Сургутский государственный университет

Сургутский государственный университет

Частная вирусология

Методические указания

Сургут

Издательство СурГУ

 

 

Содержание

Занятие 1. Методы микробиологической диагностики вирусных

инфекций. Микробиологическая диагностика

возбудителей респираторных вирусных инфекций

(грипп, парагрипп, аденовирусная инфек­ция,

РС-инфекция, короновирусы, риновирусы)………….. 4

Занятие 2. Микробиологическая диагностика вирусных

инфекций поражений кожи, слизистых оболочек,

лимфоидной и железистой ткани (корь, краснуха,

паротит, герпесвирусы, цитомегаловирус,

натуральная оспа, ветряная оспа).…………………….10

Занятие 3. Микробиологическая диагностика возбудителей

вирусных кишечных инфекций и вирусного гепатита

(энтеровирусы, вирусы гепатитов A,B,C,D,E,G,

ротавирусы, калициновирусы)……………………….. 12

Занятие 4. Микробиологическая диагностика вирусных

инфекций нервной системы (вирусы полиомиелита,

Коксаки, ЕСНО, бешенства). Вирусы природно-

-очаговых инфекций (арбовирусы)…………………… 14

 

Занятие 5. Микробиологическая диагностика инфекций,

вызванных онкогенными вирусами и вирусами

иммунодефицита человека (ретровирусы,

паповавирусы). Медленные вирусные инфекции.

Прионы……………………………………………………. 16

 

Занятие 6. Итоговое занятие по разделу “Частная вирусология“….17

 

Занятие 1

Тема. Методы микробиологической диагностики вирусных инфекций.Микробиологическая диагностика возбудителей респираторных вирусных инфекций(грипп, парагрипп, аденовирусная инфек­ция, РС-инфекция).

 

Цель. Освоить принципы микробиологической диагностики респираторных вирусных инфек­ций, используя методы индикации вирусов в патологическом материале и ан­тител в сыворотках больного.

Студент должен знать.

1. таксономическое положение, классификацию и биологические свойства вирусов - возбудителей ОРВИ.

2. методы лабораторной диагностики респираторных вирусных инфекций.

3. Препараты для специфической профилактики и лечения гриппа и других вирусных респираторных инфекций.

Студент должен уметь.

1. Произвести забор материала от больного респираторной вирусной инфекци­ей (носоглоточный смыв, мазок-отпечаток).

2. Приготовить мазок-препарат для экспресс-диагностики.

3. Микроскопировать в люминесцентном микроскопе.

4. Поставить РТА с целью индикации вируса.

5. Поставить РТГА с целью обнаружения антител в парных сыворотках больного.

6. Учесть результаты РСК с аденовирусньм диагностикумом.

7. Заразить куриный эмбрион в аллантоисную полость.

8. Заразить мышей вируссодержащим материалом интраназально.

9. Заразить первичнотрипсинизированные и перевиваемые культуры клеток.

10. Микроскопировагь препараты с целью обнаружения в пораженныех тка­нях внутриклеточных включений и изменений в культуре клеток, обу­словленных цитопатическим действием вируса.

 

Вопросы для проверки исходного уровня знаний по

Общей вирусологии

1. Современная классификация вирусов.

2. Морфология вирусов.

3. Этапы взаимодействия вирусов с чувствительной клеткой.

4. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций:

а) экспресс-методы (иммунофлуюресцентный и др.);

б) вирусологический;

в) серологический;

г) морфологический.

5. Методы культивирования вирусов:

а) в куриных эмбрионах;

б) в культуре клеток;

в) в организме лабораторных животных.

6. Виды тканевых культур и основные этапыих получения.

7. Методы индикаций вирусов в культуре клеток, в организме животного и курином эмбрионе.

8. Серологические реакции, методы их постановки, цель приме­нения в вирусологии:

а) реакция торможения гемагглютинации - РТГА;

б) реакция биологической нейтрализации - РБН;

в) реакция связывания комплемента – РСК;

г) реакция непрямой гемагглютинации - РНГА;

д) иммуноферментный метод;

е) радиоиммунный метод;

ж) иммунофлюоресцентный метод.

9. Современные методы диагностики вирусных инфекций с применением методов ДНК-ДНК (РНК-РНК)-гибридизаиии.

10. Особенности противовирусного иммунитета.

 

Основные вопросы занятия.

1. Грипп. Этиология, эпидемиология, патогенез, лабораторная диагностика, профилактика и терапия.

2. Аденовирусные инфекции. Этиология, эпидемиология, патогенез, лабораторная диагностика, профилактика и терапия.

3. Риновирусные инфекции. Этиология, эпидемиология, па­тогенез, лабораторная диагностика, профилактика и терапия.

Самостоятельная работа студентов.

Задание 1

1. Стерильным ватным тампоном забрать друг и друга отделяемое слизистой носа и зева. Тампоны помещают в пробирки, содержащие 3-5 мл раствора Хенкса (или мясо-пептонного бульона с 10% нормальной сыворотки, или стерильного физиологического раствора).

2. Заразить смывом из зева куриные эмбрионы в аллантоис, амнион, на хорионаллантоисную оболочку и в желточный мешок.

3. Студентам предлагается заразить мышей смывомиз носоглотки интраназально.

4. Учесть результаты, обсудить и прокомментировать различные варианты от­ветов по результатам РСК с аденовирусным диагностикумом. Сделать за­ключение по серодиагностике аденовирусных инфекций (демонстрация).

5. Поставить РТГА (по схеме) с целью обнаружения вируса гриппа и определе­ния титра вирусных ГА.

Разведение вирус содержащей жидко­сти	Неразведенная жидкость	1:2	1:4	1:8	1:16	Кон­троль
I. Вируссодержащая жидкость	0,5	0,5
2. Физиологический раствор		0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
3. 1% Суспензия эритроцитов	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5

 

Результат учитывается через 30 минут при комнатной температуре.

6. Поставить РТГА (по схеме) с целью типирования выделенного вирусаи оце­нить результат.

№	Ингредиенты
1:10	1:20	1:40	1:80	1:160	К	К
	Физиологический раствор		0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25
	Сыворотка 1:10	0,25	0,25				0,25
	Вирус 4АЕ	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25		0,25
	40-60 минут при комнатной температуре
	1% взвесь эритро­цитов	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5

 

(-) - отсутствие гемагглютинации. Сделать заключение по серодиагностике гриппа (демонстрация PITA). Учесть ре­зультаты, оценить, обсудить и прокомментировать различные варианты ответов по результатам РТГА, поставленной с гриппозным диагностикумом.

Задание 2

Провести вирусологическое исследование при аде­новирусных инфекциях.

Методика 1. Выделение вируса в культуре клеток.

Исследуемый материал в различных разведениях (1:10, 1:100, 1:1000) в объеме 0,1—0,2 мл вносят в пробирки с куль­турой клеток (можно использовать как перевиваемые, так и неперевиваемые линии). В течение 7 дней наблюдают появле­ние цитопатического действия.

 

Методика 2. Идентификация вируса в реакции нейтрализации.

Вирус в рабочей дозе смешивается с соответствующей иммунной, диа­гностической сывороткой. Эта смесь инкубируется 1 - 1,5 ча­са при температуре 37 °С, затем помещается в культуру кле­ток. Учет реакции проводят по отсутствию цитопатического действия в культуре клеток, при наличии его в контроле.

 

Задание 3

Изучить препараты для специфической профилак­тики и диагностики респираторных вирусных инфекций.

 

Методика

Изучите аннотации к препаратам, рассмотрите препараты, определите различия специфических профилактических и диагностических препаратов. Запишите в форме протокола.

 

Протокол исследования

 

Название препарата	Состав	Показание к применению	В каком методе лабораторного исследования используется и на каком этапе?	Какой вид иммуни­тета (по происхож­дению) создается в организме?