В эукариотических клетках, многие виды многофункциональных регуляторных белков были идентифицированы, которые выполняют различные биохимические функции в ядре, цитоплазме, или оба. Недавние исследования установлены, что метаболические ферменты отображать биологические функции, отличные от их родственных функций. Пожалуй, наиболее изученные примерами являются ферментами, которые удваиваются, как глаза линзы белки необходимы для нормального зрения: лактатдегидрогеназы (кристаллического в утках и крокодилов),α-enolase (кристаллические в миноге и черепах), и argininosuccinate лиазы (кристаллический у птиц и рептилий) (Пятигорская, 2003).
Другим примером многофункционального белка является глицеральдегид 3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH), который взаимодействует с широким спектром РНК, в том числе рибосомной РНК, тРНК, молоток головкой рибозимов, и 3'нетранслируемая область многого мРНКа. Предлагаемые функции для GAPDH включают регулирование геликазной активности, тРНК и мРНК экспорта, РНК, разворачивающуюся поступательное регулирование, регулирование экспрессии вирусных генов и регуляции стабильности мРНК (Sirover, 2005). В малярийного плазмодия, было показано, что N-концевой домен GAPDH опосредует ГТФаза RAB2-зависимую набор для мембран, предполагая, что GAPDH оказывает не-гликолитического Func-ции (ы) в паразита, возможно, в том числе роль в везикулярного транспорта и биогенез апикальных органелл (Daubenberger и др., 2003).
В Т. гондиях, ряд исследований описал несколько гликолитических ферментов с функциями, отличными от их основных функций. Используя выпадающее
Анализы, Джьюетты и Сиб (2003) сообщили, что паразит альдолазы молекулярная связь между micronemal Тромбоспондином анонимного родственными белками (TRAP семьей) и ACTO-миозином двигателем, участвующим в apicomplexan паразита скольжения и вторжениях хозяина-клетки. PRP1 (parafusin-белок, связанный с 1) представляет собой ортолог фосфоглюкомутазы, который связан с micronemes (Matheissen и др., 2001, 2003).
Для того, чтобы исследовать значение Т. гондий лактата дегидрогеназы, LDH1 и LDH2, в контроле метаболического потока во время паразита отличаются-entiation, экспрессия этих двух изоферментов был сбит в манере стадии конкретных (Al-Anouti и др., 2004). Этот ЛДГ нокдаун паразиты выставлены различные скорости роста либо в тахизоите или стадии брадизоитных по сравнению с паразитами дикого типа. Их различаются-entiation процессы подрывается в пробирке, и они не смогли образовать цисты ткани в мышиной модели системы. Кроме того, все мыши, инфицированные нокдаун экспрессии LDH1 и LDH2 привели к вирулентности ослабленных паразитам, и выжили последующий вызов с родительскими паразитами в дозе, которая обычно приводит к 100-процентной смертности. Сделан вывод о том, что ЛДГ Експрес-Sion важна для клеточного цикла и отличительное Тион Т. гондий. Однако точные механизмы, с помощью которых ЛДГ нокдаун ухудшает рост и дифференцировку паразита остаются не выяснены.
8.2.5.1 Т. Gondii enolases участвуют в ядерных функций
Обширные исследования, проведенные на стадии экспрессии, специфической enolases Т. гондий с использованием поли-клональной антитела, специфичные к ENO1 и ENO2 показали, что оба енолаза изоферментов могут быть обнаружены в ядре паразита (Фергюсон и др., 2002). Накопление сигнала энолазов в ядре наблюдается в обеих тахизоитах и bradyzoites, но только в разделении zoites. Ядерный сигнал ENO1 в мозге 12-дневных мышей, зараженных обнаружен в начале тахизоитами, которые дифференцируются в bradyzoites. Експрес-цессия ENO1 в этом промежуточном zoites появляется раньше, чем у классической поверхности брадизоитной
| гликолипиду АНКЕРЫ |
Маркер, П36 или SAG4, и эти ENO1 экспрессирующих промежуточные zoites все еще выражающее тахи- zoite SAG1 поверхностный маркер. Кроме того, было обнаружено, что только тахизоит конкретные ENO2 выражаются в делящихся половых формах T.gondii, исследованных в инфицированных клетках, полученных от кошки. Взятые вместе, эти данные свидетельствуют о том, что этот романе внутриклеточной локализации можно отнести к новой ядерной деятельности, отображаемой ENO1 и ENO2.
Следует отметить, что ядерная локализация енолазов впервые была описана в человеческих клетках, где фермент связывается с промотором с-Мус и действует как репрессор транскрипции в раковых клетках (FeO и др., 2000). Связывания с ДНК-мишенью, и доменом в енолазах, который участвует в регуляции транскрипции было идентифицированы (Subramanian и Miller, 2000). Интересно, что фактор, выделенный из морозостойких мутантов Резуховидки Таль с использованием генетических подходов был идентифицирован как А. thaliana енолазы, который связывается с мотивом ДНК, сходным с описанным в человеческих клетках (Lee и др., 2002). Таким образом, можно постулировать, что Т. Gondii enolases может отобразить подобное Tran-scriptional или других ядерных функций, участвующих в процессе внутриклеточного развития паразита. Тем не мение,
Гликолипиду АНКЕРЫ