Определение желчных пигментов в моче ( желчные пигменты , уробилиноген , желчных кислот)

Билирубин образуется при распаде гемогло­бина в клетках ретикулоэндотелиальной системы (РЭС), особенно в селезенке и в купферовских клетках печени. У взрослого человека в сутки образуется примерно 250-350 мг билирубина.

Билирубин в плазме крови связан с альбуми­ном. Это неконъюгированный, свободный, непря­мой билирубин. Неконъюгированный билиру­бин не растворим в воде и не может проникнуть через неповрежденный почечный фильтр. В пе­чени билирубин отделяется от альбумина и пере­ходит на синусоидальную поверхность гепатоци-тов. В клетках печени свободный билирубин под­вергается энзиматической конъюгации с глюкуроновой кислотой и превращается в билирубин-моно- и билирубиндиглюкоронид (конъюгиро-ванный, прямой или связанный билирубин). Конъюгированный билирубин водорастворим, он поступает с желчью в желчный пузырь, где под воздействием дегидрогеназ частично восстанавли­вается в мезобилирубин и iуробилиноген. Уpo-билиноген вместе с остальным билирубином по­ступает через общий желчный проток в двенадца­типерстную кишку, где теряет глюкуроновую кис­лоту, всасывается слизистой двенадцатиперстной кишки и проксимального отдела тонкой кишки; по системе воротной вены вновь возвращается в печень и в печеночных клетках окисляется до дипирролов.

Мезобилирубин и билирубин поступают в толстую кишку, где под воздействием нормаль­ной кишечной флоры восстанавливаются до бес­цветного стеркобилиногена. В дистальном отде­ле толстой кишки основное количество стерко­билиногена окисляется в стеркобилин, который окрашивает каловые массы в различные оттен­ки коричневого цвета. Незначительная часть стеркобилиногена всасывается слизистой тол­стой кишки и через геморроидальные вены и нижнюю полую вену поступает в почки и филь­труется через почечный фильтр в мочу. Мини­мальное количество конъюгированного билиру­бина (7-20 мкг/кг в сутки), выделяемое с мочой, не определяется качественными методами. Желтуха (иктеричность кожи и видимых слизистых) появляется тогда, когда количество билирубина в плазме крови превышает пороговое: и составляет примерно 34 мкмоль/л (или 20 м этом билирубин начинает связываться эластическими волокнами кожи и конъюнктивы.

В зависимости от механизма образования: различают следующие виды желтух:

подпеченочная или механическая (обтурационная) - обусловленная обструкцией желчных путей;

печеночно-клеточная или внутрипеченочная (паренхиматозная или гепатоцеллюля обусловленная поражением паренхимы печени.

3)гемолитическая - надпеченочная или печеночная

Моча здоровых людей содержит минимальные количества би­лирубина, которые не могут быть обнаружены качественными пробами, применяемыми в практической медицине. С мочой вы­деляется только билирубина глюкуронид (прямой билирубин), концентрация которого в норме в крови незначительна.

Билирубинурию наблюдают главным образом при пораже­ниях паренхимы печени (паренхиматозных желтухах) и наруше­нии оттока желчи (обтурационных желтухах).

Для гемолитической желтухи билирубинурия нехарактерна, так как гемобилирубин (непрямой билирубин) не проходит через почечный фильтр.

Большинство качественных проб для обнаружения билиру­бина в моче основаны на его превращении под действием окис­лителя в зеленый биливердин или пурпурно-красные билипурпурины, которые, примешиваясь к биливердину, дают синее окрашивание.

Работа № 14 Унифицированная проба Розина

Реактив: 1 % спиртовой раствор йода.

Ход определения. В пробирку нали­вают 2-3 мл мочи и осторожно по стенкам пробирки наслаивают раствор йода. Появление на границе между жидкостями зеленого кольца говорит о наличии билирубина.

Работа № 15 Унифицированная проба Фуше

Ре­активы. 1. 15% раствор хлорида бария. 2. Ре­актив Фуше: 25 г трихлоруксусной кислоты растворяют в 100 мл дистиллированной воды и приливают 10 мл 10 % раствора хлорного же­леза (FeCb).

Ход определения. К 10 мл мочи при­бавляют 5 мл 15 % раствора хлорида бария. Смешивают, фильтруют. На вынутый из воронки и расправленный на дне чашки Петри фильтр наносят 2 капли реактива Фуше. Появление на фильтре сине-зеленых пятен говорит о присут­ствии билирубина. Если реакция мочи щелоч­ная, то необходимо подкислить ее несколькими каплями уксусной кислоты.

Клинико-диагностическое значение: Билирубинурию наблюдают главным образом при поражениях паренхимы печени и нарушении оттока желчи.

Определение содержания уробилиноидов

В моче здорового человека содержатся следы уробилиногена, а за сутки выделяется не больше 6 мг, у детей — не более 2 мг.

В свежевыпущенной моче содержится уробилиноген, кото­рый при стоянии мочи окисляется в уробилины. Все эти вещест­ва являются производными билирубина и называются уробилиноидами.

Уробилиноиды образуются под действием ферментов бакте­рий и клеток слизистой оболочки кишечника из билирубина, вы­делившегося с желчью.

Определение уробилина имеет большое клиническое значе­ние. Присутствие его в количествах, превышающих норму, мо­жет быть при гемолитических состояниях (таких как гемолитиче­ская желтуха, гемоглобинурия, некоторые инфекции, например малярия и др.), при заболевании печени (гепатитах, циррозе пе­чени, отравлениях и пр.), при кишечных заболеваниях и лихора­дочных состояниях, что связано с токсическим поражением пе­чени. Большое диагностическое значение имеет исследование уробилина в моче при желтухах.

Полное отсутствие уробилина указывает на обтурационную желтуху. Повышение содержания уробилина обнаруживается при паренхиматозной и гемолитической формах желтух.

Работа № 16 Унифицированная проба Богомолова

Принцип метода

Уробилин с сульфатом меди образует соединение красно-ро­зового цвета.

Необходимые реактивы

Меди сульфат, насыщенный раствор: 23 г CuS0₄ X 5Н₂0 раст­воряют в 100 мл дистиллированной воды.

Хлороформ.

Ход исследования

К 10—15 мл мочи приливают 2—3 мл насыщенного раствора сульфата меди.

Если образуется помутнение, то прибавляют несколько капель концентрированной НС1 до прояснения раствора. Через 5 мин приливают 2—3 мл хлороформа и, закрыв пробирку пробкой, не­сколько раз встряхивают.

Если хлороформ окрашивается в розовый цвет, то концентра­ция уробилина в моче выше нормальной.

Работа № 17 Унифицированная проба Флоранса

Принцип метода

С HG1 уробилин образует соединение, окрашенное в красный цвет.

Необходимые реактивы

1.Серная кислота концентрированная.

2.Диэтиловый эфир.

3.НС1 концентрированная.

Ход исследования

Мочу в количестве 8—10 мл подкисляют в пробирке 8—10 кап­лями концентрированной серной кислоты, перемешивают, затем приливают 2—3 мл эфира и, закрыв пробирку пробкой, несколь­ко раз осторожно пропускают эфир через слой мочи для экстраги­рования уробилина. Затем эфирную вытяжку мочи наслаивают, лучше пастеровской пипеткой, на 2—3 мл концентрированной НС1, налитой в другую пробирку. При наличии уробилина на гра­нице жидкостей образуется розовое кольцо. Интенсивность окрас­ки пропорциональна количеству уробилина.

Проба настолько чувствительна, что даже в норме на границе между двумя жидкостями видно легкое розовое окрашивание. Этой пробой можно установить полное отсутствие уробилино­идов в моче.