Апикальная часть инвазивного zoites Toxoplasma заполняется 50-100 micronemes (от греческого «малых потоков»). Micronemes часто видел в
272 Toxoplasma Секреторные БЕЛКИ И ИХ РОЛИ В инвазии клеток и внутриклеточное ВЫЖИВАНИЕ
дугообразная узор из-за их ассоциацию с цитоплазматической поверхностью внутренней мембраны комплекса в апикальной области. Эта ассоциация, вероятно, опосредованный путем связывания с микротрубочками, как было недавно показана на P. малярийного (Баннистер и др., 2003).
Первое свидетельство microneme конкретных элементов вперед ориентации сообщает Di Cristina и коллегами (Ди Кристина и др., 2000). Создавая химеру, состоящую из основного поверхностного антигена SAG1 эктодомена, CD46 трансмембранный якорь (ТМ), а область MIC2 цитозольных (CD), они показали, что MIC2 компакт-диск был достаточным для microneme ориентации. Ключевые элементы адресности были сужены до двух мотивов: YHYY, расположенный в непосредственной близости от цитозольной стороны якоря ТМА; и EIEYE, расположенный 11 аа далее вниз по течению. Изменяя эти мотивы вызвали mistar-адресность ФВ, предположительно через плотные GRAN-üles. Несмотря на то, что было предложено, что эти мотивы функционируют как тирозин на основе сигналов сортировки, которые взаимодействуют со средними цепочками (ì-цепь) в пределах адаптера белка (AP) комплексы для сортировки по клатриновых везикул, мотив YHYY является ПРОБА-Блай слишком близко к ТМ якорь, чтобы быть доступным для ì-цепочка связывания. Кроме того, EIEYE (AD...) элемент не соответствует консенсусу YXXFì-цепь фиксирующей последовательности, в отличие от тирозина на основе сигналов видели в rhoptry белков (смотри ниже).
Тем не менее, далее поддержка тирозина на основе мотивов в ориентации на micronemes пришла показывая, что компакт-диск белка лизосом лампы был достаточен для microneme нацеливания и что тирозин в последовательности GYQTI имеет решающее значение, так как мутант, экспрессирующий GAQTI был сохранен в Гольджи-ассоциированный отсек (Hoppe и др., 2000). GYQTI соответствует консенсусной последовательности YXXF, предполагая, что Toxoplasma выражает microneme директивы точки доступа, которые могут распознать этот канонический элемент. Неясно, почему мутация MIC2 CD сортировки последовательности (YHYY и EIEYE) привело к секреции в PV (т.е. ориентации дефектов), тогда как изменение мотива лампы на основе тирозина приводит к удержанию (т.е. дефект торговли людьми), но это по-видимому, отражает тонкая специфика точек доступа, функционирующих на различных этапах пути.
соответствующий Нокаут штамм может дополнительно уточнить их роль в ориентации на micronemes.
Для исследования ориентации элементов в растворимой microneme белка MIC3, Striepen и его коллеги исследовали серию делеционных мутантов MIC3-GFP и показал, что он использует несколько последовательностей таргетинга (Striepen и др., 2001). Несмотря на то, делеция ~ 50 аа С-концевого домена не оказывает никакого влияния на microneme нацеливания, экспрессия только этой области в сочетании с GFP показали окрашивания в соответствии с, по меньшей мере, частичной локализации в microneme. Эти результаты указывают на то, что дополнительные сигналы присутствуют в MIC3. Так как эти результаты были получены в паразитах дикого типа, экспрессирующих эндогенный MIC3, который является гомодимером, способность эндогенного MIC3 взаимодействовать с некоторыми из усеченных форм MIC3 усложняет интер-претацию, особенно когда 65 аа домен С-концевой димеризация подарок.
Новый свет был пролит на сортировочных сигналах MIC3, путем комплементации в mic3KO (Эль-Хадже и Лебрен, неопубликованный). Удаление N-концевого пропептида вызвало mistargeting ФВ, показывая, что MIC3 про-последовательность содержит информацию microneme ориентации. В дополнении к пропептиду, каждый из трех доменов EGF достаточно для доставки к MIC3 micronemes. Кроме того, как димеризации MIC3 и хитин-связывающего как последовательность, которая имеет решающее значение для принимающей клетки связывания являются необязательными для надлежащего нацеливания. Эти данные свидетельствуют о том, что эти два элемента, пропептиды и EGF-подобный домен, вероятно, работать в различных этапах microneme пути. Поскольку пропептид подавляет связывание активности рецептора хитин-связывающего-подобного домен MIC3 в (CBL) (Cerede и др., 2002), этот элемент может облегчить торговлю путем предотвращения нежелательной ассоциации MIC3 с другими белками паразитом в начале пути. В качестве альтернативы, MIC3 пропептид может функционировать путем связывания с рецептором для грузового microneme нацеливания, но на этапе, который ниже по потоку от требований, предъявляемых к другим, ориентированных элементов в MIC3 или его партнера, MIC8. Эти исследования показывают, многофакторный характер microneme адресности.
Reiss и его коллеги показали зависеть друг от друга-ствование microneme белков для торговли и ориентации, показывая, что microneme TM
| MICRONEMES |
Белок MIC6 служит escorter для MIC1 и MIC4 (Reiss и др., 2001). Целенаправленное удаление MIC6 приводит к секреции MIC1 и MIC4 в PV. Вместе с их найти, что MIC6 CD было достаточно, чтобы придать microneme адресности, эти результаты убедительно показывают, что MIC6 использует элементы в его CD для адресности MIC1 и MIC4 к micronemes, тем самым проверяя прежние выводы Di Cristina и др. (2000). Ориентация-ENCE зависеть друг от друга дополнительно раскрывается открытий, что MIC8 является escorter для MIC3 (Meissner и др., 2002а), и аналогично MIC2 для MIC2-ассоциированного белка (M2AP) (Huynh и др., 2004). Эти исследования подтверждают концепцию, что растворимые МИК сопровождают к micronemes путем связывания с ТМ ССД содержат CD-ING вперед ориентированию информации.
Хотя компакт-диски MIC2 и MIC6 достаточны для microneme ориентации, когда изолированно от остальной части белка, некоторые исследования показывают, что растворимые МИК также необходимы для правильного оборота. Так, например, отсутствие MIC1 вызывает остановку на MIC4 и MIC6 в ER / Гольджи, и недостижении в micronemes (Reiss и др., 2001). Точно так же, MIC2 накапливается в ER / Гольджи из m2apKO паразитов (Huynh и др., 2003). Это первоначально предполагалось, что сохранение было связано с признанием ненадо собранного комплекса по системе контроля качества секреторного пути в. Однако более поздние результаты выступают против этого, и освещать роль торговли людьми для пропептиде M2AP способом, похожим на MIC3 рассмотренном выше. Пропептида мутант с делецией (М2ÄPPro), выраженный в m2apKO паразитах, накопленных в отделении для поста-Гольджи, связанное с системой эндосомной, несмотря на правильно oligomeriz-та с MIC2. В совокупности эти результаты указывают, что пропептиды некоторых ССД содержат информацию вперед ориентации, который дополняет тирозина на основе сигналов сортировки, выраженные в компакт-дисках трансмембранных ССД.
Таблица 11.1 суммирует свойства Toxoplasma секреторной microneme белков.
Microneme белки
Т. гондий выражает большой, разнообразный спектр ССД, в том числе трансмембранного и растворимых белков.
Несколько подходы были использованы для идентификации МИКА. Перед секвенирование генома эпохи, МИК были обнаружены с использованием моноклональных антител (MIC1, MIC2, MIC3), с последующим immunoscreen-ков библиотек кДНК (Achbarou и др, 1991a;. Fourmaux и др, 1996;.. Гарсиа-Reguet и др 2000) или иммуноаффинная очистка (Донахью и др., 2000). Секвенирование генома Т. гондий еще лучше, позволила характеристике дополнительного ССДА, либо сходства с МИКАМИ других Apicomplexa (AMA1, MIC2, SUB1) (Wan и др, 1997;. Hehl и др., 2000;. Миллер и др 2001), либо путем поиска трансмембранных доменов и компакт-диски с гомологий, что и TRAP / MIC2 (MIC6, MIC7, MIC8, MIC9, MIC12) (Мейснера и др., 2002а). Новые МИК были идентифицированы с помощью клеточного фракционирования и кальция модулирующих соединений, которые повышают или секреции блок microneme, и N-концевой последовательности (MIC4, MIC5, MIC10, MIC11) (Бриджес и др., 2000; Брехт и др., 2001; Hoff и др., 2001;. Харпер и др, 2004о). Совместное осаждение позволило идентифицировать M2AP (Rabenau и др., 2001). Совсем недавно, высокочувствительные и тарные-Комплексы технологии, такие как 2-DE / МС и ЖХ / ESI-МС-МС добавили новых кандидатов к уже длинный список МИК ранее идентифицированного (Zhou и др., 2005). Это исследование носит лишь ориентировочный характер, так как назначение каждого кандидата в его секреторной отделении не было сделано, но показывает, что белки неизвестной функции составившее-Tute самую многочисленную категорию (54 процентов). Среди гипотетических белков, три обнаруживают значительную гомологию гипотетических белков P. малярийных и некоторые другие были без гомологии белков или доменов в общедоступных базах данных. Харпера и др., 2004а). Совместное осаждение позволило идентифицировать M2AP (Rabenau и др., 2001). Совсем недавно, высокочувствительные и тарные-Комплексы технологии, такие как 2-DE / МС и ЖХ / ESI-МС-МС добавили новых кандидатов к уже длинный список МИК ранее идентифицированного (Zhou и др., 2005). Это исследование носит лишь ориентировочный характер, так как назначение каждого кандидата в его секреторной отделении не было сделано, но показывает, что белки неизвестной функции составившее-Tute самую многочисленную категорию (54 процентов). Среди гипотетических белков, три обнаруживают значительную гомологию гипотетических белков P. малярийных и некоторые другие были без гомологии белков или доменов в общедоступных базах данных. Харпера и др., 2004а). Совместное осаждение позволило идентифицировать M2AP (Rabenau и др., 2001). Совсем недавно, высокочувствительные и тарные-Комплексы технологии, такие как 2-DE / МС и ЖХ / ESI-МС-МС добавили новых кандидатов к уже длинный список МИК ранее идентифицированного (Zhou и др., 2005). Это исследование носит лишь ориентировочный характер, так как назначение каждого кандидата в его секреторной отделении не было сделано, но показывает, что белки неизвестной функции составившее-Tute самую многочисленную категорию (54 процентов). Среди гипотетических белков, три обнаруживают значительную гомологию гипотетических белков P. малярийных и некоторые другие были без гомологии белков или доменов в общедоступных базах данных. высокочувствительные и тарные-Комплексы технологии, такие как 2-DE / МС и ЖХ / ESI-МС-МС добавили новых кандидатов к уже длинный список МИК ранее идентифицированного (Zhou и др., 2005). Это исследование носит лишь ориентировочный характер, так как назначение каждого кандидата в его секреторной отделении не было сделано, но показывает, что белки неизвестной функции составившее-Tute самую многочисленную категорию (54 процентов). Среди гипотетических белков, три обнаруживают значительную гомологию гипотетических белков P. малярийных и некоторые другие были без гомологии белков или доменов в общедоступных базах данных. высокочувствительные и тарные-Комплексы технологии, такие как 2-DE / МС и ЖХ / ESI-МС-МС добавили новых кандидатов к уже длинный список МИК ранее идентифицированного (Zhou и др., 2005). Это исследование носит лишь ориентировочный характер, так как назначение каждого кандидата в его секреторной отделении не было сделано, но показывает, что белки неизвестной функции составившее-Tute самую многочисленную категорию (54 процентов). Среди гипотетических белков, три обнаруживают значительную гомологию гипотетических белков P. малярийных и некоторые другие были без гомологии белков или доменов в общедоступных базах данных. но показывает, что белки неизвестной функции составившее-Tute самую многочисленную категорию (54 процентов). Среди гипотетических белков, три обнаруживают значительную гомологию гипотетических белков P. малярийных и некоторые другие были без гомологии белков или доменов в общедоступных базах данных. но показывает, что белки неизвестной функции составившее-Tute самую многочисленную категорию (54 процентов). Среди гипотетических белков, три обнаруживают значительную гомологию гипотетических белков P. малярийных и некоторые другие были без гомологии белков или доменов в общедоступных базах данных.
11.4.2.1 МИК обмена гомологию с доменами структурных эукариотических белков, участвующих в белок-белок или белок-углеводных взаимодействий
Молекулярная характеристика МИК показала поразительное сохранение структурных доменов, известных в высших эукариотических клетках (таблица 11.1). Эти домены находятся на оба растворимый и трансмембранный ССДЕ, в одном или нескольких экземплярах и в различных комбинациях,
Таблица 11.1 Свойства Toxoplasma секреторные белки - белки microneme
| вычисленный | Сообщение- | ||||||
| Место нахождения/ | МВт | Домены | взаимодействующий | мутант | секреторный | ||
| белок | (КД)1 | (Нет).2 | партнеры | фенотипы | функция | торговля | Рекомендации |
| Microneme | |||||||
| MIC1 | вырождаться | MIC4, MIC6 | Несущественный | Адгезия, | Секретируемый и | Fourmaux | |
| ТМР (2), | белок; KO | складывающиеся, | задний | и другие., 1996; | |||
| галектин типа | мутант | сборка | покрытие | Cerede и др., | |||
| домен | менее инвазивные | из | 2005; | ||||
| и менее | MIC1 / 4/6 | Saouros | |||||
| вирулентными в | сложный | и другие., | |||||
| мышей | |||||||
| MIC2 | A / I-домен, | M2AP | Эфирные белки; | Escorter, | секретированный | Каррузерс | |
| ТМР (5), | С-концевой | адгезия | а также | и другие., | |||
| вырождаться | сокращение | задний | 1999b; | ||||
| ТМР (1), | мутант | покрытие | Huynh и др., | ||||
| ТМ (1) | нежизнеспособный; | 2004; | |||||
| замена | Джьюетт и | ||||||
| с Егтепом | Сибли, | ||||||
| MIC1 является | 2004; Ван | ||||||
| жизнеспособными, но | и другие., 1997 | ||||||
| менее инвазивные | |||||||
| MIC3 | CBL, ЭФР (5) | MIC8 | Несущественный | прилипание | Секретируемый и | Гарсия-Reguet | |
| (90 димера) | белок; | задний | и другие., 2000; | ||||
| KO мутант | покрытие | Cerede и др., | |||||
| уменьшила | 2002, 2005 | ||||||
| вирулентность | |||||||
| у мышей | |||||||
| MIC4 | Pan / Apple (6) | MIC1, MIC6 | Несущественный | Секретируемый и | Брехт и др., | ||
| белок | задний | 2001; | |||||
| покрытие | Reiss и др., | ||||||
| 2001; | |||||||
| Бриджес и | |||||||
| Каррузерс, | |||||||
| неопубликованный |
| 274 Toxoplasma Секреторные БЕЛКИ И ИХ РОЛИ В инвазии клеток и внутриклеточное ВЫЖИВАНИЕ |
| MIC5 | Parvulin типа | Несущественный | секретированный | Бриджес и др., | |||
| PPIase мотив | белок; KO | а также | 2000; 2006 | ||||
| мутантные шоу | задний | ||||||
| приподнятый | покрытие | ||||||
| расщепление белков | |||||||
| из другого | |||||||
| секреторный | |||||||
| белки | |||||||
| MIC6 | ЭФР (3), | MIC1, MIC4 | Несущественный | Escorter | Reiss и др., | ||
| кислый | белок | ||||||
| MIC7 | ЭФР (5), | Мейснер | |||||
| ТМ (1) | и другие., 2002a | ||||||
| MIC8 | CBL, ЭФР (10), | MIC3 | Мейснер | ||||
| ТМ (1) | и другие., 2002a | ||||||
| MIC9 | ЭФР (3), ТМ (1) | Мейснер | |||||
| и другие., 2002a | |||||||
| MIC10 | секретированный | Гоффа и др., 2001 | |||||
| MIC11 | Сильный заряд | секретированный | Харпер и др., | ||||
| асимметрия | 2004a | ||||||
| MIC12 | ЭФР (31), | секретированный | Опиц и др., | ||||
| (Ts3273) | ТМР (4), ТМ (1) | ||||||
| AMA1 | Pan / Apple (2), | Ron2, RON4, | существенный | MJ | Секретируемый; | Донахью и др., | |
| ТМ (1) | RON5 | белок; | организация | обнаруженный | 2000; | ||
| условный | на обоих | Hehl и др., | |||||
| сбить | внешние и | 2000; | |||||
| мутант | внутренний | Александр | |||||
| можно прикрепить | регионы | и другие., 2005; | |||||
| но не могу | вторгшийся | Howell и др., | |||||
| проникать; | паразиты; | 2005; | |||||
| не в состоянии | видны | Mital и др., | |||||
| организовать | МЮ в | ||||||
| МЮ | условный | ||||||
| сбить | |||||||
| мутант | |||||||
продолжение
| MICRONEMES |
Таблица 11.1 Свойства Toxoplasma секреторные белки - microneme белки-продолжение
| вычисленный | Сообщение- | ||||||
| Место нахождения/ | МВт | Домены | взаимодействующий | мутант | секреторный | ||
| белок | (КД)1 | (Нет).2 | партнеры | фенотипы | функция | торговля | Рекомендации |
| M2AP | Бета, катушка | MIC2 | Несущественный | Секретируемый и | Rabenau и др., | ||
| белок; KO | задний | 2001; | |||||
| мутантные показывает | покрытие | Huynh и др., | |||||
| дефекты в MIC2 | |||||||
| торговли людьми; | |||||||
| несовершенный | |||||||
| прикрепление | |||||||
| и вторжение | |||||||
| SUB1 | Subtilase, | Несущественный | расщепление белков | Секретируемый и | Миллер и др., | ||
| GPI | белок | задний | 2001; связующее вещество | ||||
| покрытие | и Ким, 2004; | ||||||
| Бриджес и др., | |||||||
| ROM1 | Ромбовидная, | расщепление белков | Brossier | ||||
| ТМ (7) | и другие., 2005; | ||||||
| Доус и др., | |||||||
1На основе полной открытой рамки считывания в том числе сигнальной последовательности или сигнала якоря GPI, если таковой присутствует.
2Сокращения: CBL, хитин-связывающий домен, как; ЭФР, эпидермальный фактор роста; ТМР, тромбоспондин типа 1 повтор; TM, трансмембранный.
| 276 Toxoplasma Секреторные БЕЛКИ И ИХ РОЛИ В инвазии клеток и внутриклеточное ВЫЖИВАНИЕ |
| MICRONEMES |
так что каждый МИК белок является структурно уникальным. Репертуар ССДА в Т. гондии представляет собой мозаику из белков, некоторые из них обмен ортологов в другой Apicomplexa. Некоторые из этих консервативных структурных доменов известны в высших эукариот, чтобы нести ответственность за белок-белок или углевод-белковых взаимодействий. Клеточной поверхности-связывающие свойства МИК был демон-strated (MIC1, MIC2, MIC3) (Fourmaux и др, 1996;.. Каррузерс и др 1999b; Гарсиа-Reguet и др., 2000), но наличие таких домены систематически не связаны с функцией крепления (например, MIC4 и MIC6, которые не непосредственно связывать рецепторы хозяина) (Saouros и др., 2005). В этом разделе рассматриваются различные структурные домены, найденные в МИК;
I- или А-домен MIC2 это единственный белок характеризуется токсоплазмы, как известно, обладают этим доменом (Ван и др., 1997). MIC2 является членом семейства TRAP, высоко консервативен среди филюма (Робсон и др, 1988;.. Спана и соавт, 1998; Clarke и др., 1990). Он имеет единственный интегрин, как A-домен. Этот домен присутствует вα-цепь некоторых интегринов, которые являются 1-го типа интегральные мембранные белки, которые способствуют клетка-клетка и клетка-extracel-lular матрица (ECM) контакты (Pytela, 1988;. Larson и соавт, 1989). Подобный домен также найдены в различных белков плазмы крови (например, фактора фон Виллебранда), в растворимых белков матрикса, так и в белков, участвующих в межклеточных и клетка-ЕСМ матричных взаимодействий во гомеостаза, воспаления или клеточной Migra-ции (Whittaker и Hynes, 2002). Эти домены связываются с различными лигандами, в том числе ламинина, коллагенов, фибронектина, ICAM-1, а также Комплексы-ние iC3b продукта. Уникальная особенность А-доменов является то, что они обладают зависимой adhe-Sion сайта (MIDAS) мотивом иона металла, состоящим из пяти несмежных аминокислот (Lee и др., 1995). В пробирке анализах связывания с несколькими различных предполагаемыми рецепторами показали, что MIC2 А-домен специфически связывается с гепарином (Harper и др., 2004b), повсеместно сульфатированным протеогликан найдено во внеклеточном матриксе (ECM). Эта связь не зависит от сайта MIDAS, функция также
наблюдается для связывания α2β1 интегрин в ламинин (Dickeson и др., 1998), а также в области фальципарума TRAP П. с гепарином (McCormick и др., 1999). В противоположности этому, значительная потеря инфекционности и хост-клетки инвазии наблюдается для P. berghei спорозоитов, выражающей TRAP мутантной на сайте MIDAS (Matuschewski и др., 2002), шоу-ная важность области в этом Func-ции, и предполагая, что его функция по меньшей мере, частично MIDAS-зависимой. Гомология моделирование на основе структурный анализ TRAP А-домен был выявлен кластер основных остатков на поверхности, что, вероятно, придает гепарин-связывающей способностью (Akhouri и др., 2004). Он также показывает пространственное separa-Тион предполагаемого гепарин-связывающего сайта из MIDAS области, что свидетельствует о том, что эти различные молекулярные поверхности могут быть вовлечены в RECOG-определению множества рецепторов (Akhouri и др., 2004). В последнее время было показано, что TRAP-А-домен взаимодействует с фетуиновым-А на мембранах гепатоцитов, и что это взаимодействие повышает способность паразита к вторжению гепатоцитов (Jethwaney и др., 2005). В Т. гондиях, MIC2 связывается с ICAM-1 и это взаимодействие облегчает миграцию через поляризованные эпителиальные клетки (Барраган и др., 2005).
Тип Тромбоспондин домен 1 повтор Тромбофлебит-bospondin типа 1 повтор (TSR) домен обнаружен в шести тандемных копиях в MIC2 и в двух экземплярах MIC1 (Fourmaux и соавт, 1996;.. Ван и соавт, 1997), с одним вырожденным мотивом в каждом конкретном случае. Домен ТМР присутствует во многих белков из отдаленное родственных организмов. Эти белки, как правило, участвуют в клетка-клетка и клетка-матрикс взаимодействий (Лоулер, 1986) в свертываемости или врожденного иммунитета (Хефлигер и др., 1989). Этот домен позволяет тромбоспондин и пропердину связывать сульфатированный сахар, и особенно гликозаминогликаны (ГАГА) (Холт и др, 1990;. Чен и др., 2000). Он также показывает высокое сродство к гепарину (Го и др., 1992).
Там нет никаких сообщений о функции для домена TSR из MIC2. Однако, в Plasmodium, домен TRAP ТМР связывает сульфат гепарана Proteo-гликан на поверхности гепатоцитов в естественных условиях и в пробирке (Мюллер и др., 1993). Важность взаимодействия сульфата TRAP TSR-гепаран в инвазии хост-клеток путем Plasmodium спорозоитов был
278 Toxoplasma Секреторные БЕЛКИ И ИХ РОЛИ В инвазии клеток и внутриклеточное ВЫЖИВАНИЕ
продемонстрировано Matuschewski и сотрудниками (Matuschewski и др., 2002). Недавние структурные данные о TSP-1 тромбоспондина (Tan и др., 2002) предполагают, что MIC2 TSR вероятно, образуют расширенный «стебелек», на котором А-домен сидит, оптимально принудительный tioned для взаимодействия с рецепторами хозяина. Несмотря на то, домен ТМР по-видимому, участвуют во взаимодействии с M2AP (Harper и Каррутерсом, неопубликованный), дополнительные исследования будут необходимы, чтобы определить, также ли он связывается с рецептором хост-клеток.
MIC1 представляет собой мономерный белок, который связывается с поверхностью фибробластов в пробирке (Fourmaux и др., 1996). клеточная адгезия свойство MIC1 требует Pres-Ence оба интактных доменов TSR (Saouros и др., 2005). Кроме того, тандемные TSR домены также ответственны за взаимодействие между MIC1 и MIC4 (Saouros и др., 2005).
эпидермального фактора роста-подобный домен эпидермальный фактор роста-подобные (EGF) домены найдены в большом разнообразии белков, в основном животного происхождения (факторы роста, рецепторы липопротеинов, селектины, факторы свертывания, белки внеклеточного матрикса и т.д.) и часто встречаются в тандеме повторяются с различным степени сохранения. Функциональное значение этих областей еще не понял. Общей чертой этих повторных доменов является то, что они находятся в внеклеточной части трансмембранных белков или секретируемых белков, участвующих в белковых взаимодействий (Appella и соавт, 1988;. Дэвис, 1990). EGF домены содержат шесть остатков цистеина, которые образуют дисульфидные мостики. Длины суб-домена между цистеинов широко варьироваться. Некоторые EGF-подобные домены обладают способностью связывать кальций, и поэтому называются EGF (cbEGF) домены связывания кальция. cbEGF домены образуют более жесткие, Протеаза-стойкие структуры при связывании кальция, как недавно показано для белка Eimeria EtMIC4 (Periz и др., 2005) - трансмембранный белок, содержащий 31 ЭФР-подобных доменов и 12 TSR (. Tomley и др, 2001). По аналогии с доменом TSP из MIC2, это свойство может помочь сформировать удлиненный стебель-подобную структуру, чтобы максимально проецировать cbEGF-содержащих белков с клеточной поверхности.
EGF-подобные домены находятся в apicomplexan ССД и резидентных поверхностных белков
Plasmodium (Tomley и Сольдати, 2001). Четыре из EGF-содержащих белков в T.gondii, находятся в транс-мембраны (MIC6, MIC7, MIC8 и MIC9) (Мейснера и др., 2002a), а последний растворим (MIC3) (Garcia-Reguet и др., 2000). MIC3, MIC6 и MIC8 выражаются тахизоитами и bradyzoites (Garcia-Reguet и др., 2000;. Мейсснеровский и др, 2002о), в то время как MIC7 и MIC9 преимущественно выражены bradyzoites (Мейснер и др., 2002a).
A Toxoplasma ортолог EtMIC4 существует в базе данных ToxoDB. Этот белок, вероятно, соответствует Т. гондий MIC12, так как выведенная аминокислотная последовательность является практически идентичной частичной последовательности MIC12, опубликованной Опитцем и коллегами (Опитцем и др., 2002).
Участие ВПК ЭФР-подобных доменов во взаимодействии этих белков с клеткой-хозяином не было показано. В MIC3 EGF-подобные домены не вовлечены в MIC3 связывание с клетками. Они, однако, могут быть вовлечены в соответствующей экспозиции сайта связывания MIC3 находится в хитин-связывающим-подобный домен (Cerede и др., 2002). MIC6 содержит три EGF-подобных доменов, но не связывается с клетками (Saouros и др., 2005). Этот EGF-подобные домены, вероятно, позволят сформировать гетеромерные МИК белковые комплексы. Например, MIC6 ассоциируется с MIC1 через свой третий EGF-подобный домен (Reiss и др., 2001).
модуль PAN / Apple Модуль Apple, содержит законсервированное ядро трех дисульфидных мостиков. В некоторых членах семьи, дополнительный дисульфидный мостик связывает N- и С-концы домена. Это позже тип обычно наблюдается у тандемных повторов (Tordai и др., 1999), и опосредует белок-белок или белок-углеводных взаимодействий. Он находится в N-концевом домене членов семейства факторов Plas-minogen / роста гепатоцитов, в плазме прекалликреин / коагуляции фактора XI семейства (Tordai и др., 1999), в различных нематод белков, и, в последнее время, в apicomplexan MIC белки (Brown и др., 2001). Домены Apple, плазмы прекалликреина, как известно, опосредуют его связывание с высокой кининоген молекулярной (Herwald и др., 1996), а также домены Apple, фактора XI, связываются с фактором XIIa, тромбоциты, кининоген, фактор IX, и гепарин (Ho эт и др., 1998).
| MICRONEMES |
описан в первый раз в MIC4 через поисковые-кий гомологии последовательностей (Брехт и др., 2001). Он также находится в micronemes двух других Apicomplexa: Eimeria tenella MIC5, который содержит 11 яблочные домены (. Brown и соавт, 2000), а также Sarcocystis Muris лектина (СМЛ), который содержит 2 из этих областей (Klein и др., 1998). Брехт и его коллеги предположили, что MIC4 может быть адгезина (Брехт и др., 2001), но это было основано на клеточно-связывающей активности в MIC1 / MIC4 комплекса. Последующие исследования показали, что MIC4 непосредственно не связывают клетки-хозяева, и что MIC1 является respon-ливает распознавания рецептора (Лоуренсу и др., 2001; Saouros и др., 2005).
Домен Apple, является подсемейство модуля PAN, который недавно был обнаружен в AMA1 (Писарро и др., 2005), A microneme белок, обнаруженный у всех видов Plasmodium и, по крайней мере, шесть других Apicomplexa, в том числе Т. гондий, Neospora сатпит, Sarcocystis neurona, Eimeria tenella, Babesia Бови и Theileria. Кристаллическая структура полного эктоплазматических области П. трехдневный AMA1 показывает свою организацию на три домена, как ранее предсказана из шаблона формирования цистеина-мост. Основные домены I и
II основаны на PAN складной мотив. Струк-Турал гомологии между доменами I и II предполагает, что они, вероятно, продукт гена DUPLI-катиона, но с тех пор расходились значительно. Домен III не вписывается в любой известной в настоящее время складку (Наир и др., 2002). Как правило, низкое сходство последовательностей между PAN доменами, отсутствие обычного цистеином подписи в AMA1, а также введение дополнительных сегментов в PAN Scaf раз доменов I И II объяснить, почему эту структурная гомология не были первоначально признаны от первичной последовательности. Же картина остатков цистеина и остатков, играющих важную роль в трехмерной структуре PvAMA1 также Pres-лор в Т. гондий AMA1 (Chesne-Seck и др., 2005). Эритроциты связывания были получены на COS-7 клеток, экспрессирующей конструкцию, содержащие домены I и II из P. yoelii AMA1 (Фрейзер и др., 2001). Тем не менее, другие исследования не смогли продемонстрировать связывание Plasmodium AMA1 к клеткам-хозяевам (Howell и др., 2001). В Т. гондиях прямых доказательства функции Реджеп-тор-связывающей не были получены.
Протеомный анализ секреторных продуктов в T.gondii, показывает четыре дополнительных белков, содержащих ПАН / Apple домены (Zhou и др., 2005). Хотя данные масс-спектрометрии были неспособны Distin-сящийся между этими очень тесно связаны белками, только один член этого семейства (соответствует TgTwinScan_2359) обильно выражается в тахизоитов на основе данных EST. Избыточная экспрессия этого белка, слитого с YFP показали лишь частичное совместная локализация с micronemes, но этот необычный узор может быть частично обусловлено использованием heterol-ogous промотора (Zhou и др., 2005).
Хитин-связывающего подобный домен MIC3 и MIC8 содержат в своем N-концевой области домена Гомол-ogous к одной найденной в хитин-связывающих белков («Hevein домена» или «хитин-связывающий» мотив), а затем несколько EGF-подобных доменов (Garcia-Reguet и др., 2000;. мейсснеровское и др, 2002а). Этот хитин-связывающим типа (CBL) домен также найден в tenella белка Е. (Et_v1_Twnscn_Contig4083.tmp1) (www.sanger.ac.uk/Projects/E_tenella/). Хитин-связывающий домен является достаточно консервативным 30-40 аа простирания содержатся в растениях и грибов (Райт и др., 1991). Он специфически связывается с N-ацетил глюкозамина oligosac-charides, и участвует в сшиванием хитина субъединиц. Один из самых известных лектин растений являются зародыши пшеницы агглютининов (WGA), гомодимер белком. Каждая субъединица содержит четыре повтора домена CBL (Wright и Kellogg, 1996), к