Эфирные масла были приобретены в аптеке, в то время как фитонциды лука и чеснока были получены в виде соков, взятых из одноименных луковиц. Луковицы были очищены от шелухи, а затем измельчены с помощью пресса для чеснока. После этого, мы выжали мякоть, и её сок был пропущен через ватно-марлевый фильтр. Использовалась та же среда Чапека, что и для приготовления культуры на предметном стекле. Было необходимо приготовить 180 мл среды, из расчета 30 мл на одну чашку Петри. Шестая чашка Петри должна была служить контролем и в нее никакие сторонние вещества не добавлялись. Было внесено по 0,15 мл цитотоксичного вещества на каждую чашку Петри. При таком объеме достигалось концентрация растворенного в среде вещества 0,5%. Среда была изготовлена в объеме 200 мл, т.к. бралась во внимание часть среды, которая выкипит во время приготовления. Непосредственно после готовности среды она была разлита по чашкам Петри. После этого с помощью пипетки мы отмеряли эфирные масла (рисунок 36) и фитонциды лука и чеснока и добавляли в еще не затвердевшую питательную среду, после чего тщательно перемешивали круговыми движениями чашки по столу. Пипетка промывалась после каждого добавленного вещества.
Рис. 36. Эфирные масла (слева направо): Анисовое; Коричное; Эвкалиптовое
После затвердевания сред в чашках мы приступили к стадии посева на них культуры. Применяя вышеуказанную методику ускоренного посева, мы смогли справиться с задачей в кратчайшие сроки, после чего поместили все 6 чашек Петри в термостат для инкубирования в течение недели. Первый результат, полученный на третий день инкубирования продемонстрирован на рисунках 37-42.
Рис.37. Среда с добавлением анисового эфирного масла (3 сутки)
Рис.38. Среда с добавлением коричного эфирного масла (3 сутки)
Рис.39. Среда с добавлением эвкалиптового эфирного масла (3 сутки)
Рис.40. Среда с добавлением лукового сока (3 сутки)
Рис.41. Среда с добавлением чесночного сока (3 сутки)
Рис. 42. Среда без добавлений (3 сутки)
На пятые сутки внешний вид культур не претерпел существенных изменений, чего нельзя сказать о сроке в неделю. Семидневный результат представлен на рисунках 43-49.
Рис. 43. Среда с добавлением анисового эфирного масла (7 сутки)
Рис. 44. Среда с добавление коричного эфирного масла (7 сутки)
Рис. 45. Среда с добавление эвкалиптового эфирного масла (7 сутки)
Рис.46. Среда с добавлением лукового сока (7 сутки)
Рис.47. Среда с добавлением чесночного сока (7 сутки)
Рис. 48. Среда без добавлений (7 сутки)
Рис. 49. Среда без добавлений; крышка снята (7 сутки)
На последний день инкубирования двое образцов - анисовое и коричное эфирные масла показали лучший результат, т.к. среды с ними не претерпели изменений. Данные среды выглядели аналогично первому дню, т.е. моменту после непосредственного переноса культуры на среду. Это говорит о высокой степени цитотоксичных свойств и способности полностью остановить спорообразование и развитие грибов, а вместе с тем и производство микотоксинов. Среда с эвкалиптовым эфирным маслом продемонстрировала среднее отклонение от первого результата, что можно интерпретировать как удовлетворительный результат, ведь первые пять дней эфирное масло сдерживало рост Aspergillus, но в итоге уступило анису и корице по своей эффективности. Эффект лука остался без изменений - хорошее подавление роста и спорообразования. Чеснок же на последний день проверки ослабил сдерживание роста плесени до такой степени, что воздушные споры Aspergillus распространились по всей чашке Петри и успешно проросли. Это объясняется слабой степенью очистки по сравнению с эфирными маслами, произведенными в индустриальных условиях. Тем не менее, разница со средой без добавок видна невооруженным глазом, что лишний раз подтверждает наличие у чеснока фунгицидных свойств.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
На основании проведенных исследований были сформированы следующие выводы:
1. Был проведен анализ литературных и электронных источников по темам исследования.
2. Были определены материалы и методы исследования:
- Подготовительные операции;
- Выделение культуры плесневых грибов. Прямые методы;
- Выделение культуры плесневых грибов. Особые методы;
- Микроскопирование плесневых грибов.
3. Были изучены материалы о фитонцидных свойствах лука, чеснока;
4. Были определены особенности следующих эфирных масел: анисовое, коричное, эвкалиптовое.
5. Был изучен род грибов Aspergillus и болезни, вызываемые ими;
6. Были изучены и применены различные методики взаимодействия с микроскопическими грибами.
7. Была экспериментально установлена эффективность фитонцидов и эфирных масел в подавлении жизнедеятельности грибов рода Aspergillus.
На основании инкубирования питательных сред с добавлением различных веществ получены следующие данные, представленные в таблице 10, а также вывод о результатах исследования.
Таблица 10 - Характеристика действующих веществ
| Действующее вещество | МПК (µЛ/Л) | Продолжительность эффекта подавления (перманентный/ обратимый) |
| Анисовое масло (92% анетола) | Перманентный | |
| Коричное масло | Перманентный | |
| Эвкалиптовое масло | >150 | <150-Обратимый; >150 - Перманентный |
| Сок лука | >150 | Перманентный |
| Сок чеснока | >150 | <150-Обратимый; >150 - Перманентный |
Подводя итоги всего исследования можно с уверенностью сказать, что эфирные масла показывают сильный цитотоксичный эффект уже на первые сутки инкубирования, в то время как питательная среда без добавлений не сдерживает как-либо рост микроскопических грибов. Что касается соков, полученных из лука и чеснока, то очевидно, что данные субстанции обладают свойствами, задерживающими и подавляющими рост таких грибов, но в данном эксперименте менее выраженными, чем у эфирных масел. Это связано со слабой степенью очистки и концентрирования соков, а также высоким содержанием посторонних веществ (крупнодисперсные частицы сока) по сравнению с действующими веществами соков - метил метантеосульфинат и 10-диалкенилтиосульфинат. Причиной тому служит примитивный способ получения таких соков - прессование и последующее пропускание полученной жидкости через ватно-марлевый фильтр. В промышленных же условиях они проходят несколько последовательных ступеней, чаще всего включающих какой-либо подвид экстракции и фракционированную конденсацию либо гель-фильтрацию в тандеме с ионно-обменной хроматографией. Тем не менее, даже с несопоставимым эффектом эфирных масел, очевидны свойства лука и чеснока замедлять рост и развитие микроскопических грибов даже в мельчайших дозах, будучи не очищенными, что приравнивается к их состоянию на момент употребления в пищу. Все это повышает ценность лука и чеснока для человека, в частности их профилактическую значимость не только в качестве пищи, но и при ингаляции их соков. Кроме того, данные растения могут применять в приготовлении домашних варений и солений - небольшое количество лукового или чесночного соков, внесенное перед консервированием, может послужить превентивной мерой для развития нежелательной микрофлоры. Последним, но не по значимости, является низкая стоимость съедобных представителей рода Allium по сравнению с товарными формами эфирных масел.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
1. http://lib.podelise.ru/docs/1077/index-6589.html
2.http://www.pandia.ru/text/78/328/3417.php
3. https://www.mdidea.com/products/proper/proper02802.html
4. https://www.mdidea.com/products/new/new00101.html
5. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S187853521400029X
6. https://link.springer.com/article/10.1007/BF03175031
7. https://chemister.ru/Database/words-description.php?dbid=1&id=14
8. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4417289/
9. https://www.highveld.com/microbiology/aspergillus.html
10. https://website.nbm-mnb.ca/mycologywebpages/Moulds/Isolation.html
11. https://website.nbm-mnb.ca/mycologywebpages/Moulds/Cultivation.html
12.https://www.thevintagenews.com/2016/09/24/onions-in-history-in-the-middle-ages-onions-were-so-important-that-people-would-pay-their-rent-with-then-and-give-them-as-gifts-2/
13.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4417289/
14.https://website.nbm-mnb.ca/mycologywebpages/Moulds/Isolation.html
15.https://website.nbm-mnb.ca/mycologywebpages/Moulds/Examination.html
16.https://website.nbm-mnb.ca/mycologywebpages/Moulds/Cultivation.html
17.https://www.mdidea.com/products/new/new00101.html
18.https://www.mdidea.com/products/new/new00102.html
19.https://www.mdidea.com/products/new/new00103.html
20.https://www.mdidea.com/products/new/new00104.html
21.https://www.mdidea.com/products/new/new00105.html
22.https://microbiologyonline.org/teachers/observing-microbes/observing-fungi-in-a-petri-dish
23.https://www.aspergillus.org.uk/content/incubation-fungal-cultures-how-long-long-enough
24.https://dic.academic.ru/dic.nsf/enc_biology/1845/%D0%A0%D0%BE%D0%B4
25. https://www.hindawi.com/journals/jfq/2017/6873651/tab1/
26.https://www.thevintagenews.com/2016/09/24/onions-in-history-in-the-middle-ages-onions-were-so-important-that-people-would-pay-their-rent-with-then-and-give-them-as-gifts-2/
27.Pelczar, M.J., Jr., and E.C.S Chan. Elements of Microbiology. McGraw-HillBook Company, New York; 1981 – с.696;
28.Alexopoulos, C.J., and C.W. Mims. Introductory Mycology, 3rd edition. John Wiley and Sons, New York; 1979 - с.868;
29.Buchanan, R.E., and N.E. Gibbons, eds. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology, 8th edition. The Williams and Wilkins Company, Baltimore; 1974 - с.1268;
30.Mycology Guidebook Committee, Mycological Society of America, Stevens, R.B. Mycology Guidebook. University of Washington Press, Seattle; 1981 - с.736;
31.Singleton, P., and D. Sainsbury. Dictionary of Microbiology. John Wiley and Sons, Chicester; 1978 - с.490;
32.Harold, L.D. Applied and Environmental Microbiology. American Society for Microbiology; 1972 - с.202;
33.Тахтаджян А. Л., Федоров А. А. Жизнь растений: в 6 - ти томах - М.: Просвещение; 1974 - с. 487;