Первым шагом собственных исследований было получение нужных плесневых грибов. Зная особенности метаболизма представителей рода Aspergillus и питательные вещества, в которых они нуждаются, мы приступили к подбору оптимальных субстратов для их выращивания. Самым многообещающим из возможных вариантов оказался абрикосовый джем домашнего приготовления. Такой выбор связан со способностью видов рода расти на средах с высоким осмотическим давлением, чем и является вышеупомянутый джем. Таким образом, происходит селективный отбор плесеней, способных усваивать питательные вещества в такой среде, и более того, исключается загрязнение грибковых культур другими микроорганизмами, такими, как бактерии. Тем не менее, для наглядности разницы в культивируемых родах, и даже отделах, мы использовали и другие субстраты, которые можно отнести к типу «наживок». Одним из таких представителей является лимон, который был поперечно разрезан пополам.
Все субстраты были оставлены на 2 ч на воздухе во время ветра, воздушные потоки которого достигали 12 м/с, после чего были обильно увлажнены дистиллированной водой, помещены в термостат при температуре +28°C, являющейся оптимальной для рода Aspergillus,и накрыты пищевой пленкой, но не плотно, т.к. искомые плесени являются облигатными аэробами. На рисунках 18 и 19 представлены результаты жизнедеятельности плесневых грибов на субстратах спустя сутки после помещения образцов в условия культивирования.
Рис. 18. Лимон (1 Сутки)
Рис. 19. Абрикосовый джем домашнего приготовления (1 Сутки)
По данным изображениям видно, что спустя сутки после двухчасового экспонирования контейнеров на открытом воздухе, получены разные результаты. Лимон на своей поверхности имеет раздельные колонии видные невооруженным глазом, в то время как джем не подвергся визуальным изменениям.
После получения промежуточных результатов, образцы вновь были увлажнены, накрыты пищевой пленкой и помещены в нужную температуру. Спустя двое суток образцы вновь были изучены. На джеме все еще не было заметных изменений, а колонии на лимоне увеличились в размерах и стали соединяться в одну крупную (Рисунки 20 и 21).
Рис. 20. Лимон (3 Сутки)
Рис. 21. Лимон, крупный план (3 Сутки)
Исходя из крупного и стабильного роста плесневых грибов было решено изучить их морфологию, как с помощью макроанализа, так и с помощью микроскопирования приготовленных препаратов. Характеристика колоний представлена в таблице 7.
Таблица 7 - Макроскопический анализ плесени на лимоне
| Признак: | Характеристика: |
| Структура мицелия | Бархатообразные бугорки |
| Цвет поверхности | От бирюзового до зеленого в центре, белый по краям |
| Цвет спор | Зеленый |
Исходя из данных макроскопического наблюдения и общего хода культивирования плесневых грибов и сопоставления с данными, полученными из справочных пособий, специализирующихся на царстве грибов, мы выяснили, что данная плесень является видом Penicillium digitatum. Так как данный вид является раневым паразитом, то это объясняет тот факт, что плесень отсутствовала на неповрежденном лимоне. Кроме того, данный вид выделяет этилен, ответственный за ускорение созревания плода, и последующее его быстрое высушивание и обезвоживание, которое можно заметить на фото третьего дня. Также данному виду свойственен быстрый рост, что объясняет ранний результат на данном субстрате, который не является характерным для Aspergillus и джема. Данных, полученных с помощью макроскопического наблюдения, хватило для того, чтобы убедиться в том, что несмотря на нужныйотдел Аскомицетов, P. digitatum не относится к искомому роду Aspergillus. Данный образец был отсеян и дальнейшим исследованиям не подвергался.
Абрикосовый джем домашнего приготовления продолжал увлажняться, и на 5 сутки была заметна жизнедеятельность микроорганизмов невооруженным глазом (рисунки 22 и 23).
Рис. 22. Абрикосовый джем домашнего приготовления (5 сутки)
Рис. 23. Крупный план воздушного мицелия неопознанного гриба на абрикосовом джеме домашнего приготовления (5 сутки)
На джеме, выдержанном в течение 5 дней в благоприятных для культивируемого рода условиях, наблюдаются отдельные колонии, обладающие заметным воздушным мицелием белого цвета ватной консистенции. Гифы мицелия заканчиваются плодовыми телами черного цвета.
Спустя 2 дня джем стал еще больше покрываться колониями плесневых грибов (рисунок 24). По прошествии еще 2 суток, поверхность джема была почти полностью закрыта колониями (рисунок 25).
Рис. 24. Абрикосовый джем домашнего приготовления (7 сутки)
Рис. 25. Абрикосовый джем домашнего приготовления (9 сутки)