ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ
ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ
«БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»
МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
КАФЕДРА МИКРОБИОЛОГИИ, ВИРУСОЛОГИИ
Утверждаю:
зав. кафедрой,
проф. Туйгунов М.М. 
«_02_» ____02_____2017 г.
Методические указания
Для студентов
к практическому занятию на тему:
«Действие экологических факторов на микробы. Антибиотики. Контрольная работа по темам №7-10»
Дисциплина микробиология, вирусология
Специальность: 31.05.01 «лечебное дело»
курс 2
Семестр 4
Уфа – 2017г
Тема: «Действие экологических факторов на микробы. Антибиотики. Контрольная работа по темам №7-10»
На основании рабочей программы учебной дисциплины: микробиология, вирусология, утвержденной «» 2012 г.
Рецензенты:
1. Проф. Мавзютов А.Р.
2. Проф. Мурзабаева Р. Т.
Авторы: доцент Давлетшина Г.К.
Доцент Савченко Т. А.
Проф.Ахтариева А.А.
Утверждение на заседание № 48 кафедры микробиологии, вирусологии от 02.02. 2017 г.
1.Тема и ееактуальность: «Действие экологических факторов на микробы. Антибиотики. Контрольная работа по темам №7-10».
Микроорганизмы, находящиеся во внешней среде, подвергаются воздействию самых разнообразных физических, биологических (антибиотики, бактериоцины, бактериофаги и др) и химических факторов, которые в зависимости от совокупности условий оказывают благоприятное, губительное или индифферентное действие. На практическом здравоохранении для проведения лечебно-профилактических мероприятий широко используют губительное действие факторов на микроорганизмы в целях обеззараживания объектов внешной среды, уничтожения микробов на поверхности и в организме человека.
2..Учебные цели: изучение действия физических, биологических (антибиотиков, бактериоцинов, бактериофагов и др) и химических факторов на микроорганизмы.
2.1. Для формирования профессиональных компетенций студент должен знать:
- особенности строения микроорганизмов;
- микроскопический метод;
- бактериологический метод;
- особенности химического состава и физиологии микроорганизмов.
2.2.Для формирования профессиональных компетенций студент должен уметь:
· -обращаться с иммерсионной системой микроскопа;
· готовить препараты из бактериальных культур;
· готовить препараты для исследования микробов в живом состоянии;
· окрашивать мазки простыми методами (водным фуксином и метиленовой синью)
· идентифицировать бактерий по морфологическим и тинкториальным признакам.
· пользоваться аппаратурой, используемой для стерилизации (автоклав, сухожаровой шкаф, фильтры);
· проводить стерилизацию кипячением;
· определить чувствительности бактерий к антибиотикам методом индикаторных дисков.
3. Материалы для самоподготовки к освоению данной темы:
Вопросы самоподготовки:
1)Механизм действия на микроорганизмы физических и химических факторов.
2) понятие о стерилизации, дезинфекции, асептике и антисептике.
3) методы стерилизации. Методы контроля эффективности стерилизации.
4) Механизмы действия дезинфицирующих веществ.
5) Дезинфекция в микробиологической лаборатории: рук, рабочего места,
выделений больного, предметных и покровных стекол.
6) Типы взаимодействия между микробами в биоценозах.
7) Антибиотики, классификация по источникам выделения, по спектру
действия, по механизму действия.
8) Побочные действия антибиотиков на микроорганизмы и на макро организм.
9) механизм развития антибиотикоустойчивости; пути преодоления
10) методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам
4. Вид занятия: практическое занятие.
5. Продолжительность занятия: 3 часа.
6.Оснащение:
6.1.Кинофильм "Асептика и антисептика" (28 мин.) таблицы: 0-39 "Стерилизация", 0-40 "Влияние температуры на бактерии"; лабораторная посуда, подготовленная к стерилизации; наборы красок для окраски по Граму и Ожешко; культура бактерий (кишечная палочка и антракоиды).
6.2. Аппаратуры для стерилизации (автоклав, сухожаровой шкаф, фильтры) термостат; печь Пастера; фильтры Зейтца, Шамберлана, Веркефольда; водяная баня; микроскопы.
7.Содержание занятия:
7.1.Контроль исходного уровня знаний и умений.
7.2.Разбор с преподавателем узловых вопросов, необходимых для освоения темы занятия.
7.3.Демонстрация преподавателем методики практических приемов по данной теме.
7.4. Самостоятельная работа студентов под контролем преподавателя.
1) Постановка опыта по стерилизации спорогенного и аспорогенного материала (1 этап)
Методика.
1.Проверка чистоты культуры кишечной палочки и культуры антракоида путем приготовления мазков и окраски препаратов (по Граму и Ожешко).
2.Стерилизация эмульсии обеих культур кипячение в водяной бане в течение 30 минут.
3.Проверка качества стерилизации: пересевом кишечной палочки на МПБ, антракоида на МПА.
4.Термостатирование при температуре 37 градусов в течение 24 часов.
5.7Учет полученных результатов. В случае неэффективности предложить свои методы стерилизации.
2) Определение чувствительности золотистого стафилококка к антибиотикам методом бумажных дисков (1 этап)
Методика.
1. Исследуемую культуру суспензируют в 2 мл стерильного физиологического раствора и готовят 1- миллиардную взвесь по стандарту мутности.
2. Бактериальную взвесь (1 мл) стерильной пипеткой наливают на поверхность среды в чашку Петри и равномерно распределяют путем покачивания (либо шпателем). Избыток жидкости удаляют пастеровской пипеткой. Шпатель и пипетки помещают в стакан с дезраствором.
3. На различные участки засеянного агара пинцетом помещают диски с антибиотиками (6-8), стараясь не касаться агара. Диск с пинцетом слегка прижимают к агару.
4. Чашки с посевами помещают в термостат на 18-24 часа.
5. Через сутки проводят оценку результата опыта путем измерения зоны задержки роста (в миллиметрах) бактерий по диаметру, включая бумажный диск.
Результаты выполненной работы оформляют в виде протокола исследования.
Шкала оценки чувствительности бактерий к антибиотикам
| Размер зоны задержки роста, мм | чувствительность |
| До10 Более 10 | Не чувствителен чувствителен |
Протокол исследования
Цель…
| Вид возбу- дителя | Результат посева на чувствительность к антибиотикам (рисунок с обозначениями) | Величина зон задержки роста, мм | |||||
| Антибиотики | |||||||
Вывод (Ответить на вопросы: К каким антибиотикам чувствителен выделенный возбудитель? Какой антибиотик Вы рекомендуете для лечения и почему?).
7.5.Контроль конечного уровня усвоения темы:
Задание 1
Цель. Овладеть навыком определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом индикаторных дисков.
Задача. В клинику поступил больной с диагнозом: «Стафилококковая пневмония». Для успешного этиологического лечения в целях выбора эффективного антибиотика было рекомендовано определение антибиотикограммы возбудителя. Проведите исследование. Оцените результат. Сделайте вывод.
Вывод (Ответить на вопросы: К каким антибиотикам чувствителен выделенный возбудитель? Какой антибиотик Вы рекомендуете для лечения и почему?).
Задания 2
Цель. Определить чувствительность бактерий к антибиотикам методом серийных разведений.
Задача. Для назначения больному рациональной схемы лечения пенициллином потребовалось определить бактериостатическую и бактерицидную концентрацию препарата по отношению к возбудителю – золотистому стафилококку.
Методика.
1. В пробирки разливают стерильный мясо-пептонный бульон (МПБ) по 1 мл.
2. Добавляют исследуемый антибиотик в различных концентрациях: от 1 до 128 ед/мл.
3. Заливают в пробирки 18-часовую бульонную культуру стафилококка по 1 мл.
4. Инкубируют посевы в термостате 24 часа.
5. Через сутки учитывают результаты опыта.
а) Определяют минимальную подавляющую (бактериостатическую) концентрацию антибиотика (МПК). За нее принимают наименьшую концентрацию антибиотика, при которой не происходит размножение бактерий и содержимое пробирки остается прозрачным.
б) Определяют минимальную бактерицидную концентрацию антибиотика (МБК). Для этого из пробирок с отсутствием видимого роста и из пробирки с минимальной концентрацией антибиотика, где рост есть (контроль), производят высев секторами на мясо-пептонный агар в чашки Петри. На секторах обозначают концентрацию антибиотика, из которой сделан высев. Чашки относят в термостат на 18-24 часа.
6. Через сутки просматривают чашки и определяют МБК по отсутствию роста бактерий на агаре в соответствующих секторах.
Результат выполненной работы оформляют в виде протокола исследования.
Протокол исследования
Цель…
| Концентрация антибиотика в МПБ, ед/мл | К | |||||||||
| Наличие роста микроба в МПБ(мясо-пептонный бульон) | МПК | |||||||||
| Наличие роста микроба при высеве на МПА (мясо-пептонный агар) | МБК |
Вывод (Ответить на вопросы: 1. Почему МБК выше, чем МПК? 2. Может ли быть наоборот? 3. Почему?).
Приложение №1
Логическая структура темы (ЛСТ)
стерилизация
физические методы: прокаливание, тиндализация, кипячение, сухим паром – шкаф Пастера, текучим паром аппарат Коха, пастеризация, УФО
механические методы: фильтрование, фильтры: Зейтца, Шамберлана, Беркефельда
химические методы: дезинфекция.
Приложение №2
Практические рекомендации по изучению
отдельных разделов темы:
При изучении темы «Стерилизация» необходимо обратить внимание на методы определения эффективности стерилизации, необходимо заранее приготовить таблицу для записи протокола практической работы, проводимой на занятии по схеме:
| Возбуди-тель | Проверка на чистоту культуры | Метод стерили-зации | Проверка качества стерилиза-ции | Метод культи-вирова-ния | Результат контроль-ного посева | Резуль-таты опыта и пред-лагаемые методы |
Приложение №3.