Химический анализ лекарственного растительного сырья, содержащего кумарины и хромоны
Цель занятия __________________________________________________________
________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Задание 1. Выделите кумарины из лекарственного растительного сырья.
Методика. 3,0 г сырья, измельченного до частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм, помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл 95 % спирта и нагревают на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течении 20 минут. Извлечение фильтруют в горячем виде и используют для проведения качественных реакций и хрома- тографического анализа.
Задание 2. Проведите качественные реакции обнаружения кумаринов в образце сырья, полученном для анализа. Приведите химизм реакций.
1. Лактонная проба. К 2 мл спиртового извлечение прибавляют 5 капель 10 % спиртового раствора калия гидроксида, нагревают на водяной бане в течение 5 минут.
Наблюдения:______________________________________________________________
Содержимое пробирки охлаждают, добавляют 2 мл очищенной воды, хорошо перемешива-
ют, прибавляют 10 % раствора кислоты хлористоводородной до кислой реакции (по лакмусу).
Наблюдения:______________________________________________________________
Записать реакцию:
2. Реакция с диазореактивом в щелочной среде. К 3 мл спиртового извлечения прибавляют 5 капель 10 % спиртового раствора калия гидроксида и нагревают на водяной бане в течение 3-5 минут, прибавляют 5 капель свежеприготовленной диазотированной кислоты сульфаниловой.
Наблюдения:_______________________________________________________________
Записать реакцию:
Выводы:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Задание 3. Проведите обнаружение кумаринов методом хроматографии в тонком слое сорбента в сравнении с достоверными образцами кумаринов. Зарисуйте схему хроматограммы и рассчитайте величины Rf. Сделайте заключение о качественном составе кумаринов в экстракте.
Методика. Спиртовый раствор и растворы стандартных образцов кумаринов наносят капилляром на линию старта пластинки, покрытой слоем силикагеля. Пластинку сушат на воздухе в течение 5 минут, затем помещают в камеру со смесью растворителей гексан-ацетон (8:2) или бен-зол-этилацетат (2:1) и хроматографируют ворходящим методом. Когда фронт растворителей пройдет 10-12 см от линии старта, пластинку вынимают из камеры, сушат в токе холодного воздуха в течение 5 минут или под вытяжным шкафом и просматривают в УФ-свете. Отмечают пятна кума-ринов и цвет их флуоресценции на пластинке простым карандашом. Хроматограмму опрыскивают 10 % спиртовым раствором калия (натрия) гидроксида, подсушивают в сушильном шкафу при температуре 110-120 °С в течение 2-3 минут, а затем опрыскивают свежеприготовленным раство-ром диазотированной кислоты сульфаниловой.
| Схема хроматограммы | № пятна | Величина Rf | Окраска пятен | |
| до обработки | после обработки | |||
Система растворителей:____________________________________________________
Реактив проявления:___ ___________________________________________________
Выводы:_________________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________________________________________________________
Задание 4. Определите количество кумаринов в листьях смоковницы обыкновенной. Рассчитайте результат и сделайте заключение о соответствии исследуемого сырья требованиям ФС 424-99 "не менее 0,08 % суммы кумаринов в пересчете на псора-лен".
Методика. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм.
Около 3 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в аппарат Сокслета и экстрагируют смесью растворителей метанол-хлороформ (15:85) в течение 2-3 часов (не менее 15 сливов). Последний слив растворителя должен быть практически бесцветным.
Полученный экстракт упаривают до объема 80-90 мл, охлаждают до комнатной температуры, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора до метки смесью растворителей метанол-хлороформ (15:85) и перемешивают.
20 мл полученного раствора помещают в делительную воронку вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл воды, прибавляют 2 г натрия хлорида. Смесь энергично встряхивают в течение 2 минут и дают отстояться до полного разделения фаз. Верхний, водный, слой переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, а нижний, хлороформно-метанольный, слой вновь обрабатывают 40 мл воды с добавлением 2 г натрия хлорида, как описано выше. После расслоения фаз водную часть переносят в ту же мерную колбу, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
Полученный раствор центрифугируют на центрифуге (5000 об/мин) в течение 5 мин, после чего фильтруют через бумажный фильтр "желтая лента".
Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 290 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм? используя в качестве раствора сравнения воду.
Содержание суммы кумаринов X, %, в пересчете на псорален и высушенное сырье вычис-ляют по формуле:
D х 100 х 100 х 100 D х 500 х 100
650xmx20x(100-W) 650xmx (100- W)
где: D - оптическая плотность испытуемого раствора при 290 нм; 650 - удельный показатель по-
глощения псоралена при 290 нм; m - масса навески сырья, г; W - содержание влаги в сырье, %,
Выводы: ______________________________________________________________________________________________________________________________________________