СЕРДЕЧНЫХ СРЕДСТВ НА ГОЛУБЯХ
Отбор голубей и их содержание
Для опытов отбирают беспородных здоровых голубей массой
280-400 г, находившихся в условиях лабораторного содержания в
течение 5-7 сут. За 18-24 ч до начала опыта птиц лишают пищи, но
не воды.
Техника испытания и принцип расчета
Опыт проводят под легким тиопентал - натриевым наркозом (35
мг/кг внутримышечно в лапку). Наркотизированных голубей
привязывают к станку для мелких животных в положении на спине
таким образом, чтобы голова голубя находилась ниже туловища (во
избежание попадания в дыхательные пути слизи и рвотных масс). С
внутренней стороны крыла удаляют перья, находят и отсепаровывают
вену крыла. В вену вводят металлическую канюлю (затупленная
инъекционная игла N 19-22), соединенную тонкой каучуковой трубкой
с градуированной бюреткой вместимостью 5 мл, имеющей деления 0,05
мл. Бюретку предварительно наполняют раствором испытуемого
препарата, приготовленным на 0,9% растворе натрия хлорида.
Испытуемый раствор вводят отдельными дозами по 0,3 мл через каждые
5 мин до наступления остановки сердца голубя. Остановку сердца
определяют по характерному изменению положения головы и шеи голубя
и контролируют последующим вскрытием грудной клетки. Длительность
опыта должна составлять не менее 65 и не более 95 мин.
Голуби, смерть которых наступает в другие сроки, в расчет не
принимаются. В течение опыта голубю вводят не менее 13 и не более
19 доз (0,3 мл) испытуемого раствора.
Испытание обычно проводят на 6 голубях.
Результаты опытов могут быть использованы для расчета
биологической активности лишь в том случае, если в одной и той же
серии опытов расхождение между максимальными и минимальными
числами введенных доз не превышает 4, а общее число доз не выходит
за установленные пределы (13-19). В противном случае увеличивают
количество подопытных голубей или повторяют опыт с новой
концентрацией испытуемого раствора. Оценку активности испытуемых
препаратов можно проводить 2 способами: 1) по сравнению со
стандартным образцом; 2) в голубиных единицах действия.
Оценка активности испытуемого препарата
по сравнению со стандартным образцом
В опыт берут не менее 12 голубей - по 6 голубей для
стандартного образца и испытуемого препарата.
Данные, полученные при биологическом испытании стандартного
образца, могут быть использованы для расчета и последующих опытов
в течение 30 сут без повторного испытания.
Из полученных в опыте со стандартным или испытуемым препаратом
данных вычисляют величину смертельной дозы препарата для каждого
голубя в миллилитрах на 1 кг массы.
Результаты опытов подвергают статистической обработке
аналогично результатам опытов на кошках.
Пример расчета при обработке данных - по общей статье
"Статистическая обработка результатов химического эксперимента и
биологических испытаний" (ГФ XI, вып. 1, с. 199).
----T------------------------------T-----------------------------
¦ ¦ Стандартный образец ¦ Испытуемый препарат ¦
¦ +--------T--------T------------+-------T---------T-----------+
¦ N ¦ число ¦ число ¦ квадрат ¦ число ¦ число ¦ квадрат ¦
¦п/п¦ доз ¦ мл/кг ¦ отклонений ¦ доз ¦ мл/кг ¦отклонений ¦
¦ ¦ ¦ (Yc) ¦ _ 2 ¦ ¦ (Yи) ¦ _ 2 ¦
¦ ¦ ¦ ¦ (Yc - Yс) ¦ ¦ ¦ (Yи - Yи) ¦
+---+--------+--------+------------+-------+---------+-----------+
¦1 ¦ 16 ¦ 14,9 ¦ 0,81 ¦ 15 ¦ 13,4 ¦ 1,44 ¦
¦2 ¦ 17 ¦ 17,4 ¦ 2,56 ¦ 15 ¦ 15,0 ¦ 0,16 ¦
¦3 ¦ 16 ¦ 15,4 ¦ 0,00 ¦ 18 ¦ 16,1 ¦ 2,25 ¦
¦4 ¦ 18 ¦ 14,4 ¦ 1,96 ¦ 17 ¦ 15,3 ¦ 0,49 ¦
¦5 ¦ 15 ¦ 14,7 ¦ 1,21 ¦ 16 ¦ 14,3 ¦ 0,09 ¦
¦6 ¦ 14 ¦ 18,0 ¦ 4,84 ¦ 18 ¦ 13,5 ¦ 1,21 ¦
L---+--------+--------+------------+-------+---------+------------
Активность испытуемого препарата по отношению к стандартному
образцу:
_ _ 2 _ 2
Y = 15,8; (Yс - Yс) = 11,38; Yи = 14,6; (Yи - Yи) = 5,64;
-----------
_ / 11,38 ------
SYс = +/- /----------- = +/- / 0,379 = +/- 0,61 мл/кг;
\/ 6 x (6 - 1) \/
----------
_ / 5,64 ------
SYи = +/- /----------- = +/- / 0,188 = +/- 0,43 мл/кг;
\/ 6 x (6 - 1) \/
SYс х 100 0,61 х 100
--------- = +/- ------------ = +/- 3,8%;
_
Yс 15,8
_
SYи х 100 0,43 х 100
--------- = +/- ------------ = - 2,9%.
Yи 14,6
15,8 х 100
------------ = 108%.
14,6
Различие средних: 15,8 - 14,6 = 1,2 мл/кг.
---------------------
/ 11,38 + 5,64 12
s = +/- /-------------- х ----- = +/- 0,75 мл/кг.
d \/ 12 - 2 36
Величина t при 12 - 2 = 10 равна 2,23 [см. таблицу значений
t(Р, f); ГФ XI, вып. 1, с. 249].
Отсюда s х t = 0,75 х 2,23 = 1,67 мл/кг.
d
Как видно из полученных данных, разность средних (1,2 мл/кг)
меньше величины s х t(1,67 мл/кг), а активность испытуемого
d
препарата отличается от активности стандартного лишь на 8%.
Следовательно, испытуемый препарат по своей активности
удовлетворяет требованиям.
Определение активности испытуемого препарата в ГЕД
Для выражения активности испытуемого препарата в голубиных
единицах действия (ГЕД) расчет проводят для каждого голубя по
формуле:
К х m
А = -----
а
где К - разведение испытуемого препарата; m - масса голубя в
килограммах; а - доза разведенного препарата в миллилитрах.
Из данных, полученных в опытах, выводят среднее число ГЕД и
вычисляют в процентах отклонение отдельных опытов от среднего
числа.
Пример расчета. Определение числа ГЕД для строфантина К.
------T---------T-----------T--------T-------T-----T-------------
¦ N ¦ Масса ¦ Разведение¦ Число ¦ Доза, ¦Число¦ Отклонение ¦
¦опыта¦ голубя,¦ гликозида ¦введений¦ мл ¦ ГЕД ¦ от средней, ¦
¦ ¦ кг ¦ ¦ (доз) ¦ ¦ ¦ % ¦
+-----+---------+-----------+--------+-------+-----+-------------+
¦1 ¦ 0,335 ¦ 1:60000 ¦ 15 ¦ 4,5 ¦4467 ¦ 8,9 ¦
¦2 ¦ 0,301 ¦ 1:60000 ¦ 15 ¦ 4,5 ¦4013 ¦ 2,1 ¦
¦3 ¦ 0,335 ¦ 1:60000 ¦ 18 ¦ 5,4 ¦3722 ¦ 9,2 ¦
¦4 ¦ 0,325 ¦ 1:60000 ¦ 17 ¦ 5,1 ¦3823 ¦ 6,8 ¦
¦5 ¦ 0,332 ¦ 1:60000 ¦ 16 ¦ 4,8 ¦4150 ¦ 1,1 ¦
¦6 ¦ 0,400 ¦ 1:60000 ¦ 18 ¦ 5,4 ¦4445 ¦ 8,3 ¦
L-----+---------+-----------+--------+-------+-----+--------------
Среднее число ГЕД = 4103.
Сведения о требуемом содержании ЛЕД, КЕД и ГЕД в отдельных
препаратах и растительном сырье, а также методики их определения
приведены в соответствующих фармакопейных статьях.