Первые эксперименты с генетическими крестами в T.gondii, были проведены с различными клонами типа III, штамм CTG, предполагая, что аналогичные подходы могут быть использованы для выполнения генетических скрещиваний штаммов различных линий. В самом деле, структура населения Т. гондий не была оценена в то время, и выбор второго штамма был основан, прежде всего, от наличия: штамм ME49, первоначально изолирован от овец в Калифорнии, была размножает в пробирке, субклонировала, и пассировать через животных (Kasper и Ware, 1985). Через штамм ME49 было показано, что представитель линии типа II. Генетический крест был проведен между ME49 штамма типа II и типа III штамма CTG, чтобы проверить возможность деформации между крестами (Сибли и др., 1992).
| УЧРЕЖДЕНИЕ ПЕРЕДАЧИ ГЕНЕТИКИ |
До проведения этого креста, штамм ME49 был принят поодиночке, хотя кошка, чтобы получить линию, которая была способна производить ооцист. Эта линия была subse-тельно клонирована с получением клона B7, который также был позже использован для завершения всей последовательности генома Т. гондий (https://ToxoDB.org). Всестороннее тестирование маркеров RFLP и последовательность Индивид-UAl генов из изолят ME49, В7 и ПТГА (независимого клон ME49; Kasper и Ware, 1985) не смогло определить какие-либо генетические различия, предполагая, что ME49 был фактически уже биологическим клон. Другая родительская линия, используемая в этом кресте была дважды устойчивым клоном, несущий КТГ маркеры лекарственной устойчивости AraAр и sinefungin (SNFр). Тканевые цисты из двух родительских линий были совместно подают в восприимчивые котенок, и ооцисты были собраны после того, как проливать.
Потомство от II ×крест III, были выделены на основе их фенотипов лекарственной устойчивости, и клоны, которые были устойчивы к одиночно либо ОЯТ или AraA были сохранены. По определению, такое потомство являются рекомбинантные из-за независимого segrega Тион этих несвязанных маркеров. Частота дважды, по одному, и не устойчивые к паразитам не был определен, так что неясно, что скорость ауткроссинга против самоопыления был в этом кресте. В общей сложности 19 потомства были получены из этого креста, и они были крионированные для того, чтобы сделать их доступными для последующего анализа. К сожалению, население рекомбинантов не было сохранено, и, задним числом, стало ясно, что это должно быть стандартным шагом после генетических скрещиваний в Т. гондиях. Второй крест между типом II и
III родословные проводили через несколько лет (ки, 1996) с использованием подобной стратегии, и этот крест известен как C96. В этом креста, родительские штаммы несли следующую лекарственную устойчивость надбавку ЕРС: тип II, ПТГ штамм был устойчив к aprinocide-N-оксид (АНО) и ФУДР, и штамм типа III КТГ был устойчив к ОЯТ, AraA, и diclazuril (ДКЛ) (Хан и др., 2005а). Рекомбинанты от этого креста доступны только из пула паразитов, который был дважды отобранных с ОЯТ и АНО, и никакая информация не доступна о ставках ауткроссинга против самоопыления (Khan и др., 2005а).
Более поздние скрещивания других родов привели в самых разных пропорциях
инбридинга против ауткроссинга, чем в оригинальных исследованиях с КТГ клонов штамма. Генетический крест между вирулентным типом напрягает GT-1 (Dubey, 1980) и не-вирулентных типа III, штамм КТГ (Пфефферкорн и др., 1977) был использован для investi ворота генетической основы острой вирулентности (Су и др., 2002) (обсуждается ниже). Штамма GT-1 был помечен с помощью сопротивления FudR путем химического мутагенеза и селекции, как описано ранее (Пфефферкорн и Пфефферкорн, 1979). Родительский штамм КТГ был ранее получен путем перекрестной-ного клон, устойчивого к AraA (AraAр) (Pfefferkorn и Pfefferkorn, 1978) с клоном устойчивостью к sinefungin (SNFр) (Пфефферкорн и Пфефферкорн, 1980), чтобы сформировать устойчивый двойной клон КТГ-AraAр-SNFр, Потомство от этого скрещивания изначально было выбрано для разделения этих сопротивлений МАРКА-ERS, чтобы получить FudRр-AraAр и ФУДРр-SNFрклоны. После этого были выделены клоны случайным образом и напечатал исключительно с помощью анализа ПЦР с использованием полиморфных генетических маркеров (Су и др., 2002). При отсутствии какого-либо выбора, практически все клоны, полученные рекомбинанты были (24 из 25 клонов испытания), с исключением III клона одного типа. Это очень высокая частота ауткроссинга не может быть объяснена просто путем формирования неэффективных гамет, поскольку каждый из штамма легко получен ооцист при скармливании кошкам поодиночке (неопубликованные данные). Анализ сегрегации apicoplast генома в этом креста могут быть информативными, как и шпилька-х годов было показано, что этот органелл геном наследуется по материнской линии (Фергюсон и др., 2005). Наблюдение, что такая крайность смещение может произойти в экспериментальных скрещиваниях может оказывать влияние на исходе генетического обмена в дикой природе. Если аналогичный уклон существует в естественных скрещиваний, это может привести к очень высокая доля генетических рекомбинантов, тем самым увеличивая генетическое разнообразие природных популяций. Демографические генетические исследования Т. гондий указывают на высокий уровень клональности, который может быть сохранен бесполым путем передачи или высокой долей самоопыления. Несмотря на это весьма клональной структуры популяции (Dardé и др, 1992;. Сибли и Бутройда, 1992a; Howe и Сибли., 1995; Айзенберг и др, 2002а)., Карманы высокого генетического разнообразия также встречаются в дикой природе (Айзенберг и др 2002a, 2002b), предполагая, что локально высокой которые могут быть сохранены с помощью бесполой передачи или высокой долей самоопыления. Несмотря на это весьма клональной структуры популяции (Dardé и др, 1992;. Сибли и Бутройда, 1992a; Howe и Сибли., 1995; Айзенберг и др, 2002а)., Карманы высокого генетического разнообразия также встречаются в дикой природе (Айзенберг и др 2002a, 2002b), предполагая, что локально высокой которые могут быть сохранены с помощью бесполой передачи или высокой долей самоопыления. Несмотря на это весьма клональной структуры популяции (Dardé и др, 1992;. Сибли и Бутройда, 1992a; Howe и Сибли., 1995; Айзенберг и др, 2002а)., Карманы высокого генетического разнообразия также встречаются в дикой природе (Айзенберг и др 2002a, 2002b), предполагая, что локально высокой
376 РАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ В классической генетике токсоплазма
темпы генетического скрещивания играют важную роль в структуре популяции T. гондий.
РАЗРАБОТКА