АВТОМАТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ КЛЕТОК КРОВИ

В настоящее время для исследования крови в КДЛ широко используются различные гематологические анализаторы, что позволяет повысить производительность труда в лаборатории, увеличить точность результатов, получить дополнительные параметры, дающие новую диагностическую информацию. Но, вместе с тем, они не исключают традиционных методов микроскопического исследования крови.

Все многообразие гематологических приборов можно условно разделить на 3 класса. Первый класс – полуавтоматические счетчики клеток крови, определяющие обычно от 4-х до 10 параметров (количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, концентрацию гемоглобина, гематокрит, расчетные эритроцитарные индексы). В анализаторах первого класса используется кондуктометрический метод, основанный на измерении разницы электропроводности клеток крови и разбавляющей жидкости.

Второй класс - автоматические анализаторы, проводящие анализ цельной крови и определяющие до 20 параметров. Они дополнительно определяют расчетные показатели тромбоцитов, строят гистограммы (графические изображения) распределения лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов по объему, а также проводят частичную дифференцировку лейкоцитов на гранулоциты, лимфоциты и «средние клетки», состоящие преимущественно из эозинофилов и базофилов.

Третий класс – высокотехнологичные гематологические анализаторы, позволяющие проводить развернутый анализ крови, включая полный подсчет лейкоцитарной формулы. В основе работы приборов этого класса лежит комбинация нескольких методов: кондуктометрического, лазерного, цитохимического и др.

Работа с гематологическими анализаторами требует предельной аккуратности и точности, строгого соблюдения требований соответствующих инструкций к прибору. Большинство ошибок при работе с гематологическими анализаторами связано с техническими погрешностями: низкое качество разводящих жидкостей, погрешности при заборе крови, грязная посуда, удлинение интервала времени между забором крови и подсчетом клеток и т.д. Однако существуют ошибки, связанные с особенностями патологических образцов крови.

Концентрация гемоглобина (HGB) в большинстве гематологических анализаторов определяется гемиглобинцианидным методом. Некоторые особенности крови при заболеваниях могут привести к завышению результатов определения гемоглобина: лейкоцитоз более 30·10⁹/л, парапротеинемия, гипербилирубинемия, внутрисосудистый гемолиз эритроцитов и др.

Количество эритроцитов в единице объема крови (RBC) гематологическими анализаторами определяется кондуктометрическим методом. Ошибки при подсчете количества эритроцитов, связанные с особенностями исследуемой крови, могут привести как к занижению результатов (гемолиз и агглютинация эритроцитов, наличие большого количества микроцитов и шизоцитов), так и к завышению результатов исследования (наличие патологически крупных тромбоцитов или их агрегатов, высокого лимфоцитоза с преобладанием малых лимфоцитов).

Средний объем эритроцита (MCV). Величина MCV выражается в фемтолитрах (фл). 1 фл = 1мкм³. Раньше для характеристики размеров эритроцитов крови проводили прямое измерение их диаметра с помощью окуляр-микрометра и затем строили график распределения эритроцитов по размерам (кривую Прайс-Джонса). Такое исследование является чрезвычайно трудоемким, требует измерения диаметра 500 эритроцитов с последующим расчетом процентного содержания эритроцитов определенного диаметра, но не позволяет точно характеризовать истинные размеры эритроцитов, так не учитывает формы клеток. В настоящее время точную характеристику объема эритроцитов получают на гематологических автоматах по величине MCV.

Таблица 27

Параметры, определяемые гематологическими анализаторами

Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (MCHC) отражает количество граммов гемоглобина в 100мл эритроцитов, то есть отношение веса к объему эритроцитов. Это наиболее стабильный показатель, так как максимально возможная загрузка эритроцитов гемоглобином составляет 36г/100мл. Показатель используется как индикатор ошибки при подготовке пробы или в процессе работы прибора. Увеличение его более 36 г/дл свидетельствует о технических погрешностях. Диагностического значения он не имеет.

Коэффициент анизотропии эритроцитов (RDW) отражает различия в объеме эритроцитов, то есть степень анизоцитоза. Этот показатель дает количественную оценку разброса эритроцитов по объему. Нормальные величины коэффициента свидетельствуют о наличии в пробе крови однородной по объему популяции эритроцитов (нормо-, микро- или макроцитов). Увеличение коэффициента указывает на присутствие в крови разных по объему эритроцитов. В связи с этим коэффициент анизотропии следует оценивать только параллельно с анализом гистограммы эритроцитов и морфологическим исследованием мазка крови.

Эритроцитарная гистограмма – это графическое распределение эритроцитов по объему в результате анализа нескольких тысяч частиц объемом от 40фл до 240фл. Эритроцитарные гистограммы четко показывают наличие микроцитов, макроцитов или смешанной популяции эритроцитов.

Количество тромбоцитов (PLT) в автоматических счетчиках определяется прямым кондуктометрическим методом. Просчитываются частицы объемом 2-30фл. При этом возможно занижение результатов из-за агрегации тромбоцитов, наличия макроформ тромбоцитов, прилипания тромбоцитов к лейкоцитам. Завышение количества тромбоцитов отмечается при большом количестве микроцитов и шизоцитов.

Количество лейкоцитов (WBC) гематологическим анализатором может быть заниженным при наличии агглютинатов лейкоцитов и завышенным – при наличии патологических макроформ тромбоцитов, агрегатов тромбоцитов, парапротеинемии и др.

Большинство гематологических анализаторов дифференцирует лейкоциты в зависимости от их объема на два, три, пять и более видов лейкоцитов. Результаты исследования отражаются в лейкоцитарных гистограммах и в цифровом выражении относительного и абсолютного количества различных видов лейкоцитов. Точная дифференцировка лейкоцитов на отдельные популяции, выявление тонких морфологических изменений возможны только с помощью микроскопического исследования окрашенного мазка крови. Дифференцированный подсчет лейкоцитов гематологическим анализатором – это скрининг, при котором все патологические результаты подлежат последующему микроскопическому исследованию.

Контрольные вопросы по теме «Автоматические методы исследования клеток крови»

1. Преимущества гематологических анализаторов по сравнению с традиционными методами исследования.

2. Принцип подсчета клеток крови на автоматических анализаторах.

3. Какие гематологические показатели определяют автоматические анализаторы крови?

4. Особенности работы на гематологических анализаторах.

5. Причины ошибок при исследовании крови на автоматических анализаторах.

6. Что такое эритроцитарная гистограмма? Её клиническое значение.

7. Точность подсчета лейкоцитарной формулы на гематологических анализаторах.

8. Почему подсчет лейкоцитарной формулы на анализаторах может использоваться только в качестве скрининга?

9. Каким методом следует подсчитывать лейкоцитарную формулу у гематологических больных?

10. Какие дополнительные параметры крови, помимо традиционных, определяют на автоматических анализаторах?

Глава 3

СХЕМА КРОВЕТВОРЕНИЯ

Согласно современному учению о гемопоэзе, все клетки крови происходят от одной родоначальной клетки, которая путем последовательных направленных изменений превращается в зрелые эритроциты, лейкоциты и тромбоциты. По степени зрелости форменные элементы крови делятся на 6 классов. Самыми молодыми являются клетки I-IV классов, которые называются клетки-предшественники. К V классу относятся созревающие клетки и к VI классу – зрелые клетки крови.

I класс представлен стволовыми полипотентными клетками-предшественниками [от лат. poly много + potentia способность], из которых развиваются все клетки крови. Стволовые клетки способны и к делению, и к длительному самостоятельному существованию. В состоянии деления находится около 20% стволовых клеток; остальные пребывают в покое и начинают делиться в случае необходимости.

II класс. При делении стволовых клеток образуются клетки II класса, которые могут быть двух видов: предшественники лимфопоэза и предшественники миелопоэза. Из предшественников лимфопоэза в дальнейшем образуются Т- и В-лимфоциты и плазмоциты, а из предшественника миелопоэза – все остальные клетки крови. Клетки II класса являются ограниченно полипотентными, так как могут дать начало только лимфопоэзу или только миелопоэзу.

III класс. В ходе дальнейшего деления клетки II класса дают так называемые унипотентные клетки-предшественники [от лат. unita единство], каждая из которых является родоначальником определенного ряда клеток. К клеткам III класса относятся: предшественник В-лимфоцитов; предшественник Т-лимфоцитов; предшественник гранулоцитов и моноцитов – КОЕ-ГМ (колониеобразующая единица гранулоцитов и моноцитов); предшественник эритроцитов – КОЕ-Э (колониеобразующая единица эритроцитов); предшественник тромбоцитов – КОЕ-МГЦ (колониеобразующая единица мегакариоцитов).

IV класс представлен бластными клетками [от лат. blastos зародыш]. Различают 7 разновидностей бластных клеток: Т-лимфобласт, В-лимфобласт, плазмобласт (иммунобласт), монобласт, миелобласт, эритробласт, мегакариобласт.

V класс составляют созревающие клетки с общим для всех названием «цит». Разные клетки V класса проделывают неодинаковое число делений. Так, лимфоциты и моноциты образуются из соответствующих «бластов», проходя всего одну промежуточную стадию: соответственно пролимфоцита и промоноцита [лат. pro перед]. Кровяные пластинки – тромбоциты образуются из мегакариобластов через два промежуточных звена: промегакариоцита и мегакариоцита. Гранулоциты имеют четыре стадии созревающих клеток:

- промиелоциты (нейтрофильный, эозинофильный, базофильный);

- миелоциты (нейтрофильный, эозинофильный, базофильный);

- метамиелоциты (нейтрофильный, эозинофильный, базофильный) [лат. meta после];

- палочкоядерные гранулоциты: нейтрофил, эозинофил, базофил.

Еще большее количество ступеней созревания «бластов» имеют эритроциты. Это последовательно: пронормоцит, нормоцит базофильный, нормоцит полихроматофильный, нормоцит оксифильный, ретикулоцит. Деление нормоцитов проводится в соответствии с их окраской, то есть степенью насыщенности гемоглобином.

Особый путь созревания имеют плазмоциты. Они образуются в периферических органах кроветворения (лимфоцитах, селезенке) из зрелых лимфоцитов. Под влиянием чужеродных белков В-лимфоциты превращаются сначала в плазмобласты, а затем – в проплазмоциты и плазмоциты, продуцирующие антитела и обеспечивающие гуморальный иммунитет. Однако в норме в периферической крови плазмоциты (плазматические клетки) не обнаруживаются, а содержатся только в тканях.

VI класс - зрелые клетки крови: В- и Т-лимфоциты, плазматические клетки, моноциты, нейтрофилы сегментоядерные, базофилы, эозинофилы, эритроциты, тромбоциты.

У здоровых людей клетки I-V классов обнаруживаются только в пунктатах кроветворных органов, а в периферической крови циркулируют зрелые клетки VI класса (кроме плазмоцитов) и небольшое количество созревающих клеток V класса – нейтрофилы палочкоядерные и ретикулоциты.

Молодые клетки-предшественники I-IV классов при микроскопии очень похожи, и их принадлежность к тому или иному виду определяют цитохимическими методами. Это имеет особое значение для определения варианта острого лейкоза. Начиная с V класса, клетки приобретают характерные особенности, позволяющие дифференцировать их при световой микроскопии.