7.2.1 Определение токоферолов (витамина Е)
Метод основан на реакции окисления токоферолов хлоридом железа FeCl3. Окисление протекает количественно при комнатной температуре в течение нескольких минут. В результате реакции токоферолы окисляются до хинонов, а железо восстанавливается от степени окисления +3 до степени окисления +2. О количестве токоферолов судят по количеству образовавшегося Fe2+ , которое определяют по интенсивности окраски комплекса с а,а1 – дипиридилом. Предварительно из экстракта выделяют неомыляемую часть, в составе которой находятся подлежащие определению токоферолы.
7.2.1.1 Методика выделения неомыляемой части экстракта. Навеску анализируемого экстракта массой 3 – 5 г взвешивают в колбе для омыления вместимостью 100 см3 с погрешностью не более 0,01 г, результат взвешивания записывают до второго десятичного знака, прибавляют 20 – 25 см3 раствора гидроксида калия с концентрацией 2 моль/дм3, присоединяют воздушный холодильник и нагревают на кипящей водяной бане в течение
30 минут. Колбу охлаждают, добавляют 20 см3 дистиллированной воды и переносят содержимое колбы в делительную воронку вместимостью 250 см3 . Колбу дополнительно ополаскивают диэтиловым эфиром (20 см3); эфирный раствор также переносят в делительную воронку. Содержимое воронки перемешивают легким встряхиванием, при этом неомыляемая часть анализируемого экстракта переходит в эфирный слой. Не следует применять излишне интенсивное перемешивание во избежание образования стойкой эмульсии. Массе дают отстояться до полного разделения слоев. Извлечение неомыляемых веществ из водного слоя проводят 3 – 4 раза порциями диэтилового эфира по 20 – 30 см3. Эфирные экстракты объединяют, переносят в делительную воронку и промывают дистиллированной водой порциями по 20 – 30 см3 до нейтральной реакции промывных вод по фенолфталеину. Промытый экстракт высушивают безводным сульфатом натрия, фильтруют во взвешенную колбу и взвешивают с погрешностью не более 0,01 г. Растворитель отгоняют на водяной бане, после чего колбу снова взвешивают и рассчитывают массовую долю неомыляемых веществ в исходном растительном экстракте.
|
|
Выделенную неомыляемую часть экстракта используют для колориметрического определения токоферолов.
7.2.1.2 Методика колориметрического определения токоферолов. Навеску неомыляемой части экстракта массой 0,2 – 0,5 г взвешивают в стакане вместимостью 50 см3 с погрешностью не более 0,0002 г, результат взвешивания записывают до четвертого десятичного знака, добавляют
2 см3 гексана и количественно переносят раствор в мерную колбу вместимостью 25 см3, ополаскивая стакан несколькими порциями гексана. В колбу добавляют 3,5 см3 раствора а, а1 – дипиридила с массовой долей основного вещества 0,5 % и постепенно, по каплям при перемешивании приливают 1 см3 раствора хлорида железа с массовой долей FeCl3 0,2 %. Смесь выдерживают в темном месте в течение 10 минут, после чего объем раствора доводят до метки абсолютным этанолом. Интенсивность окраски полученного рабочего раствора измеряют при длине волны 490 нм. В качестве раствора сравнения используют такую же смесь реактивов (2 см3 гексана, 3,5 см3 раствора а, а1 – дипиридила, 1 см3 раствора хлорида железа и абсолютный спирт до объема 25 см3 ), как и рабочем растворе, за исключением неомыляемой фракции. По величине оптической плотности, используя калибровочный график, определяют концентрацию токоферолов в рабочем растворе в
|
|
мг / см3 .
7.2.1.3 Обработка результатов анализа.Вначале рассчитывают массовую долю Х1, %, неомыляемых веществ в экстракте
Х1 = (g/m)∙100, (7.1)
где g - масса выделенной неомыляемой части экстракта, г;
m - масса исходной навески экстракта, г
Массовую долю Х11, %, токоферолов в неомыляемой части экстракта находят по формуле
Х11 = a∙V/10∙p, (7.2)
где а - концентрация токоферолов в рабочем растворе, мг/см3 ;
V - объем рабочего раствора, см3 ; 
р - масса пробы неомыляемой части экстракта, г
Массовую долю Х, %,токоферолов в анализируемом экстракте рассчитывают по значениям Х1 и Х11
Х = Х1 ∙ Х11/100 (7.3)
За окончательный результат принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, допустимые расхождения между которыми при доверительной вероятности 0,95 не должны превышать 0,01%.
7.2.1.4 Задание
изучить методику определения токоферолов в растительных экстрактах;
- определить массовую долю токоферолов в одном из экстрактов.
7.2.2 Определение каротиноидов (провитамина А)
Метод основан на выделении каротиноидов из анализируемого экстракта с помощью бумажной хроматографии с последующим количественным определением суммы каротиноидов колориметрическим методом.
7.2.2.1 Методика анализа.Навеску анализируемого экстракта массой 0,1 – 0,8 г взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г, добавляют 1-5 см3 диэтилового эфира и добиваются полного растворения экстракта. Раствор наносят на стартовую линию полоски хроматографической бумаги размером 10 х 25 см с помощью капилляра. Стартовая линия проводится на расстоянии 3 – 5 см от нижнего края полоски и 1 см от боковых сторон. Полоску бумаги с нанесенным экстрактом помещают в камеру для восходящей бумажной хроматографии. На дно камеры предварительно наливают слой гексана для насыщения атмосферы парами гексана. Стенки камеры оборачивают черной бумагой, чтобы избежать разрушения каротиноидов под воздействием света. Хроматографическое разделение проводят в течение 1 – 2 ч, добиваясь поднятия фронта растворителя на 15 – 20 см, после чего бумагу вынимают и вырезают из нее полоску желтого цвета, где находятся каротиноиды (ширина полоски 0,8 – 1 см). Полоску измельчают и экстрагируют каротиноиды гексаном, повторяя операцию до полного обесцвечивания бумаги. Экстракты переносят в мерную колбу объемом 25 см3, доводят до метки гексаном и определяют оптическую плотность раствора при длине волны 420 нм.
|
|
По величине оптической плотности, используя калибровочный график, находят концентрацию А каротиноидов в гексановом растворе в мкг/см3 .
7.2.2.2 Обработка результатов анализа.Массовую долю Х, %,каротиноидов в анализируемом экстракте рассчитывают по формуле
Х = A∙V/m∙104 ,(7.4)
где V - объем гексанового раствора, полученного при экстракци
каротиноидов из полоски хроматографической бумаги, см3
m - масса навески экстракта, г.
За окончательный результат принимают среднее арифметическое из двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми при доверительной вероятности 0,95 не должно превышать 0,1 %.
7.2.2.3 Задание
- изучить методику определения каротиноидов в растительных эктрактах;
- определить массовую долю каротиноидов в одном из экстрактов.