Тонкослойная хроматография.

Метод хроматографии в тонком слое сорбента или тонкослойная хроматография (ТСХ) впервые предложен фармацевтами Н.А. Измайловым и М.С. Шрайбер в 1938 г.

ТСХ – один из простейших методов хроматографического анализа, разделение компонентов происходит при перемещении подвижной фазы через нанесенный на пластинку тонкий слой сорбента. Продвижение элюента по сорбенту обеспечивается капиллярными силами.

Пластинки для сорбента изготавливают из стекла, алюминиевой фольги или полиэфирной пленки. В качестве сорбента в ТСХ применяют силикагели, оксид алюминия, крахмал, целлюлозу, полиамидный порошок.

Выбор элюента зависит от природы сорбента и свойств анализируемых соединений и не реагировать с веществами разделяемой смеси. Элюент может состоять из одного или нескольких растворителей, т.е. системы растворителей. Чаще всего это органические растворители – метанол, этанол, хлороформ, бензол, толуол и др.

В начале, подготавливают камеру для хроматографирования. Камера- это стеклянные емкости цилиндрической или плоской формы с плоским дном, с притертертыми крышками или стеклом. В м камеру вносят подвижную фазу, высота слоя жидкости не менее 1 см, выдерживают некоторое время для насыщения камеры парами подвижной фазы.

Подготовленные пробы наносят на пластинку с помощью микрошприца на линию старта, которую проводят иглой на расстоянии 1.5 см от края пластинки. Расстояние между пробами 1 см. Пластинку помещают в камеру для хроматографирования, устанавливая ее в вертикальном положении в подвижную фазу со стороны линии старта, таким образом, чтобы нанесенные пробы не соприкасались с растворителем. Под действием капиллярных сил растворитель движется вдоль слоя сорбента и с разной скоростью переносит анализируемые вещества. По достижению растворителем линии финиша пластинку вынимают из камеры и сушат, после чего проводят детектирование (проявление). Полученная совокупность пятен называется хроматограммой.

Обнаружить зоны отдельных ингредиентов можно следующими способами:

- по собственной окраске пятна

- по флуоресценции при облучении УФ-светом

- по окраске пятен, получаемых в результате реакций, проходящих при обработке пятна парами или опрыскиванием хроматограмм какими либо реагентами, образующими окрашенные соединения с исследуемыми веществами.

После детектирования проводят анализ хроматограмм:

Положение вещества на пластине характеризуется коэффициентом подвижности (R_f), который представляет собой отношение расстояния от линии старта до центра пятна к расстоянию от линии старта до линии финиша.

L₁

R_f = ¾¾

L₂

Величина R_f является качественной характеристикой данного вещества для конкретных условий. Значение R_f всегда в пределах от 0 до 1.

В некоторых случаях при определении подлинности используют величину R_s, представляющую собой отношение R_f анализируемого вещества к R_f стандартного вещества или эталона. Стандартное вещество («свидетель») в том же растворителе наносится на стартовую линию рядом с анализируемым веществом и таким же образом хроматографируется в тех же условиях.

Количественное определение методом ТСХ проводят методами:

1) Планиметрии – определение площади пятна (в мм²) анализируемого компонента в сравнении с площадью пятна стандарта, содержание вещества которого известно. Площадь пятна определяют с помощью планиметра или миллиметровой бумаги.

2) Денситометрии – определение интенсивности окраски пятен анализируемого вещества и стандарта с помощью денситометра.

Практическое применение ТСХ.

- установление подлинности лекарственных веществ,

- определение примесей в фармакопейных субстанциях и лекарственных формах,

- установление ориентировочного количественного содержания веществ,

- разделение сложных лекарственных смесей.