Определение группы крови системы АВО с помощью монокло-нальных антител анти-А и анти-В (целиклоны анти-А и анти-В).

Целиклоны анти-А и анти-В применяются для определения группы крови человека системы АБО взамен стандартных изогемагглютинирующих сывороток путем выявления антигенов А и В в эри­троцитах стандартными антителами, содержащимися в целиклонах:

Моноклональные антитела анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами, полученными в результате слияния мышиных антител ообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Названные целиклоны представляют разведен­ную асцитическую жидкость мышей — носителей гибридомы, со­держащую иммуноглобулин М против антигенов А и В. Целиклоны дают более быструю и более выраженную реакцию агглютина ции, чем стандартные АВО-сыворотки. При использовании целиклонов исключается передача вируса гепатита и ВИЧ.

Определяют группу крови при температуре от 15 до 25°С. На фарфоровую пластину или маркированную тарелку наносят по одной большой капле целиклонов анти-А и анти-В, рядом наносят каплю исследуемой крови в 10 раз меньшего размера и смешивают отдельными палочками или уголками предметных стекол. Пластин­ку слегка покачивают и наблюдают за реакцией в течение 2,5 мин. Реакция обычно наступает в первые 3—5 с и. проявляется обра­зованием мелких красных агрегатов, а затем хлопьев. Возможны следующие варианты реакции агглютинации.

1. Агглютинация отсутствует с целиклонами анти-А и анти-В — кровь не содержит агглютиногенов А и В — исследуемая кровь группы 1(0).

2. Агглютинация наблюдается с целиклонами анти-А, эритро­циты исследуемой крови содержат агглютиноген А— исследуемая кровь группы II (А).

3. Агглютинация наблюдается с целиклоном анти-В. Эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В — исследуемая кровь группы III(В).

Агглютинация наблюдается с целиклонами анти-А и анти-В. Эритроциты содержат агглютиногены А и В — исследуемая кровь группы IV (АВ)

 

Реакция агглютинации	Группа исследуемой крови
Целиклон анти-А	Целиклон анти-В
1- 2+ 3- 4+	- - + +	I(0) II (А) III(В) IV(АВ)

 

Методы определения Rh-фактора.

 

Для определения резус фактора предложено несколько методик:

реакция аглютинации в солевой среде

реакция конглютинации с применением конглютининов (альбумин, желатин, поливинилпирролидон, полиглюкин)

реакция с применением протеолитических ферментов (трипсин, папаин, пролетин. фицин, бромелин).

На практике чаще всего применяют следующие методики: конглютинация с желатиной, реакция конглютинации в сывороточной среде на чашках Петри, экспресс методы.

 

Желатиновый метод. В центрифужные пробирки, которые соответственно маркируют, наливают по 1 капле 10% раствора желатины и по 1 капле антирезусной сыворотки (двух серий). После встряхивания пробирки помещают в водяную баню при температуре 46-48^оС на 5 минут. Затем добавляют 5-8мл. теплого изотонического раствора хлористого натрия. Пробирки 2-3 раза переворачивают и учитывают результат реакции по наличию аглютинатов, видимых невооруженным глазом.

Определение резус фактора на чашках Петри. Это определение основано на использование 50% взвеси эритроцитов в собственной сыворотке. Взвесь эритроцитов и сыворотку анти-резус наносят на чашку Петри, которую затем помещают на 10 мин. в водяную баню при температуре 45-48^оС. После этого чашку покачивают и учитывают результат.

Экспресс-метод определения резус фактора. Исследование проводят одновременно с определением группы крови. К антирезусным сывороткам добавляют исследуемую кровь в соотношении 1/2 и перемешивают, через 3-5 мин. добавляют 1 каплю физраствора и учитывают реакцию.

6. ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ:

6.1. В начале занятия преподаватель уделяет время организационным вопросам, отмечает в журнале присутствующих студентов, указывает на необходимость соблюдения учебной дисциплины, бережного отношения к имуществу кафедры; знакомит с общим планом практического занятия. Проводится мотивация, разъясняется важность темы для студентов, ее прикладное значение.

6.2. Вопросы контроля исходного уровня знаний.

6.3. Преподаватель выясняет уровень подготовки к занятию каждого студента путем его опроса и оценки ответов по пятибальной системе.

6.4. В процессе обсуждения преподаватель выясняет сложные вопросы, требующие совместного разбора и уточнения.

6.5. Студенты переходят к практической части занятия.

6.6. Проводится заключительный контроль знаний студентов устно или путем решения тестовых задач, рейтинговая оценка.

7. СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ И ВОПРОСЫ:

В хирургическое отделение поступил больной с яз­венной болезнью двенадцатиперстной кишки, ослож­ненной кровотечением. Дефицит ОЦК составляет 35%. В целях восполнения кровопотери показано экстренное переливание крови.

'Там, где речь идет о переливании крови, имеется в виду и эритроцитарной массы (взвеси).

Какой необходимый минимум лабораторных иссле­дований (проб) следует произвести, без которых гемо-трансфузия недопустима?

Под наблюдением врача в процедурном кабинете две медсестры определяют групповую принадлежность кро­ви четырех больных. Для этого они под соответствую­щими обозначениями на лакированные белые фаянсо­вые пластины нанесли стандартные сыворотки двух се­рий. Исследуемую кровь тщательно перемешали с кап­лями стандартных сывороток. Пластины покачали, ос­тавили в покое на 1—2 мин и потом снова покачали. Не ранее чем через 3 мин после смешивания капель крови и сыворотки в капли, где наступила агглютинация эрит­роцитов, внесли по капле изотонического раствора на­трия хлорида. Спустя 5 мин от начала исследования врач оценил полученные результаты и зафиксировал их в историях болезней.

На что не обратил внимания врач, нарушив тем са­мым требования "Инструкции по определению групп крови АВО"?

В целях быстрого восполнения кровопотери больно­му перелито 1000 мл одногруппной резус-совместимой донорской крови, консервированной натрия цитратом. К концу гемотрансфузии у больного появились беспо­койство, бледность кожных покровов, тахикардия, судо­роги мышц.

Какое осложнение возникло у больного? В чем за­ключается его профилактика? Какие необходимы ле­чебные мероприятия?

Больному перед гемотрансфузией лечащий врач на­чал проводить биологическую пробу на совместимость.

Кровь, взятая из холодильника, в течение 30—40 мин была выдержана при комнатной температуре. По пред­варительным исследованиям она совместима по АВО-системе и резус-фактору.

Внутривенно струйно по 15 мл с интервалом 3 мин введено 45 мл донорской крови. При введении послед­ней порции у больного появились тошнота, озноб, боли в пояснице, за грудиной, головокружение, пульс и ды­хание участились, снизилось артериальное давление.

Что случилось? Соблюдена ли техника постановки биологической пробы? Ваши действия?

Больной с массивным скрытым внутренним кровоте­чением по экстренным показаниям взят в операцион­ную. Под интубационным наркозом начато оперативное вмешательство, направленное на окончательную остановку кровотечения. В целях восполнения кровопотери во время операции возникла необходимость в переливании крови.

Как провести биологическую пробу на совместимость больному, находящемуся под наркозом?

Больной К., 27 лет, доставлен с ножевым ранением живота спустя 4 ч с момента травмы. Состояние крайне тяжелое. Пульс нитевидный, 120 ударов в минуту. Арте­риальное давление — 70/40 мм рт.ст. Произведена экс­тренная лапаротомия. В брюшной полости много жид­кой крови и сгустков. По мере аспирации крови уста­новлен источник кровотечения: сосуды брыжейки тон­кой кишки. Произведен гемостаз. Повреждений полых органов не установлено.

Как поступить с собранной кровью?

В отделение поступил больной с хроническим крово­точащим геморроем, выраженной анемией. Пульс —

80 ударов в минуту. Артериальное давление 120/70 мм рт.ст. Гемоглобин — 60 г/л. В целях восполнения дефи­цита красных клеток в предоперационном периоде больному перелито 360 мл одногруппной резус-совмес­тимой эритроцитарной массы.

Как оформляется документация на проведенную ге-мотрансфузию?

Больная И., 31 год, группа крови 0(1), находилась в районной больнице по поводу неполного позднего вы­кидыша (беременность 26—27 недель), постгеморраги­ческой анемии и септицемии. Произведено выскабли­вание полости матки. Ошибочно начато переливание крови группы В(1П). После введения 100 мл крови поя­вились боль в пояснице и озноб. Трансфузия прекраще­на. Через 15 мин состояние больной резко ухудшилось:

появились адинамия, резкая бледность кожных покро­вов, акроцианоз, обильный пот, потрясающий озноб. Пульс — 96 ударов в минуту, слабого наполнения. Арте­риальное давление — 75/40 мм рт.ст.

Какое осложнение возникло у больной? Какие ле­чебные мероприятия следует проводить?

В хирургическое отделение поступила больная с профузным желудочно-кишечным кровотечением. В те­чение ряда лет она страдает язвенной болезнью двена­дцатиперстной кишки и гипертонической болезнью III стадии. Рабочее давление 190/100 мм рт.ст. На момент поступления дефицит ОЦК составляет более 30%.

Можно ли больной переливать кровь?

Больной С., 43 лет, по поводу неполного выкидыша произведено выскабливание полости матки. Одновре­менно в целях купирования анемии внутривенно пере­лито 300 мл крови группы В (III), тогда как у нее была

определена кровь группы AB(IV). Через сутки обнару­жена олигурия; выделенная моча имела бурую окраску, содержала 1,5% белка и единичные форменные элемен­ты. Мочевина крови — 27 ммоль/л. Гемоглобин — 56 г/л. Состояние больной тяжелое, она сонлива, ади-намична, кожные покровы бледные. Жалуется на тош­ноту, рвоту. От больной исходит уринозный запах. Пульс — 84 удара в минуту. Артериальное давление — 140/85 мм рт.ст. Симптом Пастернацкого слабоположи­тельный с обеих сторон. При контрольной перепровер­ке у больной оказалась группа крови 0(1).

Какое осложнение развилось у больной? Ваши дей­ствия?

Ответы на задачи

Для исключения возможных посттрансфузионных осложнений, вызываемых антигенной несовместимостью крови донора и реципиента, перед гемотрансфузи-ей необходимо:

а) определить группу крови донора и реципиента;

б) определить резус-принадлежность донора и реци­пиента;

в) провести пробу (по системе АВО) на групповую совместимость крови донора и реципиента;

г) провести пробу на резус-совместимость крови до­нора и реципиента;

д) провести биологическую пробу..

Согласно "Инструкции", перед определением группы крови на пластины наносятся фамилия и инициалы ли­ца, группа крови которого определяется, или номер флакона, если кровь донорская.

У больного следует предположить возникновение цитратной интоксикации, которая может случиться при быстром и массивном переливании крови, консервиро­ванной натрия цитратом. При медленном капельном вливании крови этого не происходит, так как цитрат в организме быстро распадается и выводится.

Профилактикой цитратной интоксикации является КАПЕЛЬНОЕ (!) вливание крови и внутривенное вве­дение 10% раствора кальция хлорида (глюконата) по 5 мл на каждые 500 мл цитратной крови. Лечение симптоматическое.

Биологическая проба проведена согласно "Инструк­ции по переливанию крови и ее компонентов".

Появившиеся изменения в состоянии больного сви­детельствуют об индивидуальной биологической несо­вместимости исследуемой крови с кровью реципиента.

Переливание крови должно быть немедленно пре­кращено пережатием системы. Затем система для переливания отсоединяется от иглы, к которой подсоединя­ется другая система с солевым раствором, вводятся кальция хлорид или глюконат, адреналин, сердечные препараты. Ни в коем случае нельзя удалять иглу из ве­ны, чтобы не потерять в дальнейшем готового венозного доступа.

При проведении биологической пробы во время хи­рургической операции, когда больной находится под наркозом, изменение пульса и артериального давления может зависеть не только от переливания крови, но и от оперативного вмешательства, кровопотери, введения ле­карственных средств и наркоза. Поэтому после перели­вания из каждого флакона первых 100 мл крови в сухую чистую пробирку с несколькими каплями гепарина бе­рут 5 мл крови из вены больного и центрифугируют. Наличие розовой окраски плазмы (а также учащенный пульс и падение артериального давления) указывает на гемолиз и на то, что перелита несовместимая кровь. Ес­ли плазма имеет обычную окраску, то кровь признают совместимой и можно продолжать трансфузию.

Необходимо произвести реинфузию собранной кро­ви. До ее осуществления надо выяснить, не произошло ли массивное микробное загрязнение собранной крови при повреждении органов мочевыделительной системы или желудочно-кишечного тракта и нет ли ее выражен­ного гемолиза. Скрытый гемолиз можно выявить про­бой Гемпеля (после центрифугирования порции крови плазма не должна быть окрашена в розовый цвет).

Реинфузии подлежит кровь, излившаяся в раневые и серозные полости и находившаяся в них не более 12 ч. Собранную кровь фильтруют через 8 слоев марли. В ка­честве стабилизатора используют стандартные гемоконсерванты или гепарин (10 мг в 50 мл изотонического раствора натрия хлорида на 450 мл крови). Собранную

кровь перед трансфузией разводят изотоническим рас­твором натрия хлорида в соотношении 1:1 и добавляют 1000 ЕД гепарина на 1000 мл крови.

Переливание проводят через систему для инфузии с фильтром.

Каждый случай гемотрансфузии фиксируется в исто­рии болезни.

Вначале записываются показания к гемотрансфузии, дата и время ее начала, затем метод — внутривенный, внутриартериальный, струйный и т.д., потом данные, указанные на этикетке флаконов (паспорт крови): груп­па, номер серии, дата заготовки, фамилия и инициалы донора. После этого заносятся результаты определения группы крови донора и реципиента, а также проведения проб на групповую и резус-совместимость, биологиче­ской пробы. В конце указывается состояние больного во время переливания и после него. Причем после перели­вания трижды через каждый час отмечаются температу­ра тела, пульс и давление. Через сутки после гемо­трансфузии необходимо сделать общий анализ крови (гемолиз!) и исследовать мочу на белок, так как появле­ние белка в моче является признаком переливания не­совместимой крови.

У больной клиническая картина гемотрансфузионного шока II степени.

В экстренном порядке необходимо:

1) ввести сердечно-сосудистые, спазмолитические и антигистаминные средства, кортикостероиды, наладить ингаляцию увлажненного кислорода;

2) перелить реополиглюкин, гемодез, 5% раствор на­трия гидрокарбоната, 10—20% раствор альбумина, изо­тонический раствор натрия хлорида;

3) ввести фуросемид, перелить 10—20% раствор маннитола;

4) произвести двустороннюю околопочечную новокаиновую блокаду по А.В.Вишневскому.

В последующем может понадобиться обменное пере­ливание крови.

Несмотря на имеющееся противопоказание (гипер­тоническая болезнь III ст.), в указанном случае к гемо­трансфузии следует прибегнуть по прямым жизненным показаниям.

У больной после переливания крови другой группы развился синдром острой почечной недостаточности.

Ей следует ограничить прием жидкостей, назначить бессолевую диету с ограничением белка, внутривенно ввести 10% раствор глюкозы (400—600 мл) с инсулином (1 ЕД инсулина на 4 г сухого вещества глюкозы), рас­твор натрия бикарбоната, анаболические гормоны (метандростенолон, тестостерона пропионат и др.), ви­тамины С, Р, группы В, никотиновую кислоту, кальция хлорид. При тошноте и рвоте промывают желудок и кишечник.

Больная должна быть в экстренном порядке консуль­тирована врачом — специалистом по гемодиализу.

8.. Рекомендуемая литература:

Список рекомендуемой литературы.

Основная литература.

1. Гостищев В.К. Общая хирургия: учебник – 4 –е изд. – М., 2006.

2. Петров С.В. Общая хирургия: учебник – 3-е изд., перераб.и доп.- М., ГЭОТАР –МЕДИА,2009.

 

Дополнительная литература

1. Вебер В.Р., Швецова Т.П., Швецов Д.А. «Неотложные состояния в практике семейного врача» (учебное пособие) - В.Новгород, 2005.

2. Байдо В.П. «Пропедевтика хирургических болезней» (учебное пособие) – В.Новгород, 2006.

3. Байдо В.П. «Хирургия для семейного врача» (учебное пособие) – В.Новгород, 2006.

4. Общехирургические навыки. Уч. Пособие для студентов мед. ВУЗов Оскретков В.И., Ганков В.А., Прохоров В.И., Вильгельм Н.П., под ред. В.И. Оскреткова. – Ростов н/Д: Феникс – 2007г.

5. Ультразвуковая диагностика в хирургии. Основные сведения и клинические применения./Арнели, ТрейсиД., Вишер, Деннис Б., Галдштейн, Лауренс Дж и др. пер. с англ. Под ред. С.А. Панфилова – М.: Бином, 2007г.

6. Асептика и антисептика: Уч. Пособие: для мед ВУЗов /Винник Ю.С., Кочетова Л.В., Карлова Е.А., Теплякова О.В. -. – Ростов н/Д: Феникс; Красноярск – 2007г.

7. Бельков А.В. Амбулаторная хирургия, тесты: Уч. Пособие: по специальности 040100 «Лечебное дело». – Растов н/Д: Феникс – 2007г.

8. Назаров И.П. Анестезиология и реаниматология: Учеб. пособие: Для послевуз. подгот. врачей и мед. вузов/ И.П. Назаров. ─ Ростов н/Д; Красноярск: Феникс: Издательские проекты, 2007.

9. Неотложная хирургия органов брюшной полости. Учебное пособие для студентов мед.ВУЗов./Коханенко Н.Ю., Афанасьев Н.В., Ланарея Э.Л. и др.; под ред. В.В.Леватовича. –М.:ГЭОТАР – медиа, 2007.

10. Левитэ Е.М. Введение в анестезиологию-реаниматологию: Учеб. пособие для мед. вузов / Под ред. И.Г. Бобринской. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 255с.Общехирургические навыки. Уч. Пособие для студентов мед. ВУЗов. Оскретков В.И., Ганков В.А., Прохоров В.И., Вильгельм Н.П., под ред. В.И. Оскреткова. – Растов н/Д: Феникс – 2007.

11. Назаров И. П. Анестезиология и реаниматология: учеб. пособие: для послевуз. подгот. врачей и мед. вузов / И. П. Назаров. - Ростов н/Д: Феникс; Красноярск: Издательские проекты, 2007.

12. Ожоги. Интенсивная терапия. Учебное пособие. Для послевузовской подготовки врачей и студентов вузов. /Назаров Н.П., Мацкевич В.А., Колегова Ж.Н. и др. - ─ Ростов н/Д., Красноярск: Феникс, 2007.

13. Вебер В.Р., Швецова Т.П., Швецов Д.А. «Неотложные состояния в практике семейного врача» (учебное пособие), 2-е издание исправленное и дополненное - В.Новгород, 2009.

14. Травматология. Национальное руководство / под ред. Г.П.Котельникова, С.П. Миронова. – М., ГЭОТАР –МЕДИА,2009

15. Анестезиология и реаниматология: учебник: для вузов / Н.С. Бицунов [и др.]; под ред. О.А. Долиной.. - 4-е изд., перераб. и доп. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009.

16. Пропедевтика хирургии. Учебное пособие для студентов мед.ВУЗов. /Баранов Г.А., Буромский И.В., Васильев С.А. и др.; под ред. В.К.Гостищева и А.И. Ковалева. 2-е издание исправленное и дополненное – М.: Медицинское информ. агентство, 2008г

17. Интенсивная терапия. Национаоьное руководство. В 2х томах / под ред. Б.Р.Гельфанда, А.И. Салтанова. – М., ГЭОТАР –МЕДИА,2009.

18. Вебер В.Р., Швецова Т.П., Швецов Д.А. «Неотложные состояния в практике семейного врача» (учебное пособие) 3-е издание исправленное и дополненное - В.Новгород,. 2011.