Lil-
ы
■І)"
I С t ■ с It
|
г Тії
•ТІ/
04 І ►*■
ту
А.-Я
| їм | ф |
| І»» | Су* |
| *w | ОП |
Cfi Cjf»
Сп
с*Л L„ - cri chl»
Li» — PI» W» ™J Art ------------------------ T»r— --------- 13ЦЧНЛ
Рис. 5.5. Схематическое представление структуры «цинкового пальца» и сравнительный анализ аминокислотных последовательностей ДНК-связывающих доменов различных представителей суперсемейства ядерных рецепторов. Каждый «цинковый палец» стабилизирован хелатными связями 4-х остатков цистеина с ионом цинка и в итоге образует тетраэдрический комплекс. Альтернативные координационные положения показаны на рис. справа, где видно укорочение «пальца» с отделением последнего остатка цистеина втакназываемый«трейлерный» участок.
Последующими исследованиями было достоверно доказано, что индуцируемая лигандом/гормоном трансформация нативного рецептора
Механизмы действия тиреоидных гормонов
присуща рецепторам всех классов стероидных гормонов, но не
тиреоидным гормонам. Трансформация рецептора эстрогенов
сопровождается также увеличением константы седиментации, что
связано с димеризацией рецептора. Хотя трансформация рецептора не
обязательно сопровождается его спонтанной димеризацией,
установлено, что рецепторы прогестагенов, глюкокортикоидов и
тиреоидных гормонов взаимодействуют с чувствительными
последовательностями ДНК ядра в димеризованной форме. Оказалось
также, что трансформация и димеризация рецепторов стероидных
гормонов нередко может протекать с большей скоростью через стадию
уменьшения Ks. Этот феномен получил объяснение после описания
взаимодействия нативного рецептора с белками теплового шока -
разновидностью клеточных спарегоп'ов (белков, которые способствуют
стабилизации 2-ной структуры мРНК и ряда белков и синтезируются в
ответ на предъявление клетке чрезвычайных стимулов). Возможно, что
спарегоп'ы занимают участок связывания рецептора с чувствительной
нуклеотидной последовательностью и освобождают его при
трансформации в необычных внутриклеточных условиях (например, в
присутствии эндогенных анионов металлов или
|
|
аминофосфоглицеропа). Освобождение места связывания наступает при реакции стероида с анионным центром или в результате индукции аутопротеопитической активности в белках теплового шока. Точное значение этих взаимодействий остается пока неизвестным, хотя можно предполагать их усиливающую и/или разрешающую роль.
Во всех случаях ядерный комплекс может быть дифференцирован от цитозольного по связывающей способности (константе ассоциации) с ядерной фракцией, хроматином, ДНК и полианионами, например, фосфоцеллюпозой.
При изучении взаимосвязи между ядерной и цитозольной формами рецепторов стероидных гормонов было показано, что связывание эстрадиоп-рецепторного комплекса ядрами клеток-мишеней является опосредованным двухстадийным процессом с первичным образованием цитозольного комплекса. Цитозопьный связывающий белок является не только переносчиком активной формы гормона в ядро, но и сам при ядерной транслокации становится активным ядерным рецептором.
Механизмы действия тиреоидных гормонов
-fflL
| Ой т |
| ■41 144 >h | *4 | |||
| «м | " ТІЛ ' і | т | ||
| 11' | ||||
| «11 | Г. і Г | ш | ||
■ 41 И4 |ч
|
|
) — 1-І I *,11 "
| J |
| С |
жг^г
1-М I - I
а-:
■Чі 14» ги
«Ж
t-"i" T T,
T-TT .
Г
I 41 M» 4
1-І- I I
Ml Лі ітч
НАР
D«
Рис. 5.6. Сравнительный структурно-функциональный анализ аминокислотных последовательностей ядерных рецепторов. (+) и (-) обозначает соответственно отсутствие и присутствие свойства у ресинтезированного на основе кДНК белка. HRE - гормон-чувствительный элемент ДНК. Видовая специфичность обозначена: h - человек, г - крыса, m - мышь, с - цыпленок, о! - дрозофилла.
Ряд исследований показал, что рецепторы тиреоидных гормонов после их синтеза подвергаются транслокации в ядро и перманентно существует в ДНК-связанной форме (без связи с белками теплового шока) и, таким образом, не претерпевают лиганд-индуцированной трансформации. Также не обнаружено цитозольной формы рецепторов тиреоидных гормонов и ретиноевои кислоты. Клетки чувствительных к действию ретиноевои кислоты тканей содержат так называемый клеточный связывающий белок, CRABP, который может служить цитозольным переносчиком гормона.
Современное прочтение теории двухстадийной активации рецепторов стероидных гормонов заключается в дискуссионное™ вопроса о присутствии цитозольного рецептора и необходимости его трансформации и транслокации в ядро. Большинство исследователей разделяет мнение о валидности двухстадийной активации рецептора. Спорным остается положение о цитоплазменно-ядерном равновесии распределения рецепторов сам механизм транслокации.