактериологических лабораториях;
- правилами работы с автоклавами и стерилизационным оборудованием;
- контролем качества работы автоклавов и стерилизационного оборудования;
- режимом дезинфекции инфицированного (отработанного) материала и чистого (лабораторная посуда, инструментарий), предстерилизационной подготовкой и стерилизацией;
- правилами приготовления простых питательных сред;
- правилами доставки исследуемого материала;
- техникой приготовления и окраски мазков;
- постановкой биохимических тестов в классическом варианте;
- развитие умений самостоятельной работы по сбору, изучению, анализу и обобщению материала;
- формирование методологической, методической и психолого
педагогической готовности к самостоятельной работе.
В основном цель учебной практики достигнута, так как в ее ходе произошло закрепление теоретического материала, который был изучен в течение семестра, а так же были приобретены практические навыки работы в отделе бактериологических исследований бактериологической лаборатории. Я старалась овладеть навыками профессиональной деятельности, повысить свой уровень в подготовке выбранной профессии.
Необходимо отметить, что в процессе прохождения учебной практики возникали трудности, связанные с отсутствием опыта работы в лаборатории и со значительным отрывом теоретических познаний от реальной ситуации.
В целом учебная практика позволила систематизировать и закрепить знания, полученные в период обучения, а также расширить профессиональный кругозор.
Список использованной литературы
1. ФФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» г. Белоярского: [Электронный ресурс]. Белоярский, 2017. -URL:https://fbu3hmao.ru/ob_uchrezhdenii/struktura_filialy/ (Дата обращения: 18.07.18)
2. Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 (вместе с "СП 1.3.2322-08. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней. Санитарно-эпидемиологические правила") [Электронный ресурс]: Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 28.01.2008 N 4 (ред. от 29.06.2011) // Бюллетень нормативных актов федеральных органов исполнительной власти.— 12.05.2008.—N 19. URL: https://www.consultant.ru (Дата обращения: 15.07.2018).
3. Золотухин, С.Н. Микробиология: Учебно-методический комплекс по дисциплине/ С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Ковалева. – Ульяновск, Ульяновская ГСХА, 2014. – 74 с
4. Гигиенические требования к срокам годности и условиям хранения пищевых продуктов: Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы—М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004.—20 с.
5. Госманов, Р.Г., Микробиология и иммунология / Р.Г. Госманов, А.И. Ибрагимова, А.К. Галлиулин - СПб.; М.; Краснодар: Лань, 2013
6. ГОСТ 31747-2012 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий):[Электронный ресурс] Москва, 2013. - URL: https://docs.cntd.ru/document/1200098583 (Дата обращения: 16.07.18).
Приложение
Рисунок 1- схема посева штрихом
Таблица 1 - Способы стерилизации питательных сред, посуды и других лабораторных материалов
Схема -1 – Выявление колиформных бактерий.
