Работа с вирусом натуральной оспы проводится в строго режимных условиях по правилам, предусмотренным для работы с особо опасными инфекциями. Материалом для исследования служит содержимое элементов сыпи на коже и слизистых, отделяемое носоглотки, кровь, ну а если пациенту совсем не повезло, то у трупа забирают кусочки органов, кожи и кровь.
Наиболее эффективным и быстрым методом обнаружения вируса является непосредственная электронная микроскопия материала из элементов сыпи (до стадии пустулы, ибо после нее количество вирусных частиц в коже резко уменьшается). При отсутствии сложного оборудования (все-таки электронный микроскоп - довольно громоздкая вещь и имеется не во всех лабораториях), исследуя тот же материал, можно с помощью светового микроскопа обнаружить тельца Гварниери ("фабрики" оспенного вируса выглядят как овальные тельца, окрашивающиеся кислыми красителями, и располагаются вблизи ядра пораженной клетки).
Также к экспресс-диагностике относится обнаружение с помощью непрямой иммунофлуоресценции (ИФ) специфического вирусного антигена в мазках-отпечатках из элементов сыпи и отделяемого носоглотки. Этот метод позволяет идентифицировать практически любой известный науке микроорганизм, если в распоряжении исследователей имеется специфическая сыворотка, полученная гипериммунизацией лабораторных животных и содержащая антитела против конкретного возбудителя. Такая сыворотка может быть помечена особой меткой, светящейся при ультрафиолетовом (УФ) облучении. Во время обработки взятого у заболевшего человека образца происходит взаимодействие антигенов вируса и антител сыворотки, а при просмотре мазка в ультрафиолете можно наблюдать свечение метки на месте вируса. Это прямая ИФ (иммунофлуоресценция). Специфическая сыворотка может быть не помеченной, но тогда необходим еще один этап - обработка полученного "бутерброда" (вирусного антигена и антител сыворотки) еще одной антисывороткой (содержит меченые светящейся меткой антитела против антивирусных антител). Получается теперь уже трехслойная конструкция, светящаяся в УФ.
Антигены в исследуемом материале также можно обнаружить с помощью других серологических реакций: реакции связывания комплемента, иммунодиффузии и ИФА.
Для более подробных исследований конкретного штамма, вызвавшего заболевание, используется вирусологический метод - выделение вируса из пораженного материала и его идентификация. Выделение вируса осуществляется после размножения в курином эмбрионе (как уже упоминалось, там вирус оспы образует белые бляшки), а также в культурах клеток (наблюдается выраженный цитопатический эффект). Для дальнейшей идентификации используют серологические реакции.
Уже после первой недели заболевания в крови обнаруживаются специфические вируснейтрализующие антитела, комплементсвязывающие антитела, и гемагглютинины. Наличие комплементсвязывающих антител наиболее информативно, поскольку достоверно свидетельствует о перенесенном заболевании. У вакцинированных эти антитела редко сохраняются дольше 12 месяцев.
Прививка и лечение
Впервые, как это уже было упомянуто, вакцину против оспы изобрел Э. Дженнер, и это была первая вакцина, разработанная людьми. Гораздо позже, почти через век, Л. Пастер более широко подошел к этому вопросу и разработал вакцины против других болезней.
Но, еще задолго до Дженнера в древней Греции и на Востоке пытались предотвращать развитие оспы. Уже было известно, что переболевшие оспой повторно ею не заражаются и не заболевают. Практиковалось специальное заражение здоровых людей оспенными частицами от выздоравливающих больных. Таким образом, люди переносили специально вызванную, ослабленную форму оспы, и не заболевали при эпидемии. Такое заражение называлось "вариоляция" (от латинского названия оспы) и было достаточно распространенным. Например, Наполеон заставлял таким образом предохранять своих солдат от оспы. В Европу эту методику привезла жена английского посла в Константинополе Мэри Ворлей Монтегю. У нас в России матушка-просветительница Екатерина II также решила защитить весь свой двор и приближенных, а более всего, наследника престола Павла Петровича от смертельного недуга с помощью вариоляции. Для этого она велела привить оспу сначала себе, а потом предоставила собственный материал для прививки всего двора. Эксперимент, к счастью, удался (а надо заметить, что процедура была весьма небезопасна, были известны случаи эпидемий, начавшихся с вариоляции). Екатерина и наследник выздоровели, двор также оказался привитым, и страх перед эпидемией пошел на убыль. Даже были отчеканены медали, на которых изображалась императрица, защищающая Россию от оспы - в аллегорической форме, как было принято в этом славном столетии.
Так вот, вернемся к Дженнеру. Он был сельским врачом в Англии и практиковал процедуру вариоляции с переменным успехом. Именно он первым обратил внимание на народное наблюдение о том, что люди, переболевшие коровьей оспой (молочницы, пастухи и прочий контингент, общающийся со скотиной), никогда не заболевали натуральной оспой. Был он человеком дотошным и данные собирал ни много, ни мало 10 лет. После столь тщательно проведенного анализа, был сделан вывод о справедливости народного наблюдения, и началась подготовка к его практическому применению. Этот исторический эксперимент проводился на маленьком мальчике. Ему Дженнер привил коровью оспу и наблюдал все признаки этого заболевания - легкую лихорадку, недомогание и образование сыпи на руках. Через некоторое время врач должен был заразить мальчика натуральной оспой, в общем, то это была все та же вариоляция, с одним единственным НО. У мальчика, по идее Дженнера, не должен был проявиться ни один из признаков оспы, которые проявлялись у не привитых людей. Эксперимент прошел успешно и Дженнер обнародовал свое изобретение. Назвал он такую процедуру по аналогии с вариоляцией - вакцинация (от вакка - корова), т.е. прививка коровьей оспы. Позднее, Пастер в честь Дженнера назвал вакцинацией любую прививку, не только против оспы. Вакцинация вирусом коровьей оспы надежно предохраняла людей от заболевания натуральной оспой, и именно благодаря этому изобретению удалось сначала эффективно уменьшить число болеющих, а потом и вовсе ликвидировать это заболевание.
Да, да, для прививок использовалась живая оспенная вакцина Дженнера, которую готовили накожным заражением телят или куриных эмбрионов вирусом осповакцины (не вирус натуральной оспы - ВНО). Именно ею в массовом порядке привили практически все население земного шара, и эта процедура создала достаточный коллективный иммунитет против натуральной оспы, что позволило говорить о ликвидации заболевания. Вакцина вводилась накожно или перорально (таблетки). После вакцинации создавался прочный иммунитет, календарь вакцинации включал несколько прививок. Для профилактики и лечения осложнений, возникавших при вакцинации, применяли донорский иммуноглобулин, приготовленный из гамма-глобулиновой фракции крови доноров, специально ревакцинированных против оспы.
Для лечения натуральной оспы, помимо симптоматической терапии, облегчающей страдания больного, применяют химиопрепарат метисазон (марборан). Он подавляет репродукцию вируса внутри клеток, особенно хорош при применении на ранних стадиях заболевания и в инкубационном периоде.
Резюме
Почему применение оспы в качестве бактериологического оружия вызывает такой страх? Кто будет под угрозой? На эти вопросы можно ответить следующим образом.
Оспа обладает большим разрушительным потенциалом, чем даже сибирская язва. Передается воздушно-капельным путем, позволяющим охватить максимальное число людей за одну атаку. Это раз. Вирус стоек во внешней среде. Это два. Поскольку поголовное противооспенное прививание было отменено в 1980 г. (по рекомендации все той же ВОЗ), привитые люди к настоящему моменту практически потеряли иммунитет, а люди, родившиеся после 80 г. им и не обладают вовсе (а это половина населения России, например). Это три. Как сказал недавно директор ГНЦ вирусологии и биотехнологии "Вектор" академик РАН Лев Сандахчиев, - сейчас наука знает о вирусе натуральной оспы меньше чем о вирусе СПИДа или лихорадки Эбола. Исследования были свернуты, вакцины устарели, а новые создавать и исследовать уже некогда. Это четыре. Неудивительно, ведь прошло более 20 лет, и за это время биология сделала огромный шаг вперед. Появились новые методы, в частности в генетике, теперь мы можем изучить этот вирус гораздо подробнее. Только будет ли у нас на это время?
По крайней мере, старая вакцина - это все, что есть на данный момент. Она всесторонне изучена в плане осложнений и последствий, хотя эффективность ее применения вызывает определенные сомнения. Во-первых, она совершенно не применима для людей, страдающих иммунодефицитами, а их количество значительно увеличилось за последние 20 лет. С этой проблемой представители ВОЗ столкнулись уже давно при попытках вакцинировать против оспы население Африки. Не удалось - очень много больных СПИД. Второе очень важное возражение - вряд ли террористы воспользуются дикими штаммами оспы. Более вероятно, они применят генетически модифицированные варианты, сочетающие в себе гораздо большую разрушительную силу с полным презрением к иммунитету, создаваемому при помощи вируса осповакцины.
В-третьих, что называется на закуску, могу предложить еще одну, не очень приятную новость. Вирус натуральной оспы человека в природе существует не один, а с многочисленными родственниками, которые вовсе не прочь расширить свою экологическую нишу за счет такого многочисленного хозяина как человек. Известен тот факт, что вирус оспы обезьян уже способен не только передаваться от животного к человеку и вызывать заболевание, сходное с легкой формой натуральной оспы, но также способен передаваться от человека к человеку воздушно-капельным путем (вспышка в Заире в 1996 г., 800 человек). Вакантное место пытается занять родственник? Многие болезни достались людям в наследство от животных (вспомним одну из гипотез происхождения ВИЧ). А если с помощью генетических рекомбинаций природа создаст еще более смертоносный вариант оспы? Против обезьяньей оспы помогает стандартная вакцина, но где гарантия, что против "новичка" она сработает?
Будем надеяться, что нам не придется на себе испытывать последствия биологической атаки террористов. Или же ученые создадут модифицированную, более совершенную вакцину, не вызывающую осложнений. Вовремя создадут. Но так, на всякий случай, если введут массовое оспопрививание, посетите пункт прививок. Возможно, что это поможет Вам спастись.
Список использованной литературы:
1. А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. "Медицинская микробиология, иммунология и вирусология": - С.-Петербург, Спец-лит, 2000г., с.239-318.
2. А.А. Воробьев, А.С. Быков, Е.П. Пеликов, А.М. Рыбакова. "Микробиология": - М. "Медицина", 1998г., стр.255-258.