Принцип. Определяется длительность кровотечения из капилляров после прокола кожи скарификатором.
Ход работы. Определение может проводиться при проколе пальца или мочки уха. Глубина прокола должна быть не менее 3мм – только при этом условии кровь из ранки выделяется самопроизвольно, без нажима. Сразу после прокола включают секундомер. Первую каплю крови не удаляют ватой, как обычно, а прикасаются к ней фильтровальной бумагой, которая впитывает кровь. Далее снимают фильтровальной бумагой выступающие капли крови через каждые 30 секунд. Постепенно капли крови становятся все меньше. Когда следы крови перестанут оставаться, секундомер выключают.
Источники ошибок: недостаточно глубокий прокол, поспешное снятие капель крови, прикосновение фильтровальной бумагой к коже, что способствует остановке кровотечения.
Нормальные величины. Длительность кровотечения по Дуке составляет 2-4 минуты.
Диагностическое значение. Практическое значение имеет удлинение времени кровотечения, что наблюдается при тромбоцитопениях, заболеваниях печени, недостаточности витамина С, злокачественных опухолях и др. При гемофилии этот тест остается в пределах нормы.
Определение времени свертывания капиллярной крови (по Сухареву)
Принцип. Определяется время образования сгустка крови в капилляре Панченкова.
Ход работы. Прокалывают кожу, удаляют первую каплю крови. Набирают самотеком кровь в чистый сухой капилляр Панченкова до метки «70-75» (25-30делений) без пузырьков воздуха и включают секундомер. Наклоном капилляра перемещают кровь на середину трубки. Через каждые 30 секунд наклоняют капилляр поочередно вправо и влево под углом 45 градусов. При этом капилляр необходимо плотно держать в руке, чтобы сохранить более высокую и постоянную температуру свертывающейся крови. В начале исследования кровь свободно перемещается внутри капилляра, а затем ее движение замедляется и появляется «хвостик» из нитей фибрина – это говорит о начале свертывания крови. При полном свертывании кровь перестает двигаться. Моменты начала и конца свертывания крови засекают по секундомеру.
|
|
Нормальные величины. Начало свертывания: 30 секунд – 2 минуты;конец свертывания: 3-5 минут.
Диагностическое значение. Удлинение времени свертывания крови наблюдается при тяжелой недостаточности факторов, участвующих во внутреннем пути образования протромбиназы, дефиците протромбина и фибриногена, а также при передозировке гепарина.
8.4. КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫПО ТЕМЕ «ГЕМОРРАГИЧЕСКИЕ ДИАТЕЗЫ»
1. Что обозначает термин «Геморрагические диатезы»?
2. На какие группы делятся геморрагические диатезы?
3. Как проводится лабораторная диагностика тромбоцитопении, тромбоцитопатии, коагулопатии, вазопатии?
4. Морфология тромбоцитов.
5. Функции тромбоцитов.
6. Методы подсчета количества тромбоцитов в крови.
7. Нормальное количество тромбоцитов в крови.
8. Причины тромбоцитопений и тромбоцитозов.
9. Какой механизм гемостаза характеризует длительность кровотечения и время свертывания капиллярной крови?
10. Длительность кровотечения в норме и при различных видах геморрагических диатезов.
11. Время свертывания капиллярной крови в норме и при тромбоцитопении, коагулопатиях, вазопатиях.
|
|
ГЛАВА 9
ГРУППЫИ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ КРОВИ
На поверхности клеток крови человека имеется большое количество структур, которые относятся к антигенам, то есть при попадании в организм другого человека стимулируют выработку антител. Их называют также изоантигенами [от греч. isos одинаковый], так как они встречаются у представителей одного вида, в отличие от гетероантигенов [от греч. heteros иной, другой], которые имеются у других видов млекопитающих.
Основатель науки о группах крови Карл Ландштейнер в 1901г. обнаружил различия в крови людей, которые впоследствии были обозначены как группы крови системы АВ0. Долгое время сведения о групповых различиях относились только к эритроцитам. Позднее стало известно, что такие различия присущи и другим компонентам крови: лейкоцитам, тромбоцитам, белкам плазмы. К настоящему времени открыто 26 систем антигенов эритроцитов (АВ0, Rh-резус, MNS, Kell, Lewis и др.), включающих 270 антигенов, системы антигенов лейкоцитов (HLA, NA, NB, NC), тромбоцитов (HPA) и 10 систем белков плазмы. С позиций современной имуногематологии, каждый человек имеет свою собственную уникальную группу крови - набор антигенов, которые могут явиться причиной иммунологической несовместимости при переливании крови и её компонентов, беременности, трансплантации органов.
Однако в практической медицине под группами крови традиционно понимают сочетания только антигенов эритроцитов системы АВ0, так как именно они в первую очередь определяют совместимость при переливании крови.
9.1. ГРУППЫКРОВИ СИСТЕМЫАВ0
Группа крови (в традиционном понимании) – это сочетание антигенов эритроцитов системы АВ0, которое генетически предопределено и не изменяется в течение жизни.
|
|
К системе групп крови АВ0 относятся два групповых антигена (агглютиногена) - А и В и два вида антител к ним, которые в настоящее время принято обозначать анти-А и анти-В антитела взамен использовавшихся ранее α- и β- изогемагглютининов.
Уникальность системы АВ0 состоит в том, что в плазме у неиммунных людей имеются естественные антитела к отсутствующему на эритроцитах антигену. Во всех других системах эритроцитарных антигенов антитела не являются врожденными и могут появиться только вследствие антигенной стимуляции (переливания крови, беременности).
Различные сочетания антигенов и антител системы АВ0 образуют 4 группы крови, которые по международной номенклатуре обозначаются буквами по названию имеющихся антигенов: 0, А, В и АВ.
Таблица 35
Группы крови системы АВ0
| Международное обозначение группы крови | Полная групповая формула крови системы АВ0 | Характеристика группы |
| 0 αβ (I) | На эритроцитах антигенов А и В нет. В плазме содержатся агглютинины α и β. | |
| А | А β (II) | На эритроцитах содержится антиген А; в плазме - агглютинин β. |
| В | В α (III) | На эритроцитах содержится антиген В; в плазме - агглютинин α. |
| АВ | АВ 0 (IV) | На эритроцитах содержатся антигены А и В; в плазме агглютининов α и β нет. |
Чаще у людей бывает первая (35%) и вторая группа крови (35-40%), реже – третья (15-20%) и четвертая (5-10%) группы.
В большинстве случаев антиген А обладает большой антигенной силой, то есть дает с антителами анти-А выраженную реакцию агглютинации. У 3-5% людей со второй группой и у 25-30% людей с четвертой группой крови антиген А имеет слабые антигенные свойства. Его обозначают как антиген А2. Слабые виды антигена А дают с антителами анти-А слабую агглютинацию (мелкую, позднюю), что может привести к ошибкам при определении группы крови.
Антитела анти-А так же, как антиген А, могут быть представлены двумя разновидностями, различающимися по времени действия – анти-А1 и анти-А2. Антитела анти-А1 относятся к антителам быстрого действия, а анти-А 2 - замедленного действия. Поэтому при определении группы крови исследование необходимо проводить в течение 5 минут.
В сыворотке у многих новорожденных групповые антитела отсутствуют. Они появляются обычно в течение первых месяцев жизни, и титр их постепенно нарастает, достигая максимума в возрасте 10-20 лет. В старости и при иммунодефицитных состояниях титр антител может снижаться.
Клиническое значение групп крови очень велико, так как дает возможность без осложнений переливать кровь и её компоненты от одного человека (донора) другому человеку (реципиенту).
В настоящее время для переливания используют только компоненты крови. Цельную кровь переливают в исключительных случаях – по жизненным показаниям и при отсутствии необходимых гемокомпонентов. Чаще всего для трансфузий применяют эритроцитную массу и плазму, желательно той же группы крови, к которой относится реципиент. В случае необходимости и в небольших количествах (до 500мл) возможно переливание эритроцитной массы не одногруппной, а совместимой с реципиентом крови.
При переливании крови и эритроцитной массы неукоснительно придерживаются правила: эритроциты донора не должны содержать антигена, соответствующего антителам реципиента, так как в этом случае происходит агглютинация и массивный гемолиз введенных донорских эритроцитов - опасное для жизни гемотрансфузионное осложнение. Небольшое количество эритромассы 0(I) группы крови, эритроциты которой не содержат антигенов А и В, можно перелить реципиенту с любой группой крови, поэтому лиц с I группой крови называют «универсальные доноры». До 500 мл эритроцитной массы А(II) и В(III) групп крови можно перелить, кроме одногруппных, только лицам с АВ(IV) группой крови. Эритроцитная масса АВ(IV) группы крови даже в небольших количествах не может быть перелита ни одной группе, кроме IV, зато в нее можно перелить небольшое количество эритромассы всех групп. Поэтому лиц с АВ(IV) группой крови называют «универсальными реципиентами».
При переливании плазмы крови учитывают антитела донора. Плазма донора не должна содержать антител, направленных против антигенов реципиента. Плазма 0(I) группы крови содержит оба агглютинина – α и β и ее нельзя переливать ни в какую группу крови, кроме I. Небольшое количество плазмы II и III групп крови может быть перелито только в 0(I) и одноименные группы. Плазма АВ(IV) группы не содержит агглютининов и может быть перелита (в небольшом количестве) людям с любой группой крови.
9.1.2. Методы определения группы крови
Определение групп крови проводится в соответствии с приказом МЗ РФ №2 от 9.01.98 «Об утверждении инструкций по иммуносерологии».
В настоящее время для определения группы крови используются 2 группы методов.
1. Методы, в основе которых лежит реакция агглютинации:
- прямая реакция с поликлональными реагентами (стандартными изогемагглютинирующими сыворотками I-III групп) или с моноклональными реагентами (цоликлонами анти-А и анти-В);
- перекрестный метод.
2. Методы гелевой технологии (сочетание реакции агглютинации и гель-
фильтрации).
Определение группы крови системы АВ0 при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток
Принцип. Выявляют агглютиногены эритроцитов с помощью реакции агглютинации со стандартными сыворотками, содержащими агглютинины. По наличию или отсутствию агглютиногенов в исследуемых эритроцитах судят о групповой принадлежности крови.
Реагенты.
1. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки 0(I), А(II) и В(III) групп двух разных серий каждой группы.
2. Стандартная изогемагглютинирующая сыворотка АВ(IV) группы.
3. Изотонический раствор хлорида натрия - 0,9% раствор NaCl.
Специальное оснащение: белая пластинка со смачиваемой поверхностью, глазные пипетки, химические стаканчики, стеклянная палочка, вата, спирт, скарификаторы.
Подготовительная работа. Определение групп крови должно производиться при хорошем освещении и при температуре 15-25ºС. Флаконы со стандартными сыворотками ставят в специальный штатив в следующем порядке: слева – стандартные сыворотки 0(I) группы (одна сзади другой), в середине – стандартные сыворотки А(II) группы и справа – стандартные сыворотки В(III) группы. Отдельно ставят стандартную сыворотку АВ(IV) группы крови, употребляемую в качестве дополнительного контроля. В каждый флакон со стандартной сывороткой опускают сухую чистую глазную пипетку. Для промывания стеклянных палочек в химический стаканчик наливают воду. В стаканчик с изотоническим раствором опускают глазную пипетку.
Техника определения группы крови при помощи стандартных сывороток. На верхней части пластинки пишут фамилию и инициалы человека, у которого определяют группу крови. Делят стеклографом пластинку на 6 частей: по 3 в 2 ряда. В левом столбце сверху подписывают анти-А+В; в среднем столбце – анти-В; в правом столбце – анти-А. Под соответствующими обозначениями на пластинку с помощью глазной пипетки наносят по одной большой капле (0,1мл) изогемагглютинирующей сыворотки 1-3 групп двух разных серий – всего 6 капель. Каждую пипетку сразу же опускают в тот же флакон с сывороткой, из которого она была взята. Кровь для исследования берут из пальца. Помещают одну каплю крови в лунку предметного стекла или на нижнюю часть пластинки. Наносят чистой сухой стеклянной палочкой маленькие капли крови рядом с каждой каплей стандартной сыворотки. При этом капли крови должны быть примерно в 10 раз меньше капель сывороток. Перемешивают капли стандартных сывороток с находящимися рядом каплями крови стеклянной палочкой. После размешивания каждой капли стеклянную палочку промывают в стаканчике с водой и насухо вытирают ватой или фильтровальной бумагой. Замечают время. В течение 3 минут периодически покачивают пластинку. Через 3 минуты в те капли, где наступила агглютинация, добавляют по 1 капле изотонического раствора NaCl и периодически покачивают пластинку еще в течение 2 минут. Через 5 минут после перемешивания капель оценивают результаты реакции.
Трактовка результатов реакции. Реакция агглютинация в каждой капле может быть положительной или отрицательной. При положительной реакции, то есть при наличии агглютинации, в смеси появляются видимые на глаз красные зерна склеенных эритроцитов. Сыворотка при этом полностью или частично обесцвечивается. При отрицательной реакции, то есть отсутствии агглютинации, жидкость остается равномерно окрашенной в красный цвет. Результаты реакций в каплях с сывороткой одной и той же группы должны совпадать. Если агглютинация наступила во всех каплях, то есть исследуемая кровь относится к АВ(IV) группе, то для исключения неспецифической агглютинации дополнительно проводят контрольное исследование со стандартной сывороткой АВ(IV) группы. Для этого на пластинку наносят 1 большую каплю стандартной сыворотки АВ(IV) группы и рядом с ней – маленькую каплю исследуемой крови. Сыворотку и кровь перемешивают и наблюдают за ходом реакции в течение 5 минут, периодически покачивая пластинку. Отсутствие агглютинации в этой капле подтверждает АВ(IV) группу исследуемой крови. Появление агглютинации с сывороткой АВ(IV) группы говорит о неспецифическом характере наблюдающейся агглютинации.
Таблица 36
Оценка результатов определения группы крови при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток
| Изогемаггютинирующие сыворотки | Группа исследуемой крови | ||
| Анти-А+В | Анти-В | Анти-А | |
| - - | - - | - - | 0 (I) |
| + + | - - | + + | A (II) |
| + + | + + | - - | B (III) |
| + + | + + Контроль с сывороткой АВ(IV) - | + + | AB (IV) |
(-) отсутствие агглютинации
(+) наличие агглютинации.
Определение группы крови системы АВ0 с помощью цоликлонов анти-А и анти-В
Принцип. Такой же, как при определении групп крови со стандартными сыворотками – то есть выявление агглютиногенов в исследуемых эритроцитах с помощью агглютининов, содержащихся в цоликлонах анти-А и анти-В.
Реагенты: цоликлон анти-А (розового цвета) и цоликлон анти-В (голубого цвета).
Цоликлоны анти-А и анти-В содержат моноклональные антитела анти-А и анти-В (иммуноглобулины класса М) и не содержат антитела иной специфичности. Цоликлоны представляют собой разведенную асцитную жидкость мышей – носителей гибридом анти-А и анти-В.
Техника определения. Определение групп крови должно производиться при хорошем освещении и при температуре 15-25ºС. Определение может производиться в нативной крови с консервантом или в крови без консерванта, в том числе взятой из пальца. Размечают пластинку на 2 части. Левую часть пластинки подписывают «анти – А», правую – «анти – В». Наносят по одной большой (0,1мл) капле цоликлонов анти-А и анти-В под соответствующими обозначениями. Наносят по одной маленькой капле крови (в 10 раз меньшей, чем капли реагентов) рядом с каждой каплей цоликлона. Перемешивают капли крови с реагентом стеклянной палочкой, промывая после перемешивания палочку в воде и вытирая её насухо. Замечают время. Периодически покачивая пластинку, ждут 3 минуты. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-6 секунд, но оценку результатов реакции ведут через 3 минуты, чтобы не пропустить позднюю агглютинацию со слабыми разновидностями антигена А или В.
Трактовка результатов. Результат реакции может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов, видной невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты не обнаруживаются.
Таблица 37
Оценка результатов определения группы крови системы АВ0
при помощи цоликлонов анти-А и анти-В
| Результаты реакции с цоликлонами | Группа исследуемой крови | |
| анти-А | анти-В | |
| - | - | 0 (I) |
| + | - | A (II) |
| - | + | B (III) |
| + | + | AB(IV) |
(-) – отсутствие агглютинации
(+) – наличие агглютинации.
Определение группы крови системы АВ0 перекрестным методом
Принцип. Одновременное определение агглютиногенов эритроцитов исследуемой крови с помощью стандартных сывороток и агглютининов исследуемой сыворотки с помощью стандартных эритроцитов.
Реагенты.
1. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки 0(I)αβ, А(II)β и В(III)α групп двух разных серий каждой группы.
2. Стандартные эритроциты групп 0(I), А(II) и В(III).
3. Изотонический раствор хлорида натрия - 0,9% NaCl.
Специальное оснащение: белая пластинка со смачиваемой поверхностью, глазные пипетки, химические стаканчики, стеклянная палочка, вата, спирт, скарификаторы.
Подготовительная работа. Определение групп крови должно производиться при хорошем освещении и при температуре 15-25ºС. Флаконы со стандартными сыворотками ставят в специальный штатив в следующем порядке: слева – стандартные сыворотки 0(I) группы (одна сзади другой), в середине – стандартные сыворотки А(II) группы и справа – стандартные сыворотки В(III) группы. В каждый флакон со стандартной сывороткой опускают сухую чистую глазную пипетку. В штатив устанавливают пробирки или флаконы со стандартными эритроцитами в следующем порядке: слева группы 0(I), в середине – группы А(II) и справа – группы В(III). Для промывания стеклянных палочек в химический стаканчик наливают воду. В стаканчик с изотоническим раствором NaCl опускают глазную пипетку.
Техника определения. Кровь для исследования берут из вены или пальца в сухую пробирку. Кровь центрифугируют или оставляют стоять на 20-30 минут для отделения сыворотки. Для лучшего отделения сыворотки следует через 3-5 минут отделить сверток от стенок пробирки, обведя его стеклянной палочкой. Делают на пластинке обозначения стеклографом в соответствии с таблицей. В верхней части пластинки у соответствующих обозначений наносят по одной большой капле (0,1мл) стандартных изогемагглютинирующих сывороток I-III групп двух разных серий. В нижней части пластинки у соответствующих обозначений наносят по одной маленькой капле (0,01мл) стандартных эритроцитов I-III групп крови. Из пробирки с исследуемой кровью осторожно, чтобы не взболтать эритроциты, пипеткой отсасывают сыворотку и наносят её по одной большой капле (0,1мл) на капли стандартных эритроцитов. Со дна пробирки этой же пипеткой набирают эритроциты и наносят их по одной маленькой капле (0,01мл) рядом с каждой их 6 капель стандартных сывороток. Перемешивают стеклянной палочкой во всех 9 каплях сыворотку с эритроцитами. После перемешивания каждой капли палочку промывают в воде и насухо вытирают. Замечают время. В течение 3 минут периодически покачивают пластинку. Через 3 минуты в те капли, где наступила агглютинация, добавляют по 1 капле изотонического раствора NaCl и периодически покачивают пластинку еще в течение 2 минут. Через 5 минут после перемешивания капель оценивают результаты реакции.
Таблица 38
Оценка результатов определения групп крови перекрестным методом
| Изогемагглютинирующие сыворотки | ||
| анти А+В - - | анти-В - - | анти-А - - |
| Стандартные эритроциты | ||
| - | А + | В + |
| Исследуемая кровь относится к 0(I) группе |
| Изогемагглютинирующие сыворотки | ||
| анти А+В + + | анти-В - - | анти-А + + |
| Стандартные эритроциты | ||
| - | А - | В + |
| Исследуемая кровь относится к A(II) группе |
| Изогемагглютинирующие сыворотки | ||
| анти А+В + + | анти-В + + | анти-А - - |
| Стандартные эритроциты | ||
| - | А + | В - |
| Исследуемая кровь относится к B(III) группе |
| Изогемагглютинирующие сыворотки | ||
| анти А+В + + | анти-В + + | анти-А + + |
| Стандартные эритроциты | ||
| - | А - | В - |
| Исследуемая кровь относится к AB(IV) группе |
Трактовка результатов. Реакция агглютинация в каждой капле может быть положительной или отрицательной. При положительной реакции, то есть при наличии агглютинации, в смеси появляются видимые на глаз красные зернышки склеенных эритроцитов. Сыворотка при этом полностью или частично обесцвечивается. При отрицательной реакции, то есть отсутствии агглютинации, жидкость остается равномерно окрашенной в красный цвет.
Результаты реакций, полученных при помощи стандартных сывороток и стандартных эритроцитов, должны совпадать, то есть указывать на содержание агглютиногенов и агглютининов, соответствующих одной и той же группе крови.
9.2. РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ КРОВИ
Система антигенов эритроцитов Резус, вторая по активности после системы АВ0, открыта в 1940 году К. Ландштейнером и Винером. Свое название антиген получил от обезьяны Macacus Rhesus, у которой он был обнаружен. Резус-фактор содержится на эритроцитах, лейкоцитах, тромбоцитах, в разных органах и тканях, а также в тканевой жидкости и околоплодных водах человека. Образование антигена резус начинается с 8-10 недели эмбрионального развития.
В настоящее время система Резус насчитывает более 75 антигенов, пять из которых являются клинически значимыми: D, C, 
, Е, е. Отсутствие антигена D обозначают буквой d. Самым сильным антигеном системы Резус является антиген D, который и подразумевается под термином «резус-фактор». Именно по наличию или отсутствию на эритроцитах антигена D кровь делится на резус-положительную (Rh+) и резус-отрицательную (rh-). Различные сочетания антигенов резус в крови отдельных людей составляют 28 групп (фенотипов), которые представляют собой набор антигенов резус – по одному от каждого родителя, (например, СсDеe, ССddЕе). Четырнадцать фенотипов содержат антиген D и являются резус – положительными, а другие 14 не содержат антигена D и их относят к резус – отрицательным. Однако такая оценка резус-принадлежности крови применяется лишь для реципиентов. Доноры же считаются rh(-), если у них на эритроцитах не содержится ни антиген D, ни антиген С, ни антиген Е, то есть при фенотипе ccddee. Это связано с тем, что, хотя антигены С и Е менее активны, чем D, к ним также могут вырабатываться антитела.
Количество резус-положительных и резус–отрицательных людей различается у представителей разных рас. У европеоидов, в том числе и в РФ, доля rh(-) лиц составляет в среднем 14-16%, в то время как среди монголоидов rh(-) фенотип встречается менее чем у 1% населения, и резус-конфликты у них чрезвычайно редки.
У 1-3% резус-положительных лиц на эритроцитах содержится слабый вариант антигена D (Du), который дает мелкую, сомнительную агглютинацию с антителами анти-D. В этих случаях резус-принадлежность крови реципиентов и беременных женщин оценивают как rh(-), а кровь доноров – как Rh (+).
Система Резус в отличие от системы АВ0 не имеет естественных антител. Антитела антирезус появляются только после иммунизации резус-отрицательного организма в результате переливания резус-положительной крови или беременности резус-положительным плодом. Антитела к резус-антигенам сохраняются несколько лет, иногда всю жизнь. В большинстве случаев титр антител со временем постепенно снижается, но при повторном попадании в организм резус-антигена резко (лавинообразно) возрастает.
Резус антитела различаются по специфичности (анти-D, анти-С, анти-Е и др.) и по серологическим свойствам (полные и неполные). Полные антитела вызывают агглютинацию эритроцитов в солевой среде при комнатной температуре, а неполные – при повышенной температуре и в коллоидной среде (при добавлении желатина, полиглюкина, сывороточного белка). Полные антитела (IgM) синтезируются в начале иммунной реакции и вскоре исчезают из крови. Неполные антитела (IgG) появляются позже и являются причиной развития гемолитической болезни новорожденных, так как проходят через плаценту и вызывают гемолиз эритроцитов плода.
Определение резус-принадлежности крови основанона реакции агглютинации эритроцитов исследуемой крови с антителами, содержащимися в реагентах антирезус. Реагенты антирезус делятся на 2 группы: с полными и неполными антителами. Реагенты, содержащие полные антитела класса IgM, дают реакцию агглютинации в солевой среде. К ним относятся цоликлоны анти-D супер, анти-С супер, анти-Е супер, стандартные сыворотки антирезус анти-D с полными антителами и др. Реагенты, содержащие неполные антитела класса IgG (цоликлон анти-D, стандартные универсальные реагенты антирезус анти-D, анти-DС, анти-DСЕ и т.д.), дают реакцию агглютинации только в коллоидной среде. В зависимости от формы содержащихся в реагенте антител определение резус-принадлежности крови проводится в разных условиях (в солевой или коллоидной среде, при комнатной температуре или при нагревании), поэтому к каждому реагенту прилагается инструкция по его использованию. В настоящее время предпочтение отдается моноклональным реагентам антирезус (цоликлонам). Для определения антигенов системы Резус используется также гелевая технология.
Определение резус-принадлежности крови при помощи цоликлона анти-D супер (анти-D IgM моноклонального реагента)
Принцип. А нтиген D исследуемых эритроцитов выявляют реакцией агглютинации в солевой среде с моноклональными антителами анти-D, содержащимися в цоликлоне анти-D супер.
Цоликлон анти-D супер изготовлен на основе культуральной жидкости клеточной гетерогибридомы, полученной в результате слияния человеческой лимфобластоидной линии и миеломной клеточной линией мыши. Реагент содержит моноклональные полные антитела анти-D класса IgM и не содержит антител иной специфичности, поэтому может быть использован для выявления антигена D в эритроцитах любой группы крови.
Реагенты: цоликлон анти-D супер; стандартные Rh(+) и rh(-) эритроциты – для контроля специфичности реакции.
Техника исследования. Определение антигена D с помощью цоликлона анти-D супер можно производить в консервированной крови, в крови, взятой без консерванта, а также в крови из пальца.
На пластину со смачиваемой поверхностью наносят большую каплю (около 0,1мл) цоликлона анти-D супер, а рядом - маленькую каплю (0,01-0,05мл) крови и смешивают кровь с реагентом стеклянной палочкой. Ждут 20-30 секунд, а затем периодически покачивают пластинку. Через 3 минуты оценивают результаты реакции.
Трактовка результатов. При наличии агглютинации кровь оценивается как резус-положительная, а при отсутствии агглютинации – как резус-отрицательная. Для контроля специфичности при каждом исследовании необходимо ставить реакцию со стандартными D-положительными и D-отрицательными эритроцитами. Результаты определения резус-принадлежности исследуемой крови учитывают как истинные только в том случае, если со стандартными резус-положительными эритроцитами реагент дал реакцию агглютинации, а со стандартными резус-отрицательными эритроцитами агглютинации нет.
Образцы крови, которые при исследовании цоликлоном анти-D супер дали отрицательный результат, необходимо дополнительно тестировать с помощью реагентов, содержащих неполные антитела IgG для выявления антигена Du (поликлональной сывороткой или моноклональным анти-D реагентом).
9.3. КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫК ГЛАВЕ «ГРУППЫИ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ КРОВИ»
1. Что означает понятие «Группа крови» в практической медицине и с позиций современной иммуногематологии?
2. Дайте характеристику групп крови системы АВ0.
3. Какими методами можно определить группу крови?
4. Какой принцип лежит в основе всех методов определения группы крови?
5. Какие реагенты используются для определения группы крови прямой реакцией?
6. Опишите результаты определения второй группы крови с помощью прямой реакции.
7. Почему перекрестный метод определения группы крови так называется?
8. Реагенты для перекрестного метода определения группы крови.
9. Результаты определения третьей группы крови перекрестным методом.
10. Что такое цоликлоны?
11. Результаты определения четвертой группы крови с цоликлонами.
12. Какие правила необходимо соблюдать при переливании эритроцитной массы и плазмы крови?
13. Какие антигены относятся к системе Резус?
14. В чем заключается различие между системами антигенов АВ0 и Резус?
15. Клиническое значение антигенов системы Резус.
16. По какому принципу кровь доноров и реципиентов относят к резус-положительной или резус-отрицательной?
17. Какие реагенты могут использоваться для определения резус-принадлежности крови?
18. Чем различаются цоликлоны анти-D и анти-D супер?
19. Что такое антиген Du? Его клиническое значение.
20. Фенотип резус-отрицательного донора.
Глава 10
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Контроль качества лабораторных исследований в КДЛ проводится в соответствии с приказом МЗ РФ № 45 от 7.02.2000 «О системе мер по повышению качества клинических лабораторных исследований в учреждениях здравоохранения РФ». Качество лабораторных исследований должно соответствовать требованиям по аналитической точности, установленным Минздравом РФ и выполняющим функцию отраслевых стандартов.
Для оценки качества исследований используется ряд понятий.
Точность измерений - качество измерений, отражающее близость их результатов к истинному значению измеряемой величины.
Погрешность измерения – отклонение результата измерения от истинного значения измеряемой величины.
Систематическая погрешность измерения – часть погрешности измерения, остающаяся постоянной или закономерно изменяющаяся при повторных измерениях одной и той же измеряемой величины.
Случайная погрешность измерения - часть погрешности измерения, изменяющаяся случайным образом при повторных измерениях одной и той же измеряемой величины.
Правильность измерений - качество измерений, отражающее близость к нулю систематических погрешностей.
Аналитическая серия - совокупность измерений лабораторного показателя, выполненных одновременно в одних и тех же условиях без перенастройки и калибровки аналитической системы.
Внутрисерийная воспроизводимость (сходимость) измерений - качество измерений, отражающее близость друг к другу результатов измерений одного и того же материала, выполненных в одной и той же аналитической серии.
Межсерийная воспроизводимость – качество измерений, отражающее близость друг к другу результатов измерений одного и того же материала, выполняемых в разных аналитических сериях.
Общая воспроизводимость – качество измерений, отражающее близость друг к другу всех измерений одного и того же материала (определяется внутрисерийной и межсерийной воспроизводимостью).
Установленное значение – метод-зависимое значение определяемого показателя, указываемое изготовителем контрольного материала в паспорте (инструкции). В связи с тем, что истинное значение измеряемой величины не может быть установлено абсолютно точно, на практике вместо термина «истинное значение» используется термин «установленное значение».
Обеспечение качества лабораторных исследований в КДЛ осуществляется системой внутрилабораторного контроля качества, при котором систематически определяются воспроизводимость и правильность исследований.
Систематическая погрешность измерения характеризует правильность измерений, которая определяется степенью совпадения среднего результата повторных измерений контрольного материала (
) и установленного значения измеряемой величины. Разность между ними называется величиной систематической погрешности или смещением, сдвигом и может быть выражена в абсолютных и относительных величинах. Систематическая погрешность, выраженная в относительных величинах, или относительная систематическая погрешность, рассчитывается в процентах по формуле 1:
В = 
(1), где
– среднее значение измерений контролируемого материала;
- установленное значение.
Случайная погрешность отражает разброс измерений и проявляется в различии между собой результатов повторных измерений определяемого показателя в одной и той же пробе. Математическая величина случайной погрешности выражается среднеквадратическим отклонением (S) и коэффициентом вариации (СV).
Среднеквадратическое отклонение (S) рассчитывается по формуле 2:
(2),
где – среднее арифметическое результатов измерений, высчитывается по формуле 3:
(3).
Коэффициент вариации (СV) рассчитывают следующим образом:
