Для оценки внутрилабораторной повторяемости результатов содержания белка в одной серии препарата анализировали 6 проб препарата Лапрот серии № 1. Определения проводили по процедуре, описанной в протоколе 5.
Содержание белка в одной пробе определяли по калибровочному графику стандартного раствора БСА (400 мкг/мл) спектрофотометрически, при длине волны 750 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.
Результаты.
Полученные результаты представлены в таблицах 4 и 5.
Таблица 4.
Построение калибровочного графика (р-р БСА 400 мкг/мл)
| Содержание белка в аликвоте основного р-ра, мкг | Дата | ||||||||
| Результат измерений оптической плотности | 16.05.11 | 0,110 | 0,230 | 0,340 | 0,445 | 0,540 | 0,655 | 0,760 | 0,870 |
Протокол № 6 (продолжение)
Таблица 5.
Оценка внутрилабораторной повторяемости результатов содержания белка
в 1 мг препарата Лапрот, серии № 1 (разведение в 40 раз).
| № п/п | Оптическая плотность пробы D, о.е. | Концентрация белка в препарате, мкг/мл | Содержание белка в 1 мг препарата, мкг |
| 0,135 | 124,0 | ||
| 0,140 | 128,0 | ||
| 0,139 | 125,0 | ||
| 0,138 | 125,0 | ||
| 0,137 | 124,8 | ||
| 0,137 | 124,8 | ||
| Средний результат | 125,2667 | ||
| Критерий Стьюдента | 2,57 | ||
| Средневзвешенная дисперсия | 1,930667 | ||
| Стандартное отклонение повторяемости Sr (%) | 1,389484 |
Таким образом, относительное стандартное отклонение повторяемости Sr = 1,39 < 2,0 %.
Отклонения/ примечания: нет
Заключение: относительное стандартное отклонение повторяемости Sr результатов содержания белка в 6 пробах препарата Лапрот составляет 1,39 %, что не превышает критерия приемлемости 2,0 %. Методика обладает хорошей внутрилабораторной повторяемостью.
Выполнил _________ ____________ ________ _____________ (дата) (должность) (подпись) (расшифровка подписи)
Проверил _________ ____________ ________ _____________ (дата) (должность) (подпись) (расшифровка подписи)
Протокол № 7
ОЦЕНКА МЕТОДИКИ НА ВНУТРИЛАБОРАТОРНУЮ ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
Воспроизводимость (один из показателей точности методики) – степень близости друг к другу независимых результатов, полученных в одной лаборатории:
- одним и тем же методом
- на идентичных объектах испытаний (идентичных частях пробы)
- разными операторами
- с использованием одного комплекта оборудования и средств измерений
Мерой рассеяния результатов в условиях воспроизводимости является стандартное (среднеквадратическое) отклонение воспроизводимости SR.
Объект. Методика определения белка по методу Лоури в препарате Лапрот.
Описание теста. Определяется внутрилабораторная воспроизводимость результатов содержания белка в одной серии препарата Лапрот, выполненных двумя аналитиками на разных спектрофототометрах в разные дни.
Критерий приемлемости: Cтандартное (среднеквадратическое) отклонение воспроизводимости SR ≤ 3,0 %.
Процедура. Оценка методики.
Для оценки внутрилабораторной воспроизводимости результатов содержания белка в одной серии препарата анализировали 6 проб препарата Лапрот. Двум аналитикам выдавалось по 3 идентичные пробы препарата Лапрот серии № 1.
Определения проводили по процедуре, описанной в протоколе 5.
Содержание белка в серии проб (химик 1, химик 2) определяли по калибровочным графикам стандартного раствора БСА (400 мкг/мл), воспроизводимым каждым химиком.
Результаты.
Полученные результаты представлены в таблицах 4 и 5..
Таблица 6.
Построение калибровочного графика (р-р БСА 400 мкг/мл)
Химик 1. Кузнецова С.Ю.
| Содержание белка в аликвоте основного р-ра, мкг | Дата | ||||||||
| Результат измерений оптической плотности | 17.05.11 | 0,110 | 0,250 | 0,320 | 0,445 | 0,550 | 0,660 | 0,745 | 0,875 |
Химик 2. Скворцова Е.А.
| Содержание белка в аликвоте основного р-ра, мкг | Дата | ||||||||
| Результат измерений оптической плотности | 18.05.11 | 0,140 | 0,220 | 0,370 | 0,450 | 0,575 | 0,710 | 0,775 | 0,89 0 |
Протокол № 7 (продолжение)
Таблица 7.
Оценка внутрилабораторной воспроизводимости результатов содержания белка
в 1 мг препарата Лапрот, серии № 1 (разведение в 40 раз).
| № анализа | Проба 1 | Проба 2 | Проба 3 | Среднее значение для каждого оператора |
| (D, о.е.) Содержание белка в пре парате, % | ||||
| Химик 1 Кузнецова С.Ю. | (0.145) | (0.140) | (0.135) | |
| 124,6 | ||||
| Химик 2 Скворцова Е.А. | (0.152) | (0.148) | (0.155) | |
| 125,3 | ||||
| Среднее значение двух операторов (Xij) | 124,95 | |||
| Критерий Стьюдента | 2,57 | |||
| Средневзвешенная дисперсия | 7,6 | |||
| Стандартное отклонение воспроизводимости SR | 2,75681 |
Таким образом, стандартное отклонение воспроизводимости SR = 2,76 < 3,0 %.
Отклонения/ примечания: нет
Заключение: Стандартное (среднеквадратическое) отклонение воспроизводимости SR результатов содержания белка в 6 пробах препарата Лапрот, проанализированных двумя химиками, составляет 2,76 %, что не превышает критерия приемлемости 3,0 %. Методика обладает хорошей внутрилабораторной воспроизводимостью.
Выполнил _________ ____________ ________ _____________ (дата) (должность) (подпись) (расшифровка подписи)
Проверил _________ ____________ ________ _____________ (дата) (должность) (подпись) (расшифровка подписи)
ВЫВОДЫ.
1. Валидация проведена в соответствии с требованиями МУ 3.3.2.1886-04 «Валидация методов контроля химических и физико-химических показателей качества МИБП».
2. Проведены тесты на линейность, правильность, повторяемость, воспроизводимость.
3. Результаты всех проведенных тестов удовлетворяют критериям приемлемости, описанных в соответствующих в протоколах.