Особенности работы вирусологических лабораторий, оборудование. Техника безопасности при работе с вирусами.
Вирусологическая лаборатория — это учреждение, деятельность которого направлена на изучение вирусов и вирусных заболеваний, производство вирусных препаратов, к числу которых относятся вакцины, иммунные сыворотки и проч. Вирусная лаборатория состоит непосредственно из лаборатории, а также подсобных помещений. В последних проводятся работы, связанные с:
· Обработкой и стерилизацией лабораторной посуды.
· Приготовлением питательных сред.
· Лиофилизацией вирусов и т.п.
Помещение вирусологической лаборатории в обязательном порядке должно быть оборудовано системой эффективной приточно-вытяжной вентиляции, водопроводной системой (ГВС и ХВС), электрифицировано. Помимо этого, желательно наличие централизованной системы сжатого воздуха и вакуума.
Вирусологическая лаборатория – отдел в ветеринарной лаборатории.
Начинается с приемного отделения, куда доставляют пат. материал, далее записывают в журнал, присваивают номер.
Бытовые помещения, автоклавная (предназначенная для стерилизации посуды, питательных сред, обезвреживания инфекционных материалов. Обратите внимание: в обязательном порядке устанавливаются два автоклава: один — для чистых материалов, а второй — для инфицированных.), моечная(где происходит очистка приборов, посуды и аппаратуры.), три бокса с предбоксами: работа с пат материалом, заражение куриных эмбрионов, изготовление культур тканей; виварий (отдельно от лаборатории) – для лабораторных животных (здоровые, подопытные).
Оборудование: микроскопы, автоклавы (пар), сухожаровой шкаф (жар), термостат (поддержание температуры), водяная баня (вода), весы, холодильник, низкотемпературный прилавок, центрифуга (желательно с охлаждением).
Проведение отбора и консервирования пат материала: пат материал необходимо отбирать стерильными инструментами в стерильные емкости; пат материал может быть прижизненным и посмертным. (при жизни – истечения, сыворотка крови; посмертно – орган, пораженный вирусом).
Техника безопасности:
При работе с вируссодержащим материалом необходимо выполнять следующие требования: 1) не допускать рассеивания вирусов во внешней среде; 2) предотвратить контаминацию (загрязнение) вируссодержащего материала посторонней микрофлорой; 3) обеспечить личную безопасность. В лаборатории запрещается курить или принимать пищу, ходить и разговаривать во время работы.
Работу с вируссодержащим материалом в лаборатории проводят только в спецодежде, выход за пределы лаборатории в спецодежде; вынос оборудования, инвентаря и т. д. без дезинфекции запрещен.
Правила техники безопасности для студентов в вирусологическом практикуме: 1. В лабораторию входить в халате, шапочке, косынке. 2. Личные вещи на рабочий стол не класть. 3. На рабочем месте соблюдать чистоту и порядок, начинать работу только с разрешения преподавателя. 4. Пользоваться только стерильными инструментами, посудой. 6. Открывать и закрывать пробирки, флаконы у пламени горелки. 7. Все отходы после занятий собирать в специально подготовленную посуду. 8. Запрещается выливать и сбрасывать отходы в раковину. 9. Если студент случайно разольет вируссодержащий материал, он обязан немедленно сообщить преподавателю и вместе с ним принять меры. 10. В конце занятия студент должен привести в порядок рабочее место, сдать дежурному весь материал, инструменты, вымыть руки и обработать дезинфицирующим материалом.
Условия-хранения и культивирования вирусов в лаборатории.
При взятии вируссодержащего патологического материала большое значение имеет правильность выбора материала и его свежесть. Вирусы очень чувствительны к нагреванию и гниению. Поэтому материал нужно брать от свежих трупов (не позже 12 часов после гибели), а еще лучше от забитых клинически больных животных. При выборе материала учитывают тропизм вирусов и клиническое проявление болезни, вид и возраст животного, стадию течения болезни, наличие видимых изменений в органах и тканях и т. д.
При жизни животного в качестве вируссодержащего материала может служить: афты и их содержимое (ящур), пустулы (оспа), истечения из носа и глаз (инфекционные заболевания и др.), слизь и смывы со слизистых, моча (чума свиней и др.), фекальные массы (при вирусных энтеритах), кровь и лимфа (при пантропных инфекциях), кусочки органов, взятые биопсией, и т. д. Посмертно кроме указанных материалов можно брать кусочки паренхиматозных и других органов (печень, селезенка, почки, мозг, лимфоузлы и др.). Трупы мелких животных направляют обычно целиком.
Берут материал по возможности стерильно с помощью стерильного инструмента и в стерильную посуду. Если лаборатория рядом, материал отправляют неконсервированным и обычно в термосах со льдом. Если же материал нужно транспортировать далеко, то его обычно консервируют и тщательно упаковывают (особенно, если отправляют по почте или самолетом). Кусочки органов консервируют в 50% стерильном глицерине или насыщенном растворе хлористого натра и дополнительно помещают в термос со льдом. Жидкий материал консервируют замораживанием и сохраняют при -20° С (в термосе с сухим льдом). Пересылка материала сопровождается направлением, в котором сообщаются эпизоотологические и клинические данные, картина патологоанатомических изменений.
Присланный в лабораторию материал принимают и, по возможности, сразу же начинают исследовать, а, если это невозможно, то материал хранят до исследования в холодильнике при -20° С (в морозилке). Подготовка материала к вирусологическим исследованиям заключается в следующем. После осмотра органов и тканей, если материал был консервирован, их отмывают стерильным физраствором от консерванта. Если труп поступил целый, его осматривают и затем проводят вскрытие, измененные органы тщательно осматривают и извлекают в стерильные баночки или чашки Петри. При бешенстве часто поступает голова трупа, которую также сначала осматривают, а затем вскрывают и извлекают мозг. Жидкий материал проверяют на бактериальную загрязненность микроскопией мазков и посевом на среды (МГ1Б, МПА, среду Китт-Тароцци и среду Сабуро) и при необходимости обрабатывают антибиотиками (пенициллин и стрептомицин по 500-2000 ЕД на мл среды в зависимости от степени загрязненности).
Из кусочков органов готовят суспензию. Для этого из присланных органов и тканей берут небольшие кусочки (1.0-1.5 г) и помещают в стерильную ступку, где после измельчения ножницами тщательно растирают до кашицеобразной массы со стерильным песком или стеклом.!1атем добавляют стерильный физраствор в соотношении 1:10 или 1:5 и получается суспензия. Ее переносят в центрифужные пробирки и туда же вносят вышеуказанные антибиотики в дозе 500-2000 ЕД на 1 мл суспензии. Суспензию в пробирках 2-3 раза замораживают (при -20°-50°С) и отстаивают при комнатной температуре или в термостате при 37° С. При этом происходит дополнительное разрушение клеток и освобождение вируса. Затем пробирки с суспензией центрифугируют 15-20 минут при 3000 оборотов в минуту. Надосадочную жидкость проверяют на стерильность посевом на среды в аэробные и анаэробные условия и затем используют как вируссодержащий материал для заражения лабораторных животных, куриных эмбрионов и культур тканей и для постановки серологических реакций в качестве антигена. Одновременно из исходного патологического материала готовят мазки или мазки-отпечатки, которые исследуют на наличие телец-включений и вируса в клетках после специальной окраски под обычным микроскопом или применяют люминесцентную микроскопию с использованием иммунофлуоресценции (флуоресцирующие антитела). При необходимости можно из органов готовить гистосрезы и исследовать их гистологически (например, при бешенстве).