При этой оценке свободный гормон сначала экстрагируется посредством связи со специфическими антителами (первая ступень); антитела часто фиксированы на полимерном носителе. После промывания добавляются меченые следовые количества гормонов, которые связываются с незанятыми участками. Концентрация свободного гормона будет обратно пропорционально связана с следовыми количествами гормонов, связавшихся с антителами, и его уровни определяются посредством сравнения со стандартной кривой. Величины, полученные с применением данной методики, сравнимы с величинами, полученными с использованием прямых методов. Данный метод наиболее показателен в присутствии циркулирующих ингибиторов связывающих белков и в сыворотках пациентов с нетиреоидными заболеваниями.
Измерение и оценка свободного Т4
Лучший метод для измерения тиреоид-зависимого
метаболического статуса - это измерение свободного сывороточного Т4 посредством равновесного диализа. При этом методе на уровень свободного Т4 не влияют изменения концентрации связывающих
Исследование функции щитовидной железы
белков или нетиреоидные расстройства. К сожалению, метод равновесного диализа достаточно дорогой и громоздкий и поэтому не используется в качестве рутинного. Коммерческие наборы для определения уровня свободного Т4 обычно используют иммунологические методики, но их надежность меньше оптимальной, так как они могут изменяться при заболеваниях или значительных изменениях концентраций связывающих белков. Таким образом, клиническое использование измерений свободного Т4 посредством любых методов может быть ограничено.
Хотя тиреоид-зависимый метаболический статус лучше всего отражается уровнем свободного Т4, с клинической точки зрения адекватной является оценка (или индекс) свободного Т4 (ИСТ4). Индекс свободного Т4 получают посредством экстраполирования уровня общего сывороточного Т4 к определенному непрямым методом уровню ТСГл. Сывороточный уровень ТСГл определяется одним из двух методов, один из которых называется тест связывания тиреоидных гормонов (ТС), а другой - тест связывания Т3 (Т3ТС). Индекс свободного Т4 (ИСТ4) рассчитывается из коэффициента общего Т4 и ТС или из расчета Т4 и Т3ТС. Значение ТС прямо пропорционально уровню ТСГл в сыворотке, тогда как значение Т3ТС обратно пропорционально уровню ТСГл. Результаты, полученные с использованием этих методов, ценны тем, что различия в уровнях сывороточного ТСГл элиминируются и рассчитанный ИСТ4 точно отражает действительный уровень свободного Т4. Например, если проводится Т3ТС, то ИСТ4 может быть рассчитан следующим образом: ИСТ4=Т4(Т3ТС измеренный/Т3ТС средний нормальный).
Нормальные пределы Т3ТС могут колебаться на уровне 25-35%; составляя в среднем 30%. Необходимо отметить, что значительные изменения уровней ТСГл или наличие тяжелых нетиреоидных расстройств могут приводить к несоответствию между рассчитанными и измеренными уровнями свободного Т4.
Измерение общей и ненасыщенной емкости связывания тиреоидных гормонов - суммарная связывающая способность транспортных белков сыворотки
Поскольку концентрация тиреоидных гормонов в сыворотке зависит от их поступления в той же степени, как и от содержания гормон-связывающих сывороточных белков, оценка последних удобна при интерпретации уровней, полученных в результате измерений общей концентрации гормона. Эти результаты могут быть использованы для оценки концентрации свободного гормона, которая важна для дифференцирования изменений общей сывороточной концентрации гормона, обусловленной изменениями концентрации связывающих белков у эутиреоидных пациентов, от изменений, вызванных нарушениями активности щитовидной железы, приводящих к гиперметаболизму или гипометаболизму.
Исследование функции щитовидной железы
Измерение уровня ТСГл
Концентрация ТСГл в сыворотке может быть измерена либо посредством оценки их общей способности связывания Т4 при насыщении, либо измерены непосредственно иммунологическими методиками. Хотя методы насыщения обеспечивают точную информацию об общей связывающей способности отдельных белков, они являются весьма громоздкими, а их использование утомительным. Суть методов заключается в разделении меченых радиоактивным йодом Т4 среди транспортных белков сыворотки (ТСГл, транстиреин и альбумин), разделяемых затем электрофоретически и определяемых по конкурентному замещению немеченым тироксином. Величины могут варьировать в соответствии с условиями электрофореза, в частности, с типом используемого буфера и рН. Принятые нормы содержания ТСГл для взрослых составляют 14-27 мкг/100 мл сыворотки (180-350 ммоль/л). Метод простого насыщения, использующий ионнообменные носители, по сравнению с электрофорезом, доступен для рутинного исследования в клинических лабораториях.
Иммунологические методы для прямого измерения содержания белков также доступны. Концентрация ТСГл в сыворотке может быть определена методами РИА и посредством метода «ракетного» иммуноэлектрофореза по Лоури, радиальной иммунодиффузией или ферментным иммуноанапизом. Еще один метод комбинирует связывание гормона с ТСГл и иммунологические методики. Методы, используемые в коммерческих наборах, доступны для количественного определения сывороточного ТСГл и используют с различными модификациями технические принципы, описанные выше. Некоторые используют конкурентное разделение меченого радиоактивным йодом гормона мэцпу эндогенным ТСГл и добавленной антисывороткой к гормону; другие используют специфическую ТСГл сыворотку и Т4 или связанный ТСГл меченый гормон в качестве метки. Абсолютная концентрация в сыворотке взрослого человека в норме варьирует в соответствии с чистотой используемых стандартов. Истинный средний уровень ТСГл - 1,8 мг/100 мл (260 ммоль/л) с пределами 1,1-2,2 мг/100 мл (180-350 нмоль/л) сыворотки.
Концентрация ТСГл в сыворотке варьирует в зависимости от возраста, пола, беременности и постурального статуса. Определение концентрации этих белков в сыворотке частично помогает в оценке значительных отклонений от нормы, также как и при врожденных нарушениях ТСГл. В большинстве случаев тест связывания тиреоидных гормонов in vitro вместе с определением уровня сывороточного ОТ4 позволяет оценить концентрацию ТСГл. Данные могут быть получены из коэффициента теста Т3ТС, выраженные как процент нормального контроля и уровня сывороточного ОТ4, образуя ТСГл-индекс.
Исследование функции щитовидной железы