КДЗ обнаружения эозинофилов: Их обнаружение рассматривается как один из важнейших диагностических признаков бронхиальной астмы, асматического бронхита.
Реактивы:
0,5 % спиртовой раствор эозина;
1% водный р-р метиленового синего.
Техника окраски:
На предметное стекло из 4-6 разных мест помещают мокроту и тщательно растирают другим предметным стеклом до гомогенной массы, высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем горелки.
На теплое стекло наливают раствор эозина и окрашивают в течение 3 мин. Затем мазок промывают водой и докрашивают несколько секунд метиленовым синим. Краску смывают водой, препарат высушивают на воздухе. Микроскопируют с иммерсионной системой. На синем фоне четко выделяется красная зернистость эозинофилов.
Окраска по Цилю-Нильсену
Принцип метода:
Фиксированные кислотоустойчивые бактерии при окраске карболовым фуксином Циля при нагревании прочно связывают краситель и не обесцвечиваются серной кислотой. Все остальные микроорганизмы, окрашенные карболовым фуксином, под воздействием серной кислоты обесцвечиваются и могут быть дополнительно окрашены в контрастный цвет метиленовым синим.
Состав:1.Фуксин Циля карболовый, 100 мл - 1 флакон.
2.Раствор кислоты серной 25 %, 100 мл - 1 флакон.
3.Раствор метиленового синего по Леффлеру, 100 мл - 1 флакон.
Все реактивы готовы к применению.
Оборудование и материалы:
1.Микроскоп типа МББ или МБИ с объективами для иммерсионной микроскопии.
2.Спиртовка или горелка газовая.
3.Ванночка и рельсы для окраски препаратов-мазков.
4.Бумага фильтровальная.
5.Вода дистиллированная
Методика окраски:
1. Приготовить препарат-мазок из исследуемого материала и зафиксировать его над пламенем спиртовки (горелки).
2. Нанести на фиксированный препарат-мазок карболовый фуксин Циля (можно нанеста краситель на кусочек фильтровальной бумаги, помещенной на препарат-мазок) и выдержать 3-5 мин при нагревании до появления паров, не доводя раствор краски до кипения.
3. Остудить препарат, слить остатки красителя (снять фильтровальную бумагу с мазка), тщательно промыть препарат под струей дистиллированной воды и аккуратно удалить капли воды с поверхности стекла с мазком.
4.Окрашенный препарат обесцветить в растворе серной кислоты в течение 3-5 секунд, для чего несколько раз погрузить стекло в стаканчик с раствором кислоты. Слить остатки кислоты со стекла и промыть препарат под струей дистиллированной воды.
5.Удалить с препарата воду, нанести на мазок раствор метиленового синего и выдержать 3-5 мин.Промыть препарат под струей дистиллированной воды, подсушить и микроскопировать.
Учет результатов:
Кислотоустойчивые бактерии (микобактерии туберкулеза и лепры) выглядят под микроскопом как слегка изогнутые или прямые палочки размером (0,2-0,6)х(1,0-10,0) мкм, окрашенные в рубиново-красный цвет, резко контрастирующий с цветом остальной части мазка, окрашенной в различные оттенки синего цвета.
Вопросы для самоконтроля:
1.Перечислите физические свойства мокроты?
2.При каком заболевании выделяется «ржавая мокрота»?
3.Чем обусловлено присутствие эластических волокон в мокроте?
4.При каком заболевании обнаруживается триада Габричевского?
5.Какие клеточные элементы обнаруживаются при микроскопировании нативного препарата?
6. В чем пинцип метода окраски мокроты по Цилю-Нильсену?
7.Как готовится окрашенный препарат на эозинофилы?
8.Какие клеточные элементы обнаруживаются в мокроте?
9. Как классифицируются элементы в мокроте?
10.Правила сбора мокротаы для общеклинического исследования? КДЗ исследования мокроты?
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.А.А.Кишкун.Клиническая лабораторная диагностика; 2010.-702 с.г.
2. И.И. Миронова, Л.А. Романова, В.В. Долгов. Общеклинические исследования.
М.- Тверь: ООО «Издательство «Триада», 2005.-206 с., 218 ил.
3. Я.М. Вахрушев, Е.Ю. Шкатова Лабораторные методы диагностики: Учебное
пособие.- Ростов н/Д: Феникс, 2007.-96 с.
4.В.С. Камышников. О чем говорят медицинские анализы: Справочное пособие – М.:
МЕДпресс-информ, 2007.-2-е изд.-176с.
5.В.М. Лифшиц, В.И.Сидельникова «Медицинские лабораторные анализы»,
Справочник. – М., «Триада-Х», 2007,304 с.
6.В.Н. Ослопов, А.Р. Садыкова, Р.А. Абдулхаков. Клиническая лабораторная
диагностика.- 3-е изд.-М.: МЕДпресс- информ,2005.-64 с.
7.Управление качеством клинических лабораторных исследований: Нормативные
документы / под. ред. В.В. Меньшикова.- М.: Лабпресс,2000.
8.Анализы. Полный справочник.- М.: Изд-во Эксмо, 2006.-768 с.
9.Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной
диагностике: в 2 т. т 1,2 – Минск: Беларусь,2002.