Различные серотипы сальмонелл (в основном сальмонеллы подвида salmonella enterica enterica) являются причиной различных инфекционных заболеваний:
· salmonella enterica enterica серотип typhi (часто пишется просто salmonella typhi) — возбудитель брюшного тифа
· salmonella enterica enterica серотипы paratyphi A, paratyphi B, paratyphi C (или salmonella paratyphi A и т.п.) — возбудители паратифов A, B и С
· salmonella enterica enterica, разнообразные серотипы: agona, enteritidis, typhimurium, heidelberg, newport и др. — возбудители сальмонеллеза.
Причиной сальмонеллеза, чаще всего, являются содержащие сальмонеллы яйца (до 90 % случаев сальмонеллезов связано с употреблением сырых или недостаточно термически обработанных яиц), мясные и молочные продукты, и, в меньшей степени, рыба и рыбные продукты, а также продукты растительного происхождения. Природный резервуар сальмонелл — домашние птицы и животные: утки, куры, крупный рогатый скот, свиньи, овцы. Заражение сальмонеллами мяса происходит после убоя, при нарушении правил разделки и хранения мяса. Попадание сальмонелл в пищу часто происходит при ее неправильной кулинарной обработке, при несоблюдении санитарных норм при ее приготовлении.
Сальмонеллы могут вызывать различные заболевания мочеполовых органов человека, в частности, простатит, цистит и пиелонефрит.
6. Антигенная структура и классификация сальмонелл по Кауфману-Уайту.
У сальмонелл выделяют О-, Н- и К-антигены. Их распознавание положено в основу диагностической антигенной схемы Кауфманна-Уайта.
Термостабильные О-антигены выдерживают кипячение в течение 2,5 ч и автоклавирование при 120 °С в течение 30 мин. Специфичность антигенов зависит от строения боковых олигосахаридных цепей молекулы ЛПС. В соответствии с содержанием тех или иных О-антигенов сальмонеллы разделяют на серологические группы. Известно 67 отдельных антигенных факторов, обозначаемых арабскими цифрами.
По О-антигенам сальмонеллы разделены на 50 групп от А до Z (факторы 51 —67).
Термолабильные Н-антигены разрушаются нагреванием при температуре 75-100 °С. Состав Н-антигены обусловливает разделение сальмонелл на серовары. Выделяют антигены I(специфические) фазы и II (неспецифические) фазы.
Известно более 80 антигены I фазы обозначают строчными латинскими буквами (а~z) и арабскими цифрами (z1-z59).
Антигены II фазы сальмонелл обозначают арабскими цифрами. Всего известно 9 Аг, присутствующих у различных сероваров. Сальмонеллы, в которых Н-Аг представлены двумя фазами, называют двухфазными (в отличие от монофазных, имеющих антигенные факторы только I фазы).
Прочие термолабильные Аг. Капсульные Аг, поверхностые Vi-Аг (вирулентности), М-Аг, у слизистых штаммов.
У сальмонелл различают два основных антигенных комплекса: О- и Н-антигены. Это структурные элементы бактериальной клетки. Соматические О-антигены термоустойчивы и представляют собой липо-полисахариднополипептидные комплексы. Жгутиковые Н-антигены термолабильны, имеют белковую природу. Кроме того, у бактерий рода Salmonella обнаружен ряд других антигенов — поверхностных и капсульных. Между капсульными и поверхностными антигенами не существует резкого разграничения, переход осуществляется постепенно, поэтому оба антигена, и капсульный, и поверхностный, объединяются под общим названием К-антиген.
Название К происходит от немецкого слова «kapsel». В группе Salmonella доказано наличие трех К-антигенов: антиген 5, Vi-антиген и М-антиген.
Схема серологической классификации сальмонелл разработана Кауфманом и Уайтом. Согласно предложенной схеме сальмонеллы были разбиты на пять больших групп по общности соматического O-антигена: А, В, С, D, Е. Оказалось, что О-антигены неоднородны и состоят из двух и более рецепторов (фракций), которые были обозначены в схеме римскими цифрами (I, II, III и т. д.). В свою очередь H-антигены, специфические и неспецифические оказались также неоднородными. Рецепторы специфических H-антигенов были обозначены малыми буквами латинского алфавита, а рецепторы неспецифических H-антигенов — арабскими цифрами и частично буквами.
Дальнейшее изучение антигенной структуры сальмонелл, выделенных от людей и животных, обнаруживало все большую сложность этой структуры, сопровождаясь все время открытием новых О- и H-антигенов, а следовательно, и новых типов. В серологические схемы Кауфмана—Уайта в 1939 г. на II Международном конгрессе микробиологов было введено разделение H-антигена на фазы I и II с упразднением деления на специфическую и неспецифическую фазы. В обозначении О-антигенов сальмонелл римские цифры были заменены арабскими.
В настоящее время для обозначения серологических групп в схеме исчерпаны все буквы латинского алфавита, и последующие группы (51 и дальше) обозначены цифрами их соматических антигенов. Число систематизированных сальмонелл превысило в настоящее время 1600.
Для полного типизирования сальмонелл по антигенной структуре достаточно иметь ограниченный набор монорецепторных О- и H-сывороток, позволяющих идентифицировать типы сальмонелл групп А, В, С, D, E, которые чаще всего выделяются от людей и животных.
7. Монорецепторные сальмонеллёзные сыворотки. Принципы их получения.
СОСТАВ Изготавливают из крови кроликов, гипериммунизированных О- и Н-антигенами сальмонелл, с последующей адсорбцией из сывороток неспецифических антител.
НАЗНАЧЕНИЕ Предназначены для идентификации сальмонелл, выделенных от животных, из кормов, продуктов животного происхождения и объектов внешней среды.
ПРИМЕНЕНИЕ Препарат применяют согласно действующего наставления по применению наборов сывороток сальмонеллезных монорецепторных О- и Н-агглютинирующих.
Использование: микробиология, диагностика, сальмонелла, диагностическая сыворотка.
Сущность изобретения: отбирают штаммы сальмонелл, охватывающие широкий спектр H - антигенов и с минимальным содержанием О - антигенов. Из 18 отобранных штаммов готовят антиген, представляющий собой изолированные жгутики. Полученным антигеном гипериммунизируют кроликов двумя циклами и получают родоспецифическую поливалентную H - сыворотку с титром 1:3200 - 1:12800 при рабочем разведении 1:320. Сыворотка позволяет выявлять сальмонеллы в количестве одна клетка на 50 г исследуемого продукта, а также в смешанной культуре без дополнительного биохимического тестирования. Индикация сальмонелл осуществляется в реакции агглютинации.
8. Микробиологическая диагностика сальмонеллезов.
Дополнительные объекты исследования на наличие сальмонелл — остатки пищи, употреблявшейся заболевшими, исходные продукты; суточные пробы готовой нищи; корма животного и растительного происхождения; смывы с различного оборудования и других предметов, подозреваемых в качестве фактора передачи возбудителя.
Оптимальным сроком для проведения бактериологических исследований при гастроинтестинальных формах сальмонеллёзов считают первые дни заболевания, при генерализованных формах — конец 2-й и начало 3-й недели.
При изучении различных материалов (испражнения, кровь, моча, жёлчь и др.) получение положительных результатов наиболее вероятно при исследовании испражнений.
Выделение возбудителей сальмонеллеза
Первоначально материал (особенно испражнения) помещают на среды обогащения (например, на селенитовый или 20% жёлчный бульон).
Дифференциально-диагностические среды для высевов со сред обогащения бывают высокоселективными (например, висмут-сульфитный агар), среднеселективными (среда Плоскирева) и низкоселективными (среды Эндо и Левина). На висмут-сульфитном агаре возбудитель паратифа А образует зеленоватые колонии. Биохимические и культуральные свойства определяют на минимальном дифференцирующем ряду. На плотных средах возбудитель паратифа Б может давать феномен валообразования.
Для дальнейшей работы отбирают сальмонеллы, ферментирующие глюкозу, не ферментирующие сахарозу и образующие H2S. Культуры пересевают со среды Олькеницкого на среду Хисса с маннитом, в 1 % пептонную воду для определения образования индола и полужидкий агар для определения подвижности.
В последнее время широко используют дифференциально-селективные среды, наиболее часто — ксилозо-лизино-дезоксихолатный (XLD) агар и среду для сальмонелл и шигелл (SS-arap). На них сальмонеллы образуют колонии красного цвета с чёрным центром за счёт образования H2S
Биопроба. Материалом от больного производят пероральное заражение белых мышей, которые через 1-2 дня погибают от септицемии. При посеве крови из сердца и материала из внутренних органов выделяется культура сальмонелл.
Серологическое исследование - исследование с помощью РНГА парных сывороток крови больных, взятых с интервалом в 7-10 дней с сальмонеллезными поливалентными и групповыми (группы А, В, С, Д, Е)диагностикумами. Диагностическое значение имеет повышение титра антител в четыре и более раз.
9. Особенности микробиологической диагностики сальмонеллёзов у детей.
При сальмонелленой инфекции у детей изменения неспецифического и специфического гуморального иммунного ответа характеризуются повышением уровня сывороточных IgA, IgM, ЦИК, появлением специфических антибактериальных и антитоксических антител трех классов (IgA, М, G), наличием в крови свободного ТЛЭТ. Характер и степень выраженности иммунных сдвигов зависят от тяжести инфекционного процесса. Тяжелая форма сопровождается ослабленным иммунным ответом, с умеренным повышением сывороточных иммуноглобулинов, высоким уровнем ЦИК. Среднетяжелая форма характеризуется адекватным увеличением сывороточных IgA, IgM, наиболее низкими показателями ЦИК.
Степень выраженности иммунных нарушений зависит от возраста детей. Адекватный иммунный ответ регистрируется у больных старше 3 лет жизни, сопровождается значительным увеличением содержания сывороточных IgA, IgM, SIgA, антител к ЛПС, ТЛЭТ сальмонелл. Ослабленная иммунная реакция отмечается у пациентов грудного возраста, сопровождается менее выраженным повышением вышеуказанных показателей.
С целью повышения качества специфической диагностики сальмонеллеза рекомендуется применение метода ИФА, направленного на обнаружение в крови специфических антибактериальных и антитоксических антител трех классов (А, М, G).
10. Общая х-ка брюшного тифа и паратифов.
Брюшной тиф и паратифы А и В — инфекционные болезни, вызываемые соответственно Salmonella typhi, Salmonella paratyphi, Salmonella schottmuelleri, сопровождающиеся сходными патогенетическими и клиническими проявлениями, характеризующиеся поражением лимфатической системы кишечника, выраженной интоксикацией.
Возбудители брюшного тифа и паратифов А и В относятся к отделу Gracilicutes, семейству Enterobacteriaceae, роду Salmonella, включающему более 2000 видов.
Сальмонеллы — мелкие, длиной 2—3 мкм, шириной 0,5—0,7 мкм, грамотрицательные палочки с закругленными концами (см. рис.їО.І). В мазках располагаются беспорядочно. Не образуют спор, имеют микрокапсулу, перитрихи.
Сальмонеллы — факультативные анаэробы. Они неприхотливы и растут без всяких особенностей на простых питательных средах при температуре 37 °С и рН среды 7,2— 7,4. Элективной средой является, например, желчный бульон. При диагностике брюшного тифа, как и других кишечных инфекций, используют дифференциально-диагностические среды: Эндо, Левина, висмут-сульфитный агар и др.
Биохимическая активность сальмонелл достаточно высока, но они обладают меньшим набором ферментов, чем Е. coli, в частности не сбраживают лактозу. S. typhi менее активна, чем возбудители паратифов: она ферментирует ряд углеводов без образования газа.
S. typhi, имеют поверхностный Vi-антиген — антиген вирулентности, с которым связана устойчивость бактерий к фагоцитозу.
Сальмонеллы образуют эндотоксин, оказывающий энтеротропное, нейротропное и пирогенное действие. Белки наружной мембраны обусловливают адгезивные свойства, устойчивость к фагоцитозу связана с микрокапсулой.
Сальмонеллы довольно устойчивы к низкой температуре — в холодной чистой воде могут сохраняться до полутора лет; очень чувствительны к дезинфицирующим средствам, высокой температуре, УФ-лучам. В пищевых продуктах (мясе, молоке и др.) сальмонеллы могут не только долго сохраняться, но и размножаться.
Источником брюшного тифа и паратифов являются больные люди и носители. Механизм передачи инфекции — фекально-оральный. Преобладает водный путь передачи, реже встречаются пищевой и контактно-бытовой пути. Брюшной тиф и паратифы — заболевания, которые регистрируются в разных странах мира. Чаще болеют люди в возрасте от 15 до 30 лет. Наиболее высокая заболеваемость отмечается летом и осенью.
Возбудители попадают в организм через рот, достигают тонкой кишки, в лимфатических образованиях которой размножаются, а затем попадают в кровь. Током крови они разносятся по всему организму, внедряясь в паренхиматозные органы (селезенку, печень, почки, костный мозг). При гибели бактерий освобождается эндотоксин, вызывающий интоксикацию. Из желчного пузыря, где сальмонеллы могут длительно, даже в течение всей жизни сохраняться, они вновь попадают в те же лимфатические образования тонкой кишки. В результате повторного поступления сальмонелл может развиться своеобразная аллергическая реакция, проявляющаяся в виде воспаления, а затем некроза лимфатических образований. Выводятся сальмонеллы из организма с мочой и испражнениями.
Клинически брюшной тиф и паратифы не отличимы. Инкубационный период продолжается 12—14 дней. Заболевание обычно начинается остро с повышения температуры тела, проявления слабости, утомляемости, нарушаются сон, аппетит. Для брюшного тифа характерны помрачение сознания (от греч. typhus — дым, туман), бред, галлюцинации, наличие сыпи. Очень тяжелыми осложнениями заболевания являются перитонит, кишечное кровотечение в результате некроза лимфатических образований тонкой кишки.
После перенесенного заболевания вырабатывается прочный и продолжительный иммунитет.
Микробиологическая диагностика. В качестве материала для исследования используют кровь, мочу, испражнения. Основным методом диагностики является бактериологический, завершающийся внутривидовой идентификацией выделенной чистой культуры возбудителя — определением фаговара. Применяют также серологический метод — реакцию агглютинации Видаля, РНГА.
Лечение. Назначают антибиотики. Применяют также иммуно- антибиотикотерапию
Профилактика. Для профилактики проводят санитарно-гигиенические мероприятия, а также используют вакцинацию в районах с неблагополучной эпидемической обстановкой. Применя-ют брюшнотифозную химическую и брюшнотифозную спиртовую вакцины, последняя обогащена Vi-антигеном. Для экстренной профилактики в очагах инфекции используют брюшнотифозный бактериофаг (в виде таблеток с кислотоустойчивой оболочкой и в жидком виде).
11. Методы микробиологической диагностики брюшного тифа в связи с патогенезом.
В зависимости от сроков заболевания изучают различные материалы.
На 1-й неделе, начиная с первых дней болезни, исследуют кровь с целью выделения гёмокультуры. Кровь берут с соблюдением правил асептики из вены в количестве 7—10 мл и засевают в 100 мл желчного бульона или в среду Раппопорта. Посевы инкубируют в термостате при 37°С в течение 10 сут с повторными высевами на плотные питательные среды. При появлении колоний готовят мазок, окрашивают по Граму, микроскопируют. Делают пересев на скошенный агар и среды Эндо, Левина, Плоскирева, висмут-сульфитный агар. Проводят идентификацию выделенного микроба, определяя биохимические и антигенные свойства. Для этого делают посевы на «пестрый ряд». Испытывают лактозонегативные, подвижные культуры в реакции агглютинации, вначале с поливалентной О-сывороткой к сальмонеллам групп А, В, С, D, Е, а затем с монорецепторными О-сыворотками. При расщеплении глюкозы до кислоты выделенную культуру испытывают с О-сывороткой 9 (S. typhi), при образовании кислоты и газа — с О-сыворотками 4 (S. paratyphi В) и 2 (S. paratyphi А). Если культура не агглютинируется 0-сыворотками, необходимо ее испытать с Vi-сывороткои, так как наличие Vi-антигена обусловливает О-инагглютинабельность микроба. Затем испытывают культуру в реакции агглютинации с Н-сыворотками, вначале первой, потом второй фазы в зависимости от результата реакции с О-сыворотками.
Установить фаготип выделенных культур сальмонелл тифа можно с помощью типирования Vi-фагами. В настоящее время имеется набор типовых брющнотифозных Vi-бактериофагов, состоящий из 96 специфических Vi- бактериофагов. По схеме типирования S. typhi типиро- ванию подлежат культуры, находящиеся в V-форме (т. е. содержащие Vi-антиген).
Для выделения гемокультуры кровь можно исследовать на протяжении всей болезни, однако процент высева микробов постепенно снижается, поэтому кровь беру в большем количестве.
С конца 1-й недели в сыворотке больного можно обнаружить антитела, поэтому проводят серологическое исследование — реакцию агглютинации (реакция Видаля). Для постановки этой реакции готовят 4 ряда разведений сыворотки больного в пробирках — от 1: 100 до 1: 1600. Во все пробирки первого ряда добавляют по 1—2 капли Н-диагностйкума брюшного тифа, во второй ряд — О-диагностикума брюшного тифа, в третий ряд — паратифа А, в четвертый — паратифа В. В процессе болезни нарастает титр О- и Н-антител, но О-антитела у переболевших быстро исчезают, а Н-антитела сохраняются («анамнестический Видаль»). Реакция Видаля может быть также положительна у привитых («прививочный Видаль»). Для отличия положительного результата реакции Видаля у больного брюшным тифом от «прививочного» и «анамнестического» ее ставят повторно — при этом у больных титр антител нарастает.
В настоящее время для серологической диагностики брюшного тифа и паратифов применяют реакцию гемагглютинации; для этого используют соответствующие эрит- роцитарные О-сальмонеллезные диагностикумы: 9, 2, 4, Vi. Эта реакция более чувствительна, чем реакция Видаля.
Начиная со 2-й недели, проводят микробиологическое исследование испражнений, мочи, костного мозга, желчи, розеол. Посевы делают на плотные дифференциально- диагностические среды и на жидкие среды обогащения (селенитовая, Мюллера, Кауфмана). Выросшие культуры дифференцируют, определяя их ферментативные и антигенные свойства, как и при выделении гемокультуры.
В современных условиях большое значение приобретает выявление носителей возбудителей тифа и паратифов, которые являются основными источниками инфекции, Для этого проводят бактериологическое исследование испражнений, мочи, дуоденального содержимого (порции В и С желчи). Кроме того, применяют реакцию пассивной Vi-гемагглютинации с эритроцитарным Vi- диагностикумом брюшного тифа; сыворотку обследуемого разводят от 1:20 до 1:320. Основанием для постановки этой реакции с целью выявления бактерионосителей послужило то обстоятельство, что Vi-антитела сохраняются до тех пор, пока микроб находится в организме. Однако в последние годы в связи с применением для профилактики и лечения брюшного тифа Vi-антигена эта реакция теряет свое диагностическое значение.
12. Выделение гемокультуры при брюшном тифе.
Выделение гемокультуры.
а) отметить характер роста гемокультуры на среде Ресселя и на чашке со средой Эндо;
б) провести серологическую идентификацию выделенной на среде Ресселя гемокультуры в реакции агглютинации с агглютинирующими диагностическими сыворотками. Сделать заключение по проведенным исследованиям.
Кровь берут с соблюдением правил асептики из вены в количестве 7—10 мл и засевают в 100 мл желчного бульона или в среду Раппопорта. Посевы инкубируют в термостате при 37°С в течение 10 сут с повторными высевами на плотные питательные среды.
При появлении колоний готовят мазок, окрашивают по Граму, микроскопируют.
Делают пересев на скошенный агар и среды Эндо, Левина, Плоскирева, висмут-сульфитный агар.
Проводят идентификацию выделенного микроба, определяя биохимические и антигенные свойства. Для этого делают посевы на «пестрый ряд».
Испытывают лактозонегативные, подвижные культуры в реакции агглютинации, вначале с поливалентной О-сывороткой к сальмонеллам групп А, В, С, D, Е, а затем с монорецепторными О-сыворотками. При расщеплении глюкозы до кислоты выделенную культуру испытывают с О-сывороткой 9 (S. typhi), при образовании кислоты и газа — с О-сыворотками 4 (S. paratyphi В) и 2 (S. paratyphi А).
Если культура не агглютинируется 0-сыворотками, необходимо ее испытать с Vi-сывороткои, так как наличие Vi-антигена обусловливает О-инагглютинабельность микроба. Затем испытывают культуру в реакции агглютинации с Н-сыворотками, вначале первой, потом второй фазы в зависимости от результата реакции с О-сыворотками.
Установить фаготип выделенных культур сальмонелл тифа можно с помощью типирования Vi-фагами. В настоящее время имеется набор типовых брющнотифозных Vi-бактериофагов, состоящий из 96 специфических Vi- бактериофагов. По схеме типирования S. typhi типиро- ванию подлежат культуры, находящиеся в V-форме (т. е. содержащие Vi-антиген).
Для выделения гемокультуры кровь можно исследовать на протяжении всей болезни, однако процент высева микробов постепенно снижается, поэтому кровь беру в большем количестве.
В случае невозможного посева крови у постели больного, его доставляют в лабораторию в пробирке. Сыворотку отделяют от сгустка и используют для серологического исследования. Сгусток тщательно измельчают и засевают на те же среды в соотношении 1:10. Такое разведение необходимо для устранения бактерицидных свойств крови. В более поздние периоды болезни при наличии лихорадки надо пахать 15-20 мл крови и сеять на 150-200 мл питательной среды.
Желчные среды является элективных для возбудителей брюшного тифа и паратифов. У маленьких детей кровь для посева берут с мочки уха, пятки или пальца и в меньшем количестве.
Засеяны флаконы инкубируют при 37 ° С. На второй день изучают характер роста. При отсутствии роста флаконы оставляют в термостате до 10 дней, а при подозрении на L-формы - до 3-4 недель. Следующие висел на дифференциальные среды делают через 48 и 72 год, на 5 и 10 сутки.
Сальмонеллы брюшного тифа вызывают покраснение бульона Рапопорт результате ферментации глюкозы до кислоты, а возбудители паратифа еще и газа, который накапливается в поплавке.
Культуру, выросшую во флаконе, высевают на трицукрове среду Олькеницького и Эндо (Плоскирева, Левина, висмут-сульфит-агар). Если культура чистая (при микроскопии грамотрицательные палочки), продолжают работать лишь со средой Олькеницького. Посевы только на Эндо (или другие элективные среды) исследуют в тех случаях, когда на агаре Олькеницького вырастает не чистая культура, что случается редко. В таком случае типичные изолированные колонии пересевают на среду Олькеницького (или скошенный МПА), получают чистую культуру и идентифицируют ее. Колонии всех трех возбудителей на средах Эндо, Левина и Плоскирева бесцветные, нежные, прозрачные, на висмут-сульфитном агаре - черного цвета.
13. Выделение копрокультуры при брюшном тифе.
Выделение копрокультуры.
а) отметить характер роста на средах Эндо и Мюллера;
б) пересеять бесцветную колонию со среды Эндо в пробирку со средой Ресселя.
Метод копрокультуры для диагностики заболевания используют редко, поскольку бактерии в кале появляются поздно. Чаще его используют для обследования реконвалесцентов на бакгерионосийство и здоровых лиц, которые устраиваются на работу и работающих в системе общественного питания, водоснабжения и детских учреждениях. Материал у больных и реконвалесцентов берут без использования слабительного. Здоровым лицам за 3-4 часа до забора материала дают 30 г магнезиальной соли. Пробу отбирают из жидкой части фекалий. При патологических примесях в испражнениях (слизь, гной, кровь) их включают в взятого материала. Пробы фекалий в количестве 5-10 г вступают деревянным шпателем в специальные стандартные стерильные пластмассовые патроны одноразового использования или стеклянные широкогорлые баночки. На них наклеивают этикетку, где указывают дату забора, фамилия и инициалы больного и цели исследования.
Лучше всего посев сделать у постели больного. При невозможности быстро доставить материал в лабораторию, его вносят в консервант в соотношении 1:3. Чаще всего для этого используют жидкость, содержащая 30% стерильный раствор глицерина в фосфатном буфере. В бактериологической лаборатории фекалии сеют одновременно двумя способами - прямым на элективные среды (висмут-сульфит-агар, Плоскирева, Эндо, Левина) и на одну из сред обогащения (селенитовый, Мюллера, Кауфмана). Выбор среды проводит бактериолог. При прямом посеве на соответствующее плотную среду небольшое количество стула размещают в пептонной воде или в 0,85% растворе хлорида натрия и оставляют на 30 мин для оседания крупных частиц. С поверхности жидкости берут каплю материала и засевают в чашки с элективные среды. Посев на среду обогащения (в нем сальмонеллы размножаются лучше и быстрее, чем сопутствующая микрофлора) одновременно с прямым посевом является обязательным при исследовании здоровых людей на бактерионосительство, поскольку они выделяют небольшое количество бактерий. Однако, в связи с широким применением населением различных антибиотиков, необходимо использовать среды обогащения и при посевах испражнений от больных, особенно при эпидемических показаниях. При посеве на среды обогащения кусочек фекалий эмульгируют в 10 мл этого же среды. Следующий висел из него на плотное элективные среды целесообразно делать уже через 5-6 ч подращивания в термостате.
14. Серологическая диагностика брюшного тифа (РНГА)
Серологические методы позволяют обнаружить специфические антитела в крови или антигены в биосубстрате. В практической работе чаще всего применяют реакцию Видаля и РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) с использованием эритроцитарных О-, Н- и Vi-антигенов. Реакция Видаля основана на обнаружении специфических О- и Н-антител-агглютининов в крови больного с помощью соответствующих антигенов. Положительные результаты можно получить с 8-9 сут болезни. Реакция Видаля может быть положительной у привитых и перенёсших брюшной тиф, поэтому решающее значение имеет нарастание титра антител в динамике заболевания. Для более точного выявления специфических иммунных сдвигов в крови больного реакцию Видаля следует повторять с О- (IX и XII) и Н-монодиагностикумами для исключения перекрёстных реакций с сальмонеллами других групп.
Более специфичны и чувствительны РНГА с эритроцитарными О- и Vi-антигенами и реакция Vi-гемагглютинации. Эти реакции используют для ранней диагностики брюшного тифа. В РНГА концентрация О-антител нарастает в динамике заболевания, а титры Vi-антител существенно не меняются. Реакция Vi-гемагглютинации имеет наибольшее значение при обследовании лиц, подозрительных на брюшнотифозное носительство.
Серологические реакции на обнаружение специфических антител в крови больного следует ставить с 4-5-го дня болезни, а затем на 2-3-й нед и позднее. Диагноз брюшного тифа считают серологически подтверждённым при титре антител 1:200 и выше или при нарастании титра антител в 2-3 раза в динамике заболевания. При оценке серологических реакций важно учитывать, что нарастание титров специфических О-антител свидетельствует об остром инфекционном процессе, а наличие только Н- или Vi-антител - о перенесённом ранее брюшном тифе или бактерионосительстве.
15. Специфическая профилактика брюшного тифа и паратифов.
Прививки против брюшного тифа и паратифов проводятся в плановом порядке среди лиц, работающих на пищевых предприятиях, в сети общественного питания и торговли продуктами питания, в детских учреждениях, больницах, на водопроводных и канализационных сооружениях, на предприятиях по очистке населенных мест от отбросов и нечистот, приемных пунктах, складах и предприятиях «Главвторсырье», прачечных. Плановые прививки проводятся по санитарно-эпидемиологическим показаниям в коллективах предприятий и учреждений, в совхозах, колхозах, детям школьного возраста и отдельным группам населения. Прививки против брюшного тифа и паратифа проводятся детям с 7 лет. В старших возрастных группах мужчин прививают в возрасте до 60 лет, женщин — до 55 лет.Кроме того, прививки проводятся при возникновении вспышки заболевания на участке, в районе или в смежном населенном пункте.
Для проведения прививок против брюшного тифа и паратифа применяется химическая вакцина (тифозная моновакцина) и корпускулярные (спиртовая тифопаратифозная Б дивакцина — сухая и жидкая и др.).
Тифозную моновакцину вводят при вакцинации и ревакцинации в дозе 1,5 мл вакцины однократно подкожно. Сухую и жидкую спиртовую тифопаратифозную Б дивакцину вводят (взрослым и подросткам старше 15 лет) подкожно при первой вакцинации 0,5 мл, при второй — 1 мл, при первичной и последующей ревакцинации вводят по 1 мл. Интервал между первой и второй вакцинацией 10 — 20 дней.
Непосредственно перед проведением прививок врач осматривает прививаемых с обязательной термометрией.
16. Шигеллы – возбудители бактериальной дизентерии. Морфобиологические св-ва. Классификация.
Бактериальная дизентерия - острое антропонозное инфекционное заболевание с фекально-оральным механизмом передачи. Характерны общая интоксикация и преимущественное поражение слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки, схваткообразные абдоминальные боли, частый жидкий стул с примесью слизи и крови, тенезмы.
Шигеллы (лат. Shigella) — род грамотрицательных, факультативно анаэробных бактерий, являющихся возбудителями дизентерии.
Род шигеллы (лат. Shigella) входит в семейство энтеробактерии(лат. Enterobacteriaceae), порядок энтеробактерии (лат. Enterobacteriales), класс гамма-протеобактерии (лат. γ proteobacteria), тип протеобактерии (лат. Proteobacteria), царство бактерии.
В род шигеллы входит 4 вида, соответствующие четырем серогруппам:
· шигелла дизентерии (Shigella dysenteriae), серогруппа А, включает 12 серотипов
· шигелла Флекснера (Shigella flexneri), серогруппа B — 6 серотипов
· шигелла Бойда (Shigella boydii), серогруппа C — 23 серотипа
· шигелла Зонне (Shigella sonnei), серогруппа D — 1 серотип
Шигеллы имеют вид палочек без жгутиков, с закругленными концами размером 2–3 на 0,5–0,7 мкм. Не образуют спор и капсул. Шигеллы плохоустойчивы к воздействию физических, химических и биологических факторов окружающей среды. В воде, почве, пищевых продуктах, на предметах, посуде, овощах, фруктах шигеллы живут в течение 5–14 дней. При температуре 60 °С шигеллы гибнут через 10–20 минут, при 100 °С — мгновенно. Прямой солнечный свет убивают шигелл в течение 30 минут. При отсутствии солнечного света, повышенной влажности и умеренной температуре шигеллы сохраняют жизнеспособность в почве до 3 месяцев. В желудочном соке шигеллы могут выживать лишь несколько минут. В пробах кала шигеллы погибают от действия кислой реакции среды и бактерий-антагонистов через 6–10 часов. В высушенном или замороженном кале шигеллы жизнеспособны в течение нескольких месяцев.
Наиболее устойчивым к внешним воздействиям является вид шигелл Shigella sonnei, наименее устойчивым — Shigella dysenteriae.
Все виды шигелл могут являться возбудителями инфекционного заболевания — бактериальной дизентерии (называемой также шигеллезом), протекающего с явлениями интоксикации и преимущественным поражением дистального отдела толстой кишки. Наиболее благоприятные условия для развития шигелл — в поперечной ободочной и нисходящей ободочной кишках.
Заражение происходит фекально-оральным или контактно-бытовым путем, через воду и пищевые продукты. Переносчиками шигеллеза могут быть мухи и тараканы.
Шигеллез характеризуется постоянными тупыми болями по всему животу, которые позже становятся острыми схваткообразными, локализованными в нижней части живота, чаще слева или над лобком. Во время акта дефекации тянущие боли в области прямой кишки, отдающие в крестец. Первоначально частые дефекации — до 10–25 в сутки, в основном из слизи с включениями крови, а в более поздний период и примеси гноя. Часты ложные позывы на дефекацию — тенезмы.
Бактериальная дизентерия (шигеллез) имеет инкубационный период от нескольких часов до 7 дней, чаще всего протекает остро и проявляется недомоганием, ознобом, головной болью, лихорадкой, судорогами, однократной или многократной рвотой. У больного повышается температура. Одновременно или несколько позже появляются боли в животе. Полное выздоровление наступает через 2–3 недели. У некоторых больных дизентерия переходит в хроническую форму.
17. Микробиологическая диагностика дизентерии. Особенности лабораторной диагностики у детей.
Материалом для исследований дизентерии служат испражнения. Цель бактериологического анализа дизентерии — определение биохимических признаков и установление антигенной структуры возбудителя заболевания.
Выполняют посев либо на дифференциально-диагностические среды Эндо и Плоскирева, либо на жидкую селенитовую среду накопления с последующим пересевом на дифференциально-диагностические среды. После выделения чистых культур из изолированных колоний определяют их биохимические свойства (то есть видовую принадлежность).
Определение антигенных свойств дизентерии имеет эпидемиологическое значение. Об антигенной структуре судят по способности моно- и поливалентных антисывороток агглютинировать бактерии.
Для быстрого распознавания шигелл можно провести посев на агар Клиглера; бактерии ферментируют только глюкозу, не образуют газ при ферментации глюкозы (исключая газообразующие подвиды S. flexneri) и сероводород
Для выявления Аг шигелл в крови, моче и испражнениях используют РПГА, PCК, ИФА и реакцию коагглютинации (при исследовании мочи и испражнений). Для определения AT используют РПГА с соответствующими эритроцитарными диагностикумами и метод непрямой иммунофлюоресценции.
В качестве дополнительного метода диагностики при подозрении на дизентерию используют также внутрикожную аллергическую пробу с дизентерином, который представляет собой белковую фракцию дизентерийных шигелл Флекснера и Зонне. Кожно-аллергическая проба бывает положительна у 75—80% больных, но в 20—25% случаев она может быть положительна.улиц с не дизентерийными заболеваниями. Специфическая сенсибилизация развивается с 3—4-го дня заболевания и к концу 3-й недели начинает угасать.
Возбудителя кишечной инфекции идентифицируют путем бактериологического исследования кала и рвотных масс с обязательным определением чувствительности выделенной микрофлоры к антибиотикам. В сомнительных случаях для выявления шигелл и специфических антигенов в фекалиях и крови используют ПЦР и серологические методы (РНГА, РКА, ИФА).
Результаты копрограммы и ректороманоскопии при диагностике дизентерии у детей имеют вспомогательное значение.
Дизентерию у детей необходимо дифференцировать от инфекционных колитов, энтероколитов и гастроэнтеритов другой этиологии: сальмонеллеза, энтеропатогенного эшерихиоза, иерсиниоза, амебиаза, вирусной диареи, а также экссудативной энтеропатии, неспецифических язвенных колитов и болезни Крона.
18. Возбудители холеры. Морфобиологические св-ва. Антигенная структура и классификация.
Холерный вибрион (лат. Vibrio cholerae) — вид грамотрицательных, аэроб, подвижных бактерий рода вибрионов. Vibrio cholerae серогрупп О1 и О139 являются возбудителями холеры и отнесены ко II группе патогенности.
Грамотрицательный вибрион имеет форму палочки размером 1,5—4 × 0,2—0,4 мкм, изогнутой в виде запятой. Подвижен, имеет монотрихиально расположенный жгутик. Не образует спор и капсул.
Хемоорганогетеротроф, факультативный анаэроб. Размножается на простых