Клинико-диагностическое значение.
Определение активности амилазы мочи и сыворотки крови широко используется в клинической практике для диагностики заболеваний поджелудочной железы. При острых панкреатитах амилазная активность мочи и сыворотки крови увеличивается в десятки раз, особенно в первые сутки заболевания, а затем постепенно возвращается к норме. При почечной недостаточности амилаза в моче отсутствует. В детском возрасте увеличение активности амилазы наблюдается при эндемическом паротите, что указывает на одновременное поражение поджелудочной железы вирусом паротита.
►2) определение глю в слюне глюкозооксидазным методом
ПРИНЦИП МЕТОДА глю окисляется в присутствии глюкозооксидазы согласно реакции глю+02=глюконолактон+Н202 образующаяся перекись под действием пероксиддазы окисляет субстрат с образованием окрашенного продукта определяемого фотометром
НОРМА в слюне 0,5-1,5ммоль\л
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧ.ЗНАЧЕНИЕ увеличение содержанияглю в крови наблюдаетсяпри сах.диабете,остром панкреатите,панкреат.циррозах,эмоц.стрессах,после эфирного наркоза,обильного приему ув с пищей,при повышенной гормональной активности ряда желез(щитовидной,гипофиза,надпочечнков)
Снижение ур глю при поражении паренхимы печени,нарушении ферментативной активности при распаде гликогена,гипофункции щит.железы,надпочнчников,гипофиза,передозировке инсулина при лечении диабета,нарушении всасыания ув, отравлениях фосфором,бензолом,хлороформом,при недостатке приема с пищей ув, после больших потерб крови
►3) Эмульгирование жира.
ПРИНЦИП МЕТОДА: Эмульгирование жира различными амфифильными веществами происходит благодаря их адсорбции на границе раздела двух фаз - гидрофобной и гидрофильной.
ХОД РАБОТЫ: В пять пробирок вносят по 1 капле растительного масла. Затем в каждую пробирку соответственно приливают по 1-2 капли растворов NaOH, NaHCO3, яичного белка, моющего средства и желчи. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и наблюдают образование эмульсии жира. Объясните механизм образования эмульсии жира в этих растворах и значение процесса эмульгирования.
►4) Количественное определение общей кислотности, общей, свободной и связанной соляной кислоты в одной пробе желудочного сока.
ПРИНЦИП МЕТОДА: основан на титровании желудочного содержимого раствором 0.1н NaOH в присутствии индикаторов с различными зонами перехода. Кислотность желудочного сока выражают количеством ммоль едкого натра, нейтрализующего 1 л желудочного сока.
Основные фракции кислот желудочного сока.
“общая кислотность” желудочного сока это сумма всех кислот желудочного содержимого,
“свободная соляная кислота” - свободная минеральная HCl,
“связанная соляная кислота” - кисло реагирующие соли (хлориды) белков и других слабых оснований,
“общая соляная кислота” - сумма свободной и связанной HCl.
Количественное определение свободной соляной кислоты.
Свободная соляная кислота оттитровывается раствором 0.1н NaOH в присутствии индикатора диметиламиноазобензола, имеющего зону перехода окраски от красной до оранжевой при pH 3.0. Слабые же кислоты (молочная, уксусная кислота, кислые фосфаты и связанная соляная кислота) при pH 2.9 - 4.0 находятся в растворе в недиссоциированном состоянии и в реакцию со щелочью не вступают.
ХОД РАБОТЫ: К 10 мл желудочного сока добавить 1-2 капли спиртового раствора диметиламиноазобензола и титровать раствором 0.1н NaOH до появления оранжевой окраски.
Произвести расчет на 1000 мл желудочного сока. Так как затраченное на титрование количество едкого натра эквивалентно количеству соляной кислоты в пробе желудочного сока, то количество соляной кислоты в 1 л желудочного сока будет равно:
a ´ 0.1 ´ 1000
X = ¾¾¾¾¾¾¾ ммоль/л, (1)
b
где: а - количество (мл) 0.1н раствора NaOH, затраченное на титрование,
0.1 - количество (ммоль) NaOH в 1 мл 0.1 N раствора,
b - количество (мл) желудочного сока, взятого для титрования,
1000 - объем (мл) желудочного сока.
Количественное определение общей кислотности желудочного сока.
Титрование общей кислотности желудочного сока проводится раствором 0.1н NaOH в присутствии индикатора фенолфталеина с зоной перехода окраски в пределах pH 8.2 - 10.0, при pH ниже 8.2 он бесцветный, а при pH выше 10.0 - красный.
ХОД РАБОТЫ: К 10 мл профильтрованного желудочного сока добавить 1-2 капли раствора фенолфталеина и титровать 0.1н раствора NaOH до появления слабо розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 мин. Произвести расчет на 1000 мл желудочного сока.
Количественное определение общей кислотности, общей, свободной и связанной соляной кислоты в одной порции желудочного сока.
ХОД РАБОТЫ: Отмерить в колбочки по 10 мл желудочного сока и добавить по 1-2 капли диметиламиноазобензола и фенолфталеина. Титровать 0.1н раствором NaOH до появления оранжевого окрашивания (первая отметка количества израсходованного 0.1н раствора NaOH). Затем продолжить титрования до лимонно-желтого цвета (вторая отметка) и, наконец, до розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 мин (третья отметка).
В процессе титрования отсчет ведется от начальной точки!
Первая отметка соответствует количеству свободной соляной кислоты, третья - общей кислотности. Вторая отметка используется для расчета количества общей соляной кислоты. Среднее арифметическое между вторым и третьим пунктом соответствует общей соляной кислоте. Количество связанной соляной кислоты вычисляется как разница между общей и свободной соляной кислотой.
Например, при титровании 0,1н раствором едкого натра затрачено титрованного раствора (с начала титрования): до первой отметки (оранжевый цвет) 3,3 мл, до второй (лимонно-желтый цвет) - 4,6, до третьей (розовый цвет) - 5,6 мл. Среднее между второй и третьей отметкой:
4.6 + 5.6
¾¾¾¾ = 5.1 мл
Произвести расчет содержания свободной соляной кислоты, общей соляной кислоты, общей кислотности на 1000 мл желудочного сока по формуле (1).
Этот способ расчета неприменим при наличии молочной кислоты в желудке. Поэтому в пробах желудочного сока, содержащего молочную кислоту ограничиться вычислением свободной соляной кислоты и общей кислотности.
НОРМА: Показатели кислотности профильтрованного желудочного содержимого взрослого человека после стандартного пробного завтрака составляют:
общая кислотность 40 - 60 ммоль/л
(новорожденные 2.8 ммоль/л; дети до года 4-20 ммоль/л)
свободная HCl 20 - 40 ммоль/л (новорожденные 0.5 ммоль/л)
связанная HCl 10 - 20 ммоль/л
общая HCl 30 - 60 ммоль/л
КЛИНИКО - ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:
При различных заболеваниях желудка кислотность может быть повышенной, пониженной и нулевой. При язвенной болезни желудка или гиперацидном гастрите наблюдается гиперхлоргидрия - увеличение содержания свободной соляной кислоты и общей кислотности. При гипоацидном гастрите или раке желудка отмечается гипохлоргидрия - уменьшение количества свободной соляной кислоты и общей кислотности. При раке желудка, хроническом атрофическом гастрите отмечается полное отсутствие соляной кислоты и значительное снижение общей кислотности - ахлоргидрия. При злокачественном малокровии, при раке желудка наблюдается полное отсутствие соляной кислоты и пепсина - ахилия.