Вполне вероятно, что энергетический метаболизм bradyzoites отличается от таковых тахизоитов, учитывая расположение bradyzoites в толстостенной вакуоли и их медленный темп роста. Необычная и необъяснимая особенность Т. гондии дифференциального-ции является наличием стадии конкретных различий в активности и изоформ нескольких гликолитических ферментов. Известно, что тахизоиты использовать гликолитический путь, с лактатом в качестве основного источника энергии. Функциональный Мито-chondria с ЦТК существует в тахизоитах, и, как полагает, внести свой вклад в производство энергии. В то время как оба тахизоиты и bradyzoites использовать гликолитический путь для получения энергии, данные свидетельствуют о том, что bradyzoites лишены функциональный цикл TCA и дыхательную цепи (Дентон и др., 1996).
В целом, регулирование и активация glycoly-лиза, как представляется, отличаются Т. гондий, чем во многих других эукариот (Дентон и соавт, 1996;.. Саито и др., 2002; Маеда и соавт, 2003). Лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и пирувата киназа в bradyzoites выше, чем в тахизоитах, в то время как PPя-phos-phofructokinase активность в тахизоитах выше, чем в bradyzoites (Дентон и др., 1996). Эти данные свидетельствуют о том, что брадизоитных энергетическом обмене могут
зависеть от катаболизма амилопектина (который присутствует в bradyzoites и, по существу отсутствует в тахизоитах) до лактата. В брадизоитный конкретных гликолитических изоферментов устойчивы к воздействию кислых рН, предполагая, что bradyzoites устойчивы к закислению в результате сбора нефти Тион из гликолитических продуктов амилопектина катаболизма до лактата.
Лактатдегидрогеназа 2 (LDH2) является 35-кДом цито-плазменным антигеном с PI 7,0, что выражается в bradyzoites, но не в тахизоитах (Yang и Parmley, 1995, 1997). Его выражение, как представляется, транскрипционно регулируется, так как LDH2 мРНК обнаруживается с помощью RT-PCR только в bradyzoites. Тахизоят изоформы, LDH1, также были клонированы. LDH1 и LDH2 являются 71,4 процента идентичны. ЛДГ деятельность тахизоит и брадизоитные экстракты различна; Однако, нет сущест-косяка различия в активности рекомбинантных ферментов деятельности LDH1 или LDH2 (Yang и Parmley, 1995, 1997). Несмотря на кажущуюся стадии специфичности, попытки сорвать LDH2 потерпели неудачу (Singh и др., 2002); Однако, нокдаун LDH2 был достигнут с использованием дцРНКа (Al-Anouti и др., 2004). Когда выражение LDH2 было подавлено,
Два этапа конкретных enolases также были клонированы и охарактеризованы, в соответствии с гипотезой, что использование гликолитического пути отличается по сравнению с тахизоитами bradyzoites. Енолаза катализирует превращение 2-phosphoglyc-кции в фосфоенолпируват (Manger и др, 1998а;. Yahiaoui и др., 1999). В дрожжах, енолаза известно, что белок стресс-ответ, т.е. hsp48 (Иида и Яхара, 1985). ENO2, форма тахизоит, имеет в три раза более высокую удельную активность, чем ENO1, то брадизоитный фермент, но оба имеют сходные константы Михаэлиса (Kм) (Dzierszinski и др., 2001). Удивительно, но поликлональные антисыворотки к каждой изоформы не перекрестно реагируют несмотря на сходство этих двух изоформ (Dzierszinski и др., 1999, 2001). Обе изоформы обнаружены локализуются в ядро в делящихся клетках, но в конце bradyzoites, которые в состоянии покоя, ENO1 является цитоплазматическим (Фергюсон и Parmley, 2002; Фергюсон и др., 2002).
358 РАЗВИТИЕ брадизоитного
Значение этих наблюдений неизвестно, но вполне возможно, что некоторые ферменты гликолиза могут иметь дополнительные регуляторные функции, которые еще не полностью изучены.
Очевидная разница между тахизоитами и bradyzoites является наличием цитозольных гранул амилопектина, которые состоят из глюкозы поли-меров (Guerardel и др., 2005). Структурные исследования амилопектина показали, что это будет растение, как амилопектина с преобладанием (α1-4) связи, который является наиболее близким к полукристаллическому floridean крахмалу, накопленному красными водорослями (Коппины и др., 2005). Амилопектина гранулы исчезают из bradyzoites, когда они превращаются в тахизоитов во время культивирования клеток (Коппины и др., 2003). В то время как не видели в тахизоитах, амилопектин присутствует в половом цикле в кишечнике кошки в макрогаметах, сохраняется во время формирования ооциста, и присутствует в спорозоитах. Мерозоиты отсутствие амилопектина. Амилопектин, как полагает, является carboyhydrate магазин для брадизоитного или спорозоитов в течение длительных периодов неподвижности и питательной депривации. Гены-кандидаты для ферментов, участвующих в расщеплении амилопектина и синтеза были идентифицированы (Коппин и др., 2003).
A брадизоитный специфичные Р-тип АТФаза, чей мРНК и белки преимущественно выражены в bradyzoites также были охарактеризован и местным izes в точечном рисунке в области плазматической мембраны (Holpert и др., 2001). Второй тип Р-АТФаза может также быть преимущественно выражен в bradyzoites, судя по RT-PCR стационарного мРНКа, хотя мРНК может быть также обнаружен в тахизоитах. TgSRCAP (SNF2 связанных с ОШП активатор протеина) является SWI2 / SNF2, экспрессия которого возрастает в ходе развития кист (Nallani и Sullivan, 2005). Этот белок, дрожжевые два гибридных исследования, также связывается с несколькими метаболических ферментами (Nallani и Салливан, 2005), что еще больше подчеркивает, что регулирование обмена веществ, которое, вероятно, отличается в тахизоитах и bradyzoites.
Не известно ли метаболические изменения между bradyzoites и тахизоитами вызывают отличаются-entiation, или являются следствием процесса отличительного-ции. Одна гипотеза состоит в том, что контроль за недостатка питательных веществ, тип ответа на стресс, может служить в качестве датчика для дифференциации в Т. гондий.
Следует отметить, однако, что никаких датчиков, которые реагируют на любое изменение окружающей среды до сих пор не определены в Т. гондиях.