Для определения наличия острого токсического действия сточной воды на сбросе в водный объект воду тестируют без разбавления. Если требуется сравнить степень токсичности сточной воды, отобранной из разных мест или в разное время, готовят серию разбавлений (не менее трех).
Объем пробы для биотестирования без разбавления – 500 мл, с учетом разбавлений – 1 л.
Посадку дафний в сосуды для биотестирования проводят следующими способами (возможны и другие): стеклянной трубкой диаметром 0,5–0,7 см отлавливают дафний из культуры, помещают в сачок из планктонного газа, погрузив его в тестируемую воду, переводят в нее дафний, посадку ведут от разбавленной тестируемой воды с большей кратностью к меньшей; стеклянной трубкой отлавливают дафний и вместе с водой, которая попала в трубку, переносят в пустой сосуд для биотестировавния. Затем пастеровской пипеткой отсасывают жидкость и осторожно, чтобы не повредить дафний, приливают отмеренный объем тестируемой воды.
В сосуд наливают по 100 мл контрольной и тестируемой воды или ее разбавлений. Повторность трехкратная. В каждый сосуд помещают по 10 односуточных дафний и экспонируют при оптимальных условиях в течение времени до 96 ч. При кратковременном биотестировании дафний не кормят.
Учет выживших дафний проводят через 1, 6, 24, 48, 72 и 96 ч. Особей считают выжившими, если они свободно передвигаются в толще воды или всплывают со дна сосуда не позднее 15 с после его легкого покачивания. Если в любой учитываемый период времени в сточной воде гибнет 50 и более процентов дафний, биотестирование прекращают.
Для определения наличия хронического токсического действия воды в контрольном и других растворах водного объекта воду тестируют без разбавления. Если требуется сравнить степень токсичности разных проб воды или использовать результаты биотестирования при установлении величин ПДС, готовят серию разбавлений. Определяют минимальную кратность разбавления, при которой хроническое токсическое действие не проявляется.
Объем пробы для биотестирования без разбавления – 1 л, с учетом разбавлений – 2 л.
В сосуды наливают по 300 мл контрольной и тестируемой воды или ее разбавлений. Повторность трехкратная. В каждый сосуд вносят одинаковое количество корма, помещают по 10 двухсуточных самок, дафний экспонируют при оптимальных условиях. Дафний кормят ежесуточно. Три раза в неделю в сосудах с дафниями производят смену контрольной и тестируемой воды на свежеотобранную. При смене воды дафний кормят за 3 ч до смены.
С момента появления молоди, в те сутки, когда меняют воду, производят учет выживших исходных самок и выметанной молоди. Для этого самок с помощью стеклянной трубки пересаживают в заранее приготовленные сосуды с контрольной и тестируемой водой (соответственно) и подсчитывают их количество в каждом сосуде. Оставшуюся воду процеживают через сито из планктонного газа. При этом на сите остается выметанная молодь, которую подсчитывают и удаляют.
После того, как в контроле все исходные самки дадут по четыре помета, биотестирование заканчивают. Время биотестирования сокращается, если при промежуточном подсчете устанавливают достоверное отличие от контроля показателя выживаемости или плодовитости дафний.
Обработка и оценка результатов при кратковременном
Биотестировании
При биотестировании сточной воды на сбросе в водный объект рассчитывают процент погибших дафний в тестируемой воде по сравнению с контролем
А = (Х к – Х т).100 (7.14)
Х к
где Х к – среднее арифметическое количество дафний, выживших в контроле, Х т – среднее арифметическое количество дафний, выживших в тестируемой воде.
Если А ≥ 50%, тестируемая вода оказывает острое токсическое действие, если А < 50%, тестируемая вода не оказывает острого токсического действия на дафний.
Для определения степени острого токсического действия тестируемой воды рассчитывают графическим методом ЛКр50–96 – кратность разбавления тестируемой воды, при которой гибнет 50% дафний за 96 ч; ЛКр0-96 – минимальную кратность разбавления, при которой дафнии не гибнут в течение 96 ч.
На оси абсцисс откладывают логарифмы величин кратности разбавления тестируемой воды, а на оси ординат – средние арифметические величины выживаемости дафний в процентах к контролю. Полученные точки соединяют по прямой. От точек на оси ординат, соответствующих 50 и 100% выживаемости, проводят линии, параллельные оси абсцисс. Из точек пересечения этих линий с экспериментальной прямой опускают перпендикуляры на ось абсцисс и находят логарифмы величин кратности разбавлений, которые будут соответствовать искомым величинам ЛКр50 и ЛКр0.Чем больше величины ЛКр50 и ЛКр0, тем токсичнее тестируемая вода.
Степень токсичности можно также установить, рассчитав ЛТ50 – среднее время гибели 50% дафний в тестируемой воде. Для этого строят график (на оси абсцисс откладывают время наблюдения, на оси ординат – выживаемость в процентах к контролю). Чем меньше ЛТ50, тем токсичнее тестируемая вода.
Результаты тестирования записывают в форме таблицы.