Было принято решение начать исследование этой, пока еще молодой, культуры, во избежание работы со старой, умирающей культурой. Девятидневная культура была признана достаточно хорошо развитой на субстрате для создания различных препаратов для микроскопирования, и в то же время, достаточно молодой для того, чтобы не испытывать чрезмерного спорообразования.
Первой стадией исследования являлся макроскопический осмотр колоний. Ввиду различающейся морфологии колоний на джеме было отмечено наличие ассоциации плесневых грибов, а не чистой культуры. Сперва были описаны колонии желто-черного цвета по краю контейнера. Их характеристика изложена в таблице 8.
Таблица 8 - Макроскопический анализ желто-черной плесени на джеме
| Признак: | Характеристика: |
| Структура мицелия | Шершавые мельчайшие точки |
| Цвет поверхности | Черный |
| Цвет спор | Желтый-бледный коричневый |
Вторым объектом исследования был выбран участок, появившийся на пятые сутки, воздушный мицелий которого напоминает вату. Его характеристика представлена в таблице 9.
Таблица 9 - Макроскопический анализ плесени, с волокнистым мицелием
| Признак: | Характеристика: |
| Структура мицелия | Волокнистый |
| Цвет поверхности | Белый |
| Цвет спор | Коричнево-оранжевый |
Промежуточные результаты указывают, что образцом №1 является представитель рода Aspergillus, а именно Aspergillus niger. Под описание образца №2 подходит вид рода Rhizopus. Для полной уверенности мы провели микрскопирование препарата. Микроскопирование проводилось с помощью техники приготовления культуры на предметном стекле. Для этого была приготовлена среда Чапека, а затем и сами препараты культуры на предметном стекле с помощью скальпеля, препаровальных игл, двух стеклянных палочек, сложенных в форме буквы V, а также фильтровальной бумаги. Полученные препараты инкубировались в термостате в течение 2 суток при температуре +28°C, являющейся оптимальной для обоих предположительных родов (рисунок 26).
Рис. 26. Культуры на предметных стеклах в термостате
По прошествии указанного времени чашки Петри с препаратами были извлечены из термостата и рассмотрены (рисунки 27 и 28).
Рис. 27. Культура на предметном стекле образца №1
Рис. 28. Культура на предметном стекле образца №2
Так как плесени показали хороший рост, их препараты были подвергнуты дальнейшим операциям. Мы удалили покровные стекла с блоков агара, а сам блоки был утилизированы. После были взяты новые стерильные предметные стекла, а на них с помощью пипетки Пастера была нанесена капля метиленового синего. Затем покровные стекла, снятые с блоков агара, были помещены на краситель, с целью создания препарата вида раздавленная капля. Непосредственное микроскопирование препаратов проводилось с помощью двух микроскопов - LCD Micro Bresser, снабженного дисплеем и фильтрами различных цветов; Стандартного монокулярного микроскопа.
Микроскопический анализ первого образца подтвердил, что предполагаемая плесень является одним из видов рода Aspergillus. Мицелий плесневого гриба оказался состоящим из септированных гиф, что является превалирующим для всего отдела Аскомицетов (рисунок 29).
Рис. 29. Септированные гифы образца №1
Но что более важно, была обнаружена структура, являющаяся конидией рода Aspergillus (рисунок 30).
Рис. 30. Конидия без конидиеносца образца №1
Более наглядно представлена конидия на фото с оптического монокулярного микроскопа на общем увеличении x400 (рисунок 31).
Рис. 31. Конидии на конидиеносцах образца №1
Несмотря на окрашивание образцов метиленовым синим, изображения с препаратов образцов представлены в желтом цвете. Это объясняется использованием специальной лампы в качестве источника света для оптического монокулярного микроскопа вместо зеркала. Данная лампа излучала отчетливо желтый свет. Решение заменить зеркало лампой было принято в силу того, что вся работа по микроскопированию проводилась в боксе, в отсутствие близко расположенных окон.
Препарат образца №2 был приготовлен аналогично образцу №1. Были обнаружены главные морфологические признаки, указывающие на принадлежность образца к роду Rhizopus: ценоцитный мицелий (рисунок 32); спорангий, содержащий внутри множество спорангиеспор (рисунки 33 и 34).
Рис. 32. Участок ценоцитного мицелия образца №2
Рис. 33. Спорангий на спорангиеносце образца №2
Рис. 34. Спорангии образца №2
Стоит внести ясность и упомянуть, что несмотря на то, что мицелий у Rhizopus несептированный, в нем иногда встречаются участки гиф, напоминающие септы (рисунок 35). Они называются опорными клетками и из них развиваются спорангиеносцы.
Рис. 35. Опорная клетки внутри гифы образца №2
Полученные данные об образцах подтверждают первоначальные идентификации плесневых грибов вплоть до рода. В итоге мы имеем желанный род Aspergillus, который и будет переноситься на среду в дальнейшем, а также сторонний род Rhizopus, некоторые виды которого так же могут быть патогенными для человека. Исходя из этого отпадает необходимость получения исключительно культуры Aspergillus. Другим плюсом является то, что температура инкубирования обоих родов идентичная и находится в пределе +26 - +30°C. Убедившись в том, что изученные образцы действительно являются представителями родов, необходимых для исследования, мы пересеяли плесневую культуру на среду Чапека и инкубировали в течение недели. Данная культура на чашке Петри будет являться донором в методике ускоренного посева культур микроскопических грибов.