Материал – фекалия
Первичная микроскопия не проводится.
1 Посев фекалий производят на ДДС для энтеробактерий (среда Эндо) и в среду обогащения (селенитовый бульон).
Среда Эндо состоит из мясопептонной основы, индикатора и лактозы. При учете роста на среде Эндо определяют отношение выделенной культуры к лактозе, что позволяет отобрать на среде для первичного посева подозрительные колонии, подлежащие дальнейшей идентификации. Бесцветные (лактозонегативные) колонии на дифференциально-диагностических средах образуют представители родов Shigella или Salmonella, а окрашенные (лактозопозитивные) колонии принадлежат Escherichia coli или представителям других родов условно-патогенных энтеробактерий.
В случае выделения из фекалий только лактозопозитивной культуры необходимо определить относится ли она к диареегенным E.coli. Для этого ставят реакцию агглютинации с поливалентной агглютинирующей эшерихиозной сывороткой ОКА, содержащей антитела к патогенным серогруппам кишечных палочек, и культурами из нескольких колоний.
Если при посеве фекалий на Эндо выросли lac+ и lac- колонии, то дальнейшему исследованию подвергают lac- колонии.
Принадлежность к группе по Берджи определяют по следующим критериям:
- Палочки;
- Спор не образуют;
- Грам-;
- Факультативные анаэробы.
Дифференциацию семейства Enterobacteriacae от других семейств, входящих в одну группу по Берджи, проводят по тестам, в результате которых все энтеробактерии:
- Ферментируют глюкозу до К или КГ;
- Редуцируют нитраты в нитриты;
- Оксидазоотрицательны;
- Каталазоположительны;
- Ферментируют углеводы по ферментативному типу (OF-тест +/+).
Проба на каталазу. Тест основан на способности микроорганизмов, обладающих этим ферментом, расщеплять перекись водорода с образованием кислорода и воды. Для постановки теста чистую культуру микроорганизма помещают с помощью стеклянной палочки в каплю 3 – 10% раствора перекиси водорода на предметном стекле и растирают круговыми движениями. В положительном случае наблюдается выделение пузырьков газа.
Редукция нитратов. Под восстановлением подразумевают способность бактерий редуцировать соли азотной кислоты в соли азотистой кислоты с выделением аммиака или свободного азота и других продуктов. Процесс этот осуществляется энтеробактериями с помощью фермента нитратредуктазы. Наличие нитратредуктазы устанавливают определением с помощью тест-реактива одного из продуктов расщепления нитратов – нитритов. Их определяют по красному окрашиванию среды после добавления тест-реактива, содержащего а-нафтиламин.
Методы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний
1. Микроскопия
Цель: обнаружение в исследуемом материале соответствующих бактерий.
Самостоятельное значение этот метод имеет для диагностики легочного туберкулеза, острой гонореи и первичного сифилиса, в остальных случаях – это этап бактериологического исследования.
2. Бактериологическое исследование – ≪золотой стандарт≫.
Цель: выделение чистой культуры возбудителя и определение ее вида.
Все остальные методы МБД являются косвенными.
3. Серодиагностика
Цель: обнаружение инфекционных антител в сыворотке больного
4. Иммуноиндикация
Цель: обнаружение в патологическом материале антигенов возбудителя.
Недостатком этого метода является то, что в материале необязательно будут содержаться
Живые бактерии.
5. Молекулярно-генетические методы (ПЦР)
Цель: обнаружение в исследуемом материале (или в чистой культуре бактерий)
нуклеотидных последовательностей, отвечающих либо за видовую принадлежность
возбудителя, либо за продукцию основного фактора вирулентности.
6. Аллергические диагностические пробы
Цель: выявление состояния инфекционной аллергии. Эти пробы используются для
диагностики инфекционных заболеваний, при которых развивается инфекционная
аллергия (бруцеллез, туляремия, туберкулез)
Схема изучения возбудителя в курсе частной микробиологии
1. Таксономическое положение возбудителя
2. Биологические свойства:
- морфологические
- тинкториальные
- культуральные
- биохимические
- антигенные
3. Факторы вирулентности
4. Эпидемиология, патогенез и клиника
5. Микробиологическая диагностика (из всех перечисленных методов надо выбрать те, которые применяют для диагностики данного заболевания)
6. Специфическая профилактика
7. Этиотропная терапия