Хлороформный экстракт корневищ свидетельствует о наличии стероидов, а спиртовой экстракт-сапониновых гликозидов. Водяной экстракт свидетельствует о наличии гликозидов, сапонинов и восстановленных сахаров. Также установлено, что они отсутствуют в некоторых экстрактах. (Таблица №3)
| Типы элементов | Гексановый экстракт | Хлороформовый экстракт | Этанольный экстракт | Водяной экстракт |
| Алкалоиды | - | - | - | - |
| Феноловые соединения | - | - | + | + |
| Флаваноиды | - | - | - | - |
| Сапонины | - | - | ++ | + |
| Стероиды | - | ++ | - | - |
| Тритерпеноиды | - | - | - | - |
| Протеины | - | - | - | + |
| Карбогидраты | - | - | + | ++ |
| Гликозиды | - | - | + | + |
Таб.3 Качественный химический анализ экстрактов Костуса.
| Система растворителей | Количество попыток | Значения Rf | Визуализация |
| 1.Хлороформ:Метанол(8:1.5) | 0.08, 0.4, 0.6 | В иодной камере | |
| 2.Хлороформ: Этилацетат: Муравьиная кислота (7:3:0.5) | 0.08, 0.47, 0.50, 0.6 | В иодной камере | |
| 3.Тулоин:Этилацетат (7:3) | 0.04, 0.41, 0.48, 0.58,0.6,0.92 | В иодной камере | |
| 4.Толуин:Этилацетат:Муравьиная кислота:GAA (2:1:1:0,75) | 0.04, 0.08, 0.35, 0.41, 0.48, 0.58, 0.6, 0.77, 0.79, 0.79 | В иодной камере |
Таб.4 Исследование TLC спиртового экстракта Костуса.
| Трек | Rf | Применяемый объем | Количество частей | Площадь | Х | Сссылка |
| 0.61 | - | 1853.74 | 608.53 | Диосгенин | ||
| 0.61 | 1847.19 | - | Диосгенин | |||
| 0.61 | 1845.12 | - | Диосгенин | |||
| 0.61 | 2102.20 | - | Диосгенин | |||
| 0.61 | 2100.12 | - | Диосгенин | |||
| 0.61 | 2527.00 | - | Диосгенин | |||
| 0.61 | 2575.79 | - | Диосгенин | |||
| 0.61 | 2803.20 | - | Диосгенин | |||
| 0.61 | 2830.23 | - | Диосгенин | |||
| 0.61 | 3187.47 | - | Диосгенин | |||
| 0.61 | 3250.23 | - | Диосгенин | |||
| 0.61 | 3417.54 | - | Диосгенин | |||
| 0.61 | 3498.51 | - | Диосгенин |
Таб.5 Реакции, полученные в ходе подготовки калибровочного графика HPTLC исследования на диосгенин.
|
|
| № исследов. | Диосгенин в экстракте | Общий добавленный концентрат | Фактический концентрат | Восстановление (в %) | Значение |
| 608.53 | 658.53 | 651.38 | 98.99 | 99.66 | |
| 608.53 | 708.53 | 705.75 | 99.68 | ||
| 608.53 | 758.53 | 760.53 | 100.33 |
Таб.6 Результаты из повторного исследования на диосгенин.
| № Параметра | Значения |
| 1.Линейный ряд | 600-1800 нг(нанограмм) |
| 2.Точность | 99.66% |
| 3.Четкость | 1,1 |
| 4.LOD(потеря влаги) | 5,69 нг |
| 5.LOQ(уровень количественной оценки) | 17,25 нг |
| 6.Различие между 2-мя экспериментами | 0,59 |
Таб.7 Подтвержденные факты о диосенине.
Хромотографические исследования. 3.3.1.Исследования TLC.
Результаты данного исследования предоставлены в таблице №4.
Исследования HPTLC.
Система растворителей, которая доавила бы плотые пятна со значением Rf, была желательной для количественного определения диосгенина в экстракте Костуса Прекрасного. Живая фаза состоит из толуола: этидацетата: GAA(ледяная уксусная кислота): муравьиная кислота (2:1:1:0,75), где Rf диосгенина равен (0.61). Данные линейной регрессии показали хорошую линейную зависимость в диапазоне от 600 до 1800 нг.Дисогенин показал всего одну наивысшую точку на графике хромотограммы HPTLC (figure 8). Калибровочную кривую (на графике) диосгенина получали путем определения стандартного диосгенина на пластинке HPTLC. После разработки пластинку сканировали при длине 194 мм. Калибровочная кривая была составлена путем построения концентрации диосгенина в зависимости от средней площади высшей точки (Таблица №6, figure 7).Этанольный экстракт Костуса Прекрасного был анаизирован с помощью предложенного метода. Количество дисогенина высчитывали по калибровочной кривой. Разработанный метод был утвержден в соответсвии с принципами ICH и предоставлен в таблице № 7. Процентное содержание диосгенина составило 99.66%, что свидетельствует о действительности работы метода. (Таблица №6)
|
|
Обсуждение.
Данное исследование устанавливает макро- и микроскопические, физикохимически значения, флуоресцентный анализ порошка и фитохимический скрининг корневища Костуса Прекрасного.
В последнее время наблюдается быстрый рост стандартизации отдельных лекарственных растений с терапевтической значимостью. Все это связано с их целебными свойствами. Разумеется, стандартизация Костуса Прекрасного в формакологии- огромный шаг. Как наиболее экономически эффективная помощь в идентификации лекарственной травы, использование микроскопических характеристик является основой в классической формакогнозии и остаётся жизненно важным компонентом современной монографии. Макро- и микро стандарты могут определить параметры обоснования и подтверждения подлинности аппарата. Постоянная физическая оценка лекарственных трав является важным параметром при выявлении фальсификации или неправильной обработки лекарств.
Стандартизация натуральных продуктов является сложной задачей из-за из гетерогенного состава, который находится в форме цельного растения, растительной части/экстрактов. Для обеспечения воспроизводимого качества растительных продуктов правильная идентификация имеет большое значение.
|
|
Характерные диагностические фармакологические признаки корневища свидетельствует от том, что Костус Прекрасный имеет особый вид перидермы, которая состоит из нескольких обычно длинных, тангенционально растянутых, тонкостенных клеток Фелломы. Существует множество пучков, рассеяных по кортикальной зоне. Каждый пучок имеет примерно 4-5 узких угловых элементов ксилем и немного флоэмы. Стеларная часть имеет менее выраженные эндодермические, перикардовые слои и центральные сосудистые пучки.кристаллы оксалата кальция схожи в основе клеток паренхимы. Они ромбовидные, кубовидные и цилиндрические по форме. В стеларной части кристаллы похожи на друзы. Призматические кристаллы 4-6 мм в ширину, а друзы 20-30 мм.
Предварительные фитохимические исследования корневища свидетельствуют о наличии стероидов, самониновых гликозидов, фенома и сахаров.
Значение Rf диосгенина составило 0,61. Линейность была найдена в диапазоне от 600 до 1800, а значение коэффициента корреляции составляет 0,9934. Значение LOD-5,69 нг, LOQ-17 нг. Предлагаемый метод HPTLC обеспечивает более быстрый контроль для анализа экстракта Костуса Прекрасного.
После проведения исследования можно сделать вывод о том, что фармакологические и HPTLC исследования дали набор количественных стандартов, которые могут служить важным источников информации в определении качества и чистоты растительных материалов в будущих исследованиях контроля качества фармакологических препаратах из корней.